一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法及其应用。其特征是通过在干细胞肝向分化过程中转染miR‑142‑3p抑制剂，所述miR‑142‑3p抑制剂的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。经过干细胞的分化，转染miR‑142‑3p抑制剂，转染后分化和肝样细胞的分子和功能检测后发现在干细胞肝向分化的第8天转染10nM的miR‑142‑3p抑制剂，所述的CYP2E1和CYP3A4的酶活力最高。所述方法克服了人类干细胞来源肝样细胞解毒能力不高的劣势，有利于人工肝的开发及利用人类干细胞来源肝样细胞或人工肝进行医药研发的深入研究。

【技术实现步骤摘要】
一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法及其应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法及其应用。
技术介绍
肝病是全球性疾病，其种类多、分布范围广，而且危害程度高。在我国，肝病也是患病人数最多的疾病之一。据世界卫生组织2011年的报告称，我国每年约有50万人死于各种肝病。目前治疗晚期肝病和急重型肝病的最有效疗法是整体肝移植，但是供体肝源极度匮乏限制了其广泛应用。近年来，研究人员提出了多种方案来取代整体肝移植，如人工肝支持系统、肝细胞移植、脱细胞异体肝脏框架的细胞回填后移植以及3D打印肝脏移植等。然而，无论是人工肝开发还是其它替代方案都需要首先获得全功能性的肝细胞。这同样受到肝源匮乏的限制。因此，我们迫切需要一种不受肝源限制且能生产大量全功能性肝细胞的方法。到目前为止，多个研究小组专利技术了一系列方法将不同来源(鼠、猪、猴和人等)的不同细胞(胚胎干细胞、多能诱导干细胞、间质干细胞和成纤维细胞等)定向诱导分化成肝样细胞。这些肝样细胞能够表达肝细胞相关标志基因，还具有肝细胞的功能如分泌白蛋白、合成尿素、储存肝糖原和具有CYP2C9、CYP3A本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法，其特征在于，在干细胞肝向分化过程中转染miR‑142‑3p抑制剂，所述miR‑142‑3p抑制剂的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种提高人类干细胞来源肝样细胞解毒功能的方法，其特征在于，在干细胞肝向分化过程中转染miR-142-3p抑制剂，所述miR-142-3p抑制剂的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：1)干细胞的分化：在Matrigel-分化培养板中加入已培养好的人类干细胞悬液，加入不同的分化培养基培养分化干细胞；2)转染miR-142-3p抑制剂：于干细胞分化的第8天，配置含有miR-142-3p抑制剂的转染液体并弃去分化培养基，并滴入转染液体，于培养箱中转染；3)转染后干细胞的分化：转染后弃去所有液体，加入含有不同的分化培养基培养分化干细胞；4)步骤3)培养第18天时，收取细胞，做肝样细胞的分子和功能检测。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中Matrigel的终使用浓度为1.6％。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述干细胞为人胚胎干细胞或多功能干细胞，所述干细胞需达到80％覆盖率后方可用于制备人类干细胞悬液。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述分化培养基由低糖DMEM、MCDB-201培养基、0.25x的LA-BSA、0.25x的ITS、P/S双抗、抗坏血酸溶液、地塞米松溶液和β-巯基乙醇组成，体积比为285:200:1.25:1.25:5:5:2:0.5。6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述培养的方式为：第0天，弃去所有培养基，PBS清洗，加入含有100ng/...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈叶苗，肖靖芳，田甘，丁建强，卞修武，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆,50