构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒和方法，所述试剂盒包括sgRNA，所述sgRNA由如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示人工序列经PCR扩增、体外转录所得。所述方法包括：设计仓鼠ABCA1基因特异性打靶序列、制备cas9 mRNA和sgRNA；收集和培养仓鼠受精卵；显微注射：将sgRNA和cas9 mRNA共同注射至仓鼠受精卵的细胞质中；将显微注射后的受精卵植入代孕仓鼠体内，F0代仓鼠出生。经鉴定该方法成功构建了ABCA1基因敲除仓鼠模型，能够为研究ABCA1与冠心病的关系提供研究基础。

A Kit and Method for Establishing ABCA1 Gene Knockout Hamster Model

The invention discloses a kit and a method for constructing an ABCA1 gene knockout hamster model. The kit comprises sgRNA, which is obtained by PCR amplification and in vitro transcription of the artificial sequence shown in SEQ ID NO:2 and SEQ ID NO:3. The methods include: designing specific targeting sequence of hamster ABCA1 gene, preparing cas9 RNA and sgRNA; collecting and culturing hamster fertilized eggs; microinjection: injecting sgRNA and cas9 RNA into the cytoplasm of hamster fertilized eggs together; implanting the fertilized eggs after microinjection into surrogate hamsters and giving birth to F0 generation hamsters. After identification, the ABCA1 gene knockout hamster model was successfully constructed, which could provide a basis for the study of the relationship between ABCA1 and coronary heart disease.

【技术实现步骤摘要】
构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒和方法
本专利技术涉及疾病动物模型及其制备
，具体地，涉及一种心血管疾病动物模型及其构建方法，尤其是构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒和方法。
技术介绍
冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronaryatheroscleroticheartdisease，CHD，简称冠心病)的患病率和死亡率呈逐年上升趋势。动脉粥样硬化(Atherosclerosis，As)作为冠心病的主要病理学基础，其发生是一个多因素参与的复杂过程，其中血管壁胆固醇过量蓄积和炎症反应是两个相互促进的关键环节，因此，抑制血管炎症和减少巨噬细胞内胆固醇蓄积是防治As的重要措施。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)在胆固醇逆转运和高密度脂蛋白(HDL)生成的起始步骤中起重要作用，它是介导胆固醇流出的关键蛋白，也是As防治的重要靶点。ABCA1以ATP为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂流出，并结合到细胞表面乏脂的载脂蛋白AI(ApolipoproteinAI，apoAI)，形成新生的高密度脂蛋白(High-densitylipoprotein，HDL)，对于减少血管壁脂质蓄积本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒，其特征在于，包括sgRNA，所述sgRNA由如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示人工序列经PCR扩增、体外转录所得。

【技术特征摘要】
1.构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒，其特征在于，包括sgRNA，所述sgRNA由如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示人工序列经PCR扩增、体外转录所得。2.如权利要求1所述的构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒，其特征在于，所述sgRNA的制备步骤为：采用所述SEQIDNO:2和SEQIDNO:3人工序列经PCR扩增，取扩增产物中124bp的DNA片段作为sgRNA的DNA模板，所得的sgRNA的DNA模板经体外转录得sgRNA粗品。3.如权利要求1或2所述的构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括cas9mRNA，其制备步骤为：采用含有人源化cas9cDNA的PXT7质粒，经XbaI限制性内切酶作用，纯化得cas9mRNA的DNA模板，所得cas9mRNA的DNA模板经体外转录得cas9mRNA粗品。4.如权利要求3所述的构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒，其特征在于，所述cas9mRNA的制备中：cas9mRNA的DNA模板纯化的方法为：PXT7质粒经XbaI限制性内切酶处理后，用蛋白酶K处理20～50min，经酚-氯仿抽提，乙醇沉淀；和/或cas9mRNA的DNA模板体外转录的条件为：采用mMESSAGEmMACHINET7kit试剂盒，在37℃反应1～3小时；和/或所得cas9mRNA粗品的纯化方法为：cas9mRNA粗品经酚-氯仿抽提、异丙醇沉淀、无RNase水溶解，得浓度为200～800ng/μL的cas9mRNA。5.如权利要求2所述的构建ABCA1基因敲除仓鼠模型的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：98℃30s；...

【专利技术属性】
技术研发人员：冼勋德，
申请(专利权)人：河北伊维沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13