一株高效解磷真菌小孢根霉及其筛选方法与应用技术

一株高效解磷真菌小孢根霉及其筛选方法与应用，属于微生物学领域。针对如何降解土壤中无机磷、促进作物生长的问题，本发明专利技术提供了一株高效解磷真菌小孢根霉(Rhizopus microsporus)NEAU‑8，其保藏编号为：CGMCC NO.14635。其筛选方法如下：1)取小麦根际土壤，加入体积分数为0.85％的生理盐水富集培养后，静置；2)取上清液进行梯度稀释，取各稀释液，分别涂布在无机磷固体培养基上进行培养；3)将每个培养基上出现有透明圈的微生物挑取出，接种到于新的无机磷固体培养基培养；4)分别将培养的菌体制成孢子悬液，接种到无机磷液体培养基中培养，测定菌液中可溶性磷的含量，筛选获得高效解磷的真菌小孢根霉。本发明专利技术获得真菌小孢根霉可用于农业生产中。

【技术实现步骤摘要】
一株高效解磷真菌小孢根霉及其筛选方法与应用
本专利技术属于微生物学领域，具体涉及一株高效解磷真菌小孢根霉及其筛选方法与应用。
技术介绍
磷是植物生长发育所必需的三大营养元素之一，是植物细胞中遗传物质和能量物质等有机化合物的基本构成元素，植物的光合作用和体内的生化代谢过程都必须有磷参加，磷在植物的整个生命过程中起着不可替代的作用。据报道，我国74％的耕地土壤中缺乏磷，土壤中约95％的磷以无效磷的形式存在，不能被植物吸收利用。因此，磷成为限制作物生长和产量的主要元素之一。为了减缓磷匮乏对植物生长的影响，农业生产上主要依靠施用磷肥来增加磷素供应。然而，施入土壤中的磷肥大部分会与土壤中的金属离子如Al3+、Fe3+、Ca3+等结合形成难溶性磷酸盐，导致当年磷的利用率仅为10-25％。为满足农作物对磷的需求，农业生产中往往会大量施加磷肥，而磷肥的过量施用不仅会造成严重的经济损失，使土壤中微生物多样性下降，还会造成土壤板结、地力衰退、环境污染、生态恶化和农产品品质下降等环境问题，因此，如何有效利用土壤中的无效态磷，提高磷肥的利用率，对减少农业生产中化肥的使用和资源消耗，以及保护生态环境具有十分重要的意义。解磷微生物能够溶解土壤中的不溶性磷，将无效磷转变成植物能吸收的有效磷，并能通过产胞外酶和有机酸来刺激植物的生长。解磷微生物可以分为解磷细菌、放线菌和真菌，其中解磷细菌研究的比较多，包括肠细菌属(Enterbacter)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、欧文氏菌属(Erwinia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、沙雷氏菌属(Serratia)、黄杆菌属(Flavobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、微球菌属(Micrococcus)、固氮菌属(Azotobacter)、色杆菌属(Chromabacterium)、沙门氏菌属(Salmonella)、产碱菌属(Alcaligenes)、节细菌属(Arthrobacter)、硫杆菌属(Thiobacillus)、埃希氏菌属(Escherichia)；解磷放线菌主要侧重于链霉菌属(Streptomyces)；解磷真菌方面的相关研究报道不多，大多为曲霉属(Aspergillus)、根霉属(Rhizopus)、镰刀菌属(Fusarium)、青霉属(Penicillium)、小菌核菌属(Sclerotium)、AM菌根菌(Arbuscularmycorrhiza)等。很多解磷细菌和放线菌在传代培养后会丧失其最初的解磷能力，且这种丧失是不能再恢复的。
技术实现思路
针对如何降解土壤中无机磷、促进作物生长的问题，本专利技术提供了一株高效解磷真菌小孢根霉(Rhizopusmicrosporus)NEAU-8，其保藏编号为：CGMCCNO.14635。本专利技术还提供了上述小孢根霉的筛选方法，方法如下：1)取小麦根际土壤，加入0.85％的生理盐水富集培养后，静置15-30min；所述土壤与生理盐水的比例为1:9(g/mL)；2)然后取1mL上清液进行梯度稀释，取每一个稀释度的稀释液，分别涂布在无机磷固体培养基上进行培养；3)将每个培养基上出现有透明圈的微生物挑取出，接种到新的无机磷固体培养基上培养；4)然后，分别将培养的菌体制成孢子悬液，接种到无机磷液体培养基中培养，通过测定菌液中可溶性磷的含量，筛选获得高效解磷的真菌小孢根霉。进一步地限定，步骤1)所述富集培养是指28℃摇床中150r/min振荡培养90-120min。进一步地限定，步骤2)所述梯度稀释是指将上清液分别稀释到原体积的10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。进一步地限定，步骤2)所述无机磷固体培养基配方为：葡萄糖10g，硫酸铵0.5g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3g，MgSO4.7H2O0.3g，FeSO4.7H2O0.03g，MnSO4.4H2O0.03g，磷酸钙10g，琼脂18g，去离子水1000mL，pH调至7.0。进一步地限定，步骤4)所述接种是指将孢子悬液按照1％(体积分数)接种到无机磷液体培养基中；所述培养，条件为28℃、150r/min摇床培养7d。本专利技术还提供了上述小孢根霉在抑制病原真菌产生中的应用。进一步地限定，所述病源真菌为黄瓜枯萎致病菌(Fusariumoxysporum)、玉米大斑致病菌(Exserohilumturcicum)、黄瓜褐斑致病菌(Corynesporacassiicola)、黄瓜炭疽致病菌(Colletotrichumorbiculare)、玉米小斑致病菌(Helminthosporiummaydis)、水稻纹枯致病菌(Rhizoctoniasolani)、玉米弯孢致病菌(Curvularialunata)、大豆根腐致病菌(RhizoctoniasolaniKuhn)或大豆菌核致病菌(Sclerotiniasclerotiorum)。本专利技术还提供了上述小孢根霉在促进作物生长中的应用。进一步地限定，将小孢根霉拌土后，用于栽培玉米或小麦种子，所述小孢根霉在土壤中的孢子浓度为1.0×103cfu/g～1.0×105cfu/g，最佳孢子浓度为1.0×104cfu/g。有益效果本专利技术从小麦根际土壤中分离得到的小孢根霉NEAU-8对磷酸钙、磷酸锌具有较强的解磷能力，其对应的解磷能力分别为403mg/L、507mg/L。盆栽试验表明，该菌的孢子液可以明显的促进小麦和玉米的生长。本专利技术提供的菌株小孢根霉NEAU-8及其菌剂在使用过程中无污染，无公害，可减少化学肥料的用量，此外，解磷真菌的遗传性状稳定，传代培养一般不易丧失解磷能力，为开发微生物菌肥提供优良的菌株资源，并具有良好的应用开发前景。本专利技术所提供的菌株小孢根霉(Rhizopusmicrosporus)NEAU-8，是从河北省廊坊市小麦根际土壤中分离获得的，已于2017年11月14日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCNO.14635。附图说明图1为菌株NEAU-8在PDA培养基上的菌落特征。图2为菌株NEAU-8菌株在摇瓶中培养时分解磷酸钙效果图。图3为磷标准曲线。图4为菌株NEAU-8对病原真菌的拮抗作用，在每张图片左侧平皿中为病菌对照，每张图片右侧上部接种菌株NEAU-8，下部接种病原真菌。病原真菌：a黄瓜褐斑致病菌(Corynesporacassiicola)，b黄瓜炭疽致病菌(Colletotrichumorbiculare)，c大豆菌核致病菌(Sclerotiniasclerotiorum)，d黄瓜枯萎致病菌(Fusariumoxysporum)，e玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)，f大豆根腐致病菌(RhizoctoniasolaniKuhn)，g玉米弯孢病菌(Curvularialunata)，h水稻纹枯致病菌(Rhizoctoniasolani)，i玉米小斑病菌(Helminthosporiummaydis)图5为菌株NEAU-8对盆栽玉米的促生效果图。图6为菌株NEAU-8对盆栽小麦生长的影响的结果图。具体实施方式以下通过具体实施例对本专利技术做进一步的说明，但不用以限制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株高效解磷真菌小孢根霉(Rhizopus microsporus)NEAU‑8，其保藏编号为：CGMCC NO.14635。

【技术特征摘要】
1.一株高效解磷真菌小孢根霉(Rhizopusmicrosporus)NEAU-8，其保藏编号为：CGMCCNO.14635。2.权利要求1所述小孢根霉的筛选方法，其特征在于，方法如下：1)取小麦根际土壤，加入体积分数为0.85％的生理盐水富集培养后，静置15-30min；所述土壤与生理盐水的比例为1:9(g/mL)；2)然后取1mL上清液进行梯度稀释，取每一个稀释度的稀释液，分别涂布在无机磷固体培养基上进行培养；3)将每个培养基上出现有透明圈的微生物挑取出，接种到于新的无机磷固体培养基培养；4)然后，分别将培养的菌体制成孢子悬液，接种到无机磷液体培养基中培养，通过测定菌液中可溶性磷的含量，筛选获得高效解磷的真菌小孢根霉。3.根据权利要求2的筛选方法，其特征在于，步骤1)所述富集培养是指28℃摇床中150r/min振荡培养90-120min。4.根据权利要求2的筛选方法，其特征在于，步骤2)所述梯度稀释是指将上清液分别稀释到原体积的10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。5.根据权利要求2的筛选方法，其特征在于，步骤2)所述无机磷固体培养基配方为：葡萄糖10g，硫酸铵0.5g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3g，MgSO4.7H2O0.3g，FeSO4.7H2O0.03g，MnSO4.4H...

【专利技术属性】
技术研发人员：向文胜，赵军伟，李文超，王相晶，刘重喜，张继，宋佳，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23