高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，提出了高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法，包括将雄性仓鼠均分为高脂组和对照组，高脂组给予高脂饮食喂养，对照组给予正常饮食喂养，并监测喂养后至少八周的仓鼠体内血清、睾丸组织的生物学指标。通过上述技术方案，解决了现有技术中大鼠和小鼠脂代谢特点与人类有较大的差异、作为高脂饮食与雄性生育能力关系研究构建的动物模型对临床的指导意义不大的问题。床的指导意义不大的问题。床的指导意义不大的问题。

【技术实现步骤摘要】
高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体的，涉及高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法及应用。

技术介绍

[0002]随着生活方式和饮食结构的改变，育龄夫妇中10
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15％不育不孕，其中不育占30
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50％；其已经成为全球性性的公共健康问题。高脂膳食诱发的脂质代谢紊乱对不育的影响已被实验和临床研究证实。构建与人类脂质代谢相近的动物模型是研究男性不育机制的前提。目前高脂饮食与雄性生育能力关系研究的实验结果大都来源于大鼠或小鼠，他们的脂代谢特点与人类有较大的差异，其研究结果对临床的指导意义有限。仓鼠与人类在脂代谢方面有着相似的特性，低密度脂蛋白受体杂合敲除(LDLR+/
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)仓鼠是北大医学部刘国庆教授团队2014年利用CRISPR/Cas9基因编辑技术首先构建模拟人家族性高胆固醇血症(Familial Hypercholesterolemia，FH)的动物模型，因为血脂明显升高，目前利用此模型多用于动脉粥样硬化的发病和进展机制的研究。高脂饮食是否对仓鼠睾丸产生影响未见报道。
[0003]过多的脂滴沉积在脂肪细胞以外的体细胞造成其功能损伤称之为脂毒性。既往人们多关注甘油三酯与脂毒性的关系。然而，近来很多研究证明胆固醇也参与脂毒性及脂性凋亡。2021年中国学者首先提出了“胆固醇毒性”的概念。胆固醇累积造成细胞损伤的一个关键机制就是线粒体功能障碍。胆固醇沉积增多可促进活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)的生成。活性氧过度产生引起细胞氧化应激，从而导致细胞损伤。同时，胆固醇是合成睾酮的主要原料，因此胆固醇稳态的失衡对睾酮分泌具有重要作用。
[0004]用于类固醇激素合成及精子形成的胆固醇主要来源于：1.受体介导的脂蛋白胆固醇的摄入；2.细胞内脂滴中胆固醇酯的水解；3.细胞内胆固醇的从头合成。其中用于类固醇激素合成的胆固醇主要来源于受体介导的脂蛋白胆固醇的摄入。低密度脂蛋白受体(Low
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Density Lipoprotein Receptor，LDLR)是介导低密度脂蛋白胆固醇通过内吞作用进入细胞的主要受体。家族性高胆固醇血症是一种低密度脂蛋白受体基因突变引起的遗传性疾病。虽然杂合型FH患者血清胆固醇异常升高导致较严重的动脉粥样硬化，但与肥胖和糖尿病不同，其不育的情况鲜有报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法，解决了相关技术中大鼠和小鼠脂代谢特点与人类有较大的差异、作为高脂饮食与雄性生育能力关系研究构建的动物模型对临床的指导意义不大的问题。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]将10周龄雄性仓鼠均分为高脂组和对照组，其中高脂组给予高脂饮食喂养，对照组给予正常饮食喂养，并监测喂养后至少八周的仓鼠体内血清指标、睾丸组织和功能指标。
[0008]监测的血清指标包括葡萄糖耐量、胰岛素耐量、空腹血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇；
[0009]监测的睾丸组织和功能指标包括睾丸形态、血清睾酮水平、血清促黄体生成素水平、生精小管直径、生精上皮厚度、生精小管支持细胞数目、生精小管内和间质的甘油三酯及胆固醇沉积。
[0010]所述雄性仓鼠为叙利亚黄金仓鼠。
[0011]构建的高脂仓鼠睾丸脂毒性损伤动物模型在研究高脂饮食与雄性生育能力关系中的应用。
[0012]将10周龄雄性叙利亚黄金仓鼠均分为高脂组和对照组两组，其中高脂组给予高脂饮食喂养，对照组给予正常饮食喂养，再将高脂组和对照组分别均分为野生组和杂合组，并监测喂养后至少八周的仓鼠体内血清指标、睾丸组织和功能指标。
[0013]监测的血清指标为葡萄糖耐量、血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶和谷草转氨酶；监测的睾丸组织和功能指标为睾丸形态、血清睾酮水平、血清促黄体生成素水平以及LDLR、p
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AMPK、Sirt1、PGC
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1α、Cleaved
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Caspase
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3、Bcl
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2、Bax的表达。
[0014]构建的LDLR杂合缺失仓鼠的高脂睾丸脂毒性损伤模型在研究LDLR杂合缺失降低高脂对睾丸的损伤作用的应用。
[0015]构建的LDLR杂合缺失仓鼠的高脂睾丸脂毒性损伤模型在研究将LDLR杂合缺失作为治疗不育的药物靶点的应用。
[0016]本专利技术的工作原理及有益效果为：
[0017]本专利技术中，首次成功构建高脂仓鼠睾丸脂毒性模型，较大鼠和小鼠高脂模型，野生仓鼠给予高脂膳食5周即可造成睾丸脂毒性损伤，成模周期大大缩短(大鼠和小鼠需要12周)，形态学损伤明显(大鼠和小鼠睾丸只出现显微镜下的变化，本研究高脂仓鼠睾丸出现大体可见的萎缩)。该仓鼠高脂睾丸脂毒性模型对于研究人体高胆固醇导致睾丸毒性具有指导意义。
附图说明
[0018]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。
[0019]图1为两组仓鼠体重、空腹血糖、葡萄糖耐量实验及胰岛素耐量对照图；
[0020]图2为两组仓鼠血脂参数对照图；
[0021]图3为两组仓鼠肝脏形态和肝功能对照图；
[0022]图4为两组仓鼠睾丸重量、形态、血清睾酮水平、血清促黄体生成素水平对照图；
[0023]图5为两组仓鼠生精小管直径及生精上皮厚度对照图；
[0024]图6为两组仓鼠睾丸H&E染色和PAS染色对照图；
[0025]图7为四组仓鼠血脂和肝功能对照图；
[0026]图8为四组仓鼠血清性激素水平对照图；
[0027]图9为四组睾丸H&E染色和PAS染色对照图；
[0028]图10为四组仓鼠睾丸油红O及Filipin染色对照图；
[0029]图11为四组仓鼠睾丸LDLR蛋白印迹蛋白分析对照图；
[0030]图12为四组p
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AMPK、Sirt1、PGC
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1α免疫组化染色及蛋白印迹蛋白分析对照图；
[0031]图13为四组Cleaved
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Caspase
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3、Bcl
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2和Bax蛋白印迹蛋白分析对照图；
具体实施方式
[0032]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都涉及本专利技术保护的范围。
[0033]如图1～图6所示，本专利技术提出了高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法，将10周龄雄性仓鼠均分为高脂组和对照组，高脂组给予高脂饮食喂养，对照组给予正常饮食喂养，并监测喂养后至少八周的仓鼠体内血清指标、睾丸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法，其特征在于，将10周龄雄性仓鼠均分为高脂组和对照组，其中高脂组给予高脂饮食喂养，对照组给予正常饮食喂养，并监测喂养后至少八周的仓鼠体内血清指标、睾丸组织和功能指标。2.根据权利要求1所述的高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法，其特征在于，监测的血清指标包括葡萄糖耐量、胰岛素耐量、空腹血糖、血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇；监测的睾丸组织和功能指标包括睾丸形态、血清睾酮水平、血清促黄体生成素水平、生精小管直径、生精上皮厚度、生精小管支持细胞数目、生精小管内和间质的甘油三酯及胆固醇沉积。3.根据权利要求1所述的高脂仓鼠睾丸脂毒性模型构建方法，其特征在于，所述雄性仓鼠为叙利亚黄金仓鼠。4.根据权利要求1
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3任意一项方法构建的高脂仓鼠睾丸脂毒性损伤动物模型在研究高脂饮食与雄性生育能力关系中的应用。5.LDLR杂合缺失仓鼠的高脂睾丸脂毒性损伤模型构建方法，其特征在于，将10周龄雄性叙利亚黄金仓鼠均分为高脂组和对照组两组，其中高脂组给予高脂饮食喂养，对照组给予正常饮...

【专利技术属性】
技术研发人员：张连姗，
申请(专利权)人：河北伊维沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：