【技术实现步骤摘要】
用于治疗疾病的三环DNA反义寡核苷酸、组合物和方法本申请为国际申请日2010年4月9日、国际申请号PCT/EP2010/054735于2011年11月22日进入中国国家阶段、申请号201080022376.2、专利技术名称“用于治疗疾病的三环DNA反义寡核苷酸、组合物和方法”的分案申请。专利技术背景
总的来说，本公开涉及合成的反义寡核苷酸(AON)，以及使用反义寡核苷酸改变在pre-mRNA加工期间发生的剪接事件、或下调含有重复序列例如3’或5’CUG、CAG和/或CCUG的突变mRNA的表达的方法。更具体来说，本文公开了三环DNA(tc-DNA)AON，其能够有效促进pre-mRNA加工期间的外显子跳跃、掩蔽pre-mRNA中的内含子沉默序列和/或茎-环序列、以及引导RNase介导的mRNA破坏。本文描述了这样的tc-DNAAON，通过跳过肌养蛋白基因内突变的外显子、例如突变的外显子23或外显子51以恢复肌养蛋白的功能性，可用于杜氏肌营养不良(DuchenneMuscularDystrophy)的治疗方法中。还描述了这样的tc-DNAAON，其通过掩蔽SMN...
【技术保护点】
1.一种三环DNA反义寡核苷酸(tc‑DNA AON)，其用于促进肌养蛋白pre‑mRNA加工期间外显子的跳跃，所述tc‑DNA AON含有10至18个三环核苷酸，其中所述tc‑DNA AON的8‑16个或6‑14个核苷酸与肌养蛋白pre‑mRNA的内含子剪接供体位点互补，其中所述tc‑DNA AON的2‑8个核苷酸与肌养蛋白pre‑mRNA的外显子区互补，并且所述内含子剪接供体位点与所述外显子区毗连并位于其5’端。
【技术特征摘要】
2009.04.10 US 61/212,3841.一种三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)，其用于促进肌养蛋白pre-mRNA加工期间外显子的跳跃，所述tc-DNAAON含有10至18个三环核苷酸，其中所述tc-DNAAON的8-16个或6-14个核苷酸与肌养蛋白pre-mRNA的内含子剪接供体位点互补，其中所述tc-DNAAON的2-8个核苷酸与肌养蛋白pre-mRNA的外显子区互补，并且所述内含子剪接供体位点与所述外显子区毗连并位于其5’端。2.权利要求1的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON的长度选自(i)12至16个核苷酸之间；(ii)13至15个核苷酸之间；以及(iii)15个核苷酸。3.权利要求1的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON包含6至14个与所述内含子剪接供体位点互补的核苷酸。4.权利要求1的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON包含2至5个与所述外显子区互补的核苷酸。5.权利要求1的tc-DNAAON，其中在所述肌养蛋白pre-mRNA加工期间被跳过的外显子是外显子23或外显子51。6.权利要求5的tc-DNAAON，其中当被跳过的外显子是外显子23时，所述tc-DNAAON包含核苷酸序列5’-AACCTCGGCTTACCT-3’(SEQIDNO:1)，或者是M23D(+02-13)(SEQIDNO:1)，并且当被跳过的外显子是外显子51时，所述tc-DNAAON包含选自5’-AGAAATGCCATCTTC-3’(SEQIDNO:2)、5’-AAATGCCATCTTCCT-3’(SEQIDNO:3)和5’-TGCCATCTTCCTTGA-3’(SEQIDNO:4)的核苷酸序列，或者是H51(+68+82)(SEQIDNO:2)或H51(+70+84)(SEQIDNO:3)或H51(+73+87)(SEQIDNO:4)。7.一种三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)，其用于促进SMN2pre-mRNA加工期间包含非典型外显子，所述tc-DNAAON含有10至18个三环核苷酸，其中所述tc-DNAAON与SMN2pre-mRNA的内含子沉默序列(ISS)互补。8.权利要求7的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON的长度选自(i)12至16个核苷酸之间；(ii)13至15个核苷酸之间；以及(iii)15个核苷酸。9.权利要求7的tc-DNAAON，其中所述SMN2pre-mRNA中的所述非典型外显子是外显子7，并且所述内含子沉默序列是ISS-N1。10.权利要求9的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON包含核苷酸序列5’-CUUUCAUAAUGCUGG-3’(SEQIDNO:5)，或者是SMN2i7(10；25)(SEQIDNO:5)。11.一种三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)，其用于促进SMN2pre-mRNA加工期间包含非典型外显子，所述tc-DNAAON由10-18个三环核苷酸构成，其中所述tc-DNAAON与SMN2pre-mRNA的末端茎-环(TSL)互补。12.权利要求11的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON的长度选自(i)12至16个核苷酸之间；(ii)13至15个核苷酸之间；以及(iii)13个核苷酸。13.权利要求11的tc-DNAAON，其中所述SMN2pre-mRNA中的所述非典型外显子是外显子7，并且所述末端茎-环是TSL2。14.权利要求13的tc-DNAAON，其中所述tc-DNAAON包含核苷酸序列5’-UUAAUUUAAGGAA-3’(SEQIDNO:6)，或者是SMN2e7(39；51)(SEQIDNO:6)。15.一种组合物，其用于促进肌养蛋白pre-mRNA加工期间外显子的跳跃，所述组合物包含：(a)含有10至18个三环核苷酸的三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)，其中所述tc-DNAAON的8-16个核苷酸与肌养蛋白pre-mRNA的内含子剪接供体位点互补，其中所述tc-DNAAON的2-8个核苷酸与肌养蛋白pre-mRNA的外显子区互补，并且其中所述外显子区与所述内含子剪接供体位点毗连并位于其3’端；以及(b)细胞递送剂。16.一种组合物，其用于促进SMN2pre-mRNA加工期间包含非典型外显子，所述组合物包含：(a)含有10至18个三环核苷酸的三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)，其中所述tc-DNAAON与SMN2pre-mRNA的内含子沉默序列(ISS)互补；以及(b)细胞递送剂。17.一种组合物，其用于促进SMN2pre-mRNA加工期间包含非典型外显子，所述组合物包含：(a)含有10至18个三环核苷酸的三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)，其中所述tc-DNAAON与SMN2pre-mRNA的末端茎-环(TSL)互补；以及(b)细胞递送剂。18.一种用于从肌养蛋白mRNA中消除突变的外显子的方法，所述方法包含将表达肌养蛋白pre-mRNA的细胞与三环DNA反义寡核苷酸(tc-DNAAON)相接触的步骤，所述tc-DNAAON含有10至18个三环核苷酸，其中所述tc-DNAAON的8-16个核苷酸与肌养蛋白pre-mRNA的内含子剪接供体位点互补，其中所述tc-DNAAON的2-8个核苷酸与肌养蛋白pre-mRNA的外显子区互补，并且其中所述外显子区与所述内含子剪接供体位点毗连并位于其3’端。19.权利要求18的方法，其中所述tc-DNAAON的长度选自(i)12至16个核苷酸之间；(ii)13至15个核苷酸之间；以及(iii)15个核苷酸。20.权利要求18的方法，其中在所述肌养蛋白pre-mRNA加工期间被跳过的外显子是外显子23。21.权利要求20的方法，其中所述tc-DNAAON包含核苷酸序列5’-AACCTCGGCTTACCT-3’(SEQIDNO:1)，或者是M23D(+02-13)(SEQIDNO:1)。22.权利要求18的方法，其中在所述肌养蛋白pre-mRNA加工期间被跳过的所述外显子是外显子51。23.权利要求22的方法，其中所述tc-DNAAON包含选自5’-AGAAATGCCATCTTC-3’(SEQIDNO:2)、5’-AAATGCCATCTTCCT-3’(SEQIDNO:3)和5’-TGCCATCTTCCTTGA-3’(SEQIDNO:4)的核苷酸序列，或者是H51(+68+82)(SEQIDNO:2)或H51(+70+84)(SEQIDNO:3)或H51(+73+87)(SEQIDNO:4)。24.一种用于在SMN2mRNA内包含非典型外显子的方法，所述方法包含将表达SMN2pre-mRNA的细胞与含有11至18个核苷酸的tc-DNAAON相接触的步骤，其中所述tc-DNAAON与SMN2pre-mRNA的内含子沉默序列(ISS)互补。25.权利要求24的方法，其中所述tc-DNAAON的长度选自(i)12至16个核苷酸之间；(ii)13至15个核苷酸之间；以及(iii)15个核苷酸。26.权利要求24的方法，其中所述SMN2pre-mRNA中的所述非典型外显子是外显子7。27.权利要求24的方法，其中所述内含子沉默序列是ISS-N1。28.权利要求27的方法，其中所述tc-DNAAON包含核苷酸序列5’-CUUUCAUAAUGCUGG-3’(SEQIDNO:5)，或者是SMN2i7(10；25)(SEQIDNO:5)。29.一种用于在SMN2mRNA内包含非典型外显子的方法，所述方法包含将表达SMN2pre-mRNA的细胞与含有11至18个核苷酸的tc-DNAAON相接触的步骤，其中所述tc-DNAAON与SMN2pre-mRNA的末端茎-环(TSL)互...
【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔·舒佩利，克里斯蒂安·卢曼，丹尼斯·弗灵，路易斯·加西亚，托马斯·沃伊特，
申请(专利权)人：肌肉学研究协会，索邦大学，伯尔尼大学，法国国家科学研究中心，
类型：发明
国别省市：法国,FR
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