辅助检测胎盘植入的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术将能够检测VEGF‑A浓度的试剂应用于检测孕妇外周血，以正常分娩孕产妇的于分娩前外周血清的VEGF‑A浓度为参考值，待检孕妇的外周血为检测值，将检测值/参考值以1.0作为截断值，制备得到用于辅助检测胎盘植入的试剂盒，其不仅对于胎盘植入的孕妇和正常分娩孕妇具有中等强度的区分性能，而且对于胎盘植入的孕妇和采用其他方法辅助诊断结果为假阳性的孕妇具有中等强度的区分性能。该试剂盒提供了一种方便、快捷的辅助检测手段，检测得到的浓度数据作为参考值，可与其他方法的结果结合分析，有利于提高孕妇胎盘植入风险筛查的准确度。

【技术实现步骤摘要】
辅助检测胎盘植入的试剂盒及其应用
本专利技术属于分子生物学
，特别涉及一种辅助检测胎盘植入的试剂盒及其应用。
技术介绍
胎盘植入是指胎盘的绒毛侵入部分子宫肌层，胎盘绒毛错综分散植入子宫肌壁内的一种疾病，是产科少见但是危重的一种并发症，可以导致患者大出血、休克、子宫穿孔和感染，甚至死亡。胎盘植入近年来报道在孕产妇中的发生率为4/1000，其中前置胎盘合并胎盘植入发生率高、临床出血量大、死亡率高，称之为凶险性胎盘植入。目前临床上仍然缺乏简便有效的分娩前胎盘植入早期筛查或辅助诊断技术，由此引起的处理延迟是导致其严重不良妊娠结局的关键之一。由于胎盘植入在产前缺乏典型的临床表现、体征及实验室指标，产前诊断很困难，最终需要分娩后的病理诊断来证明进行确诊。无创血清学筛查方法正在进一步的研发中，有报道发现血清AFP与胎盘植入有明显相关性，但是其特异性不高，尚未开发成临床可以应用的检测试剂盒。在孕早期分析孕产妇血浆中的胎盘游离mRNA可以预测胎盘植入，但是对于技术手段要求很高，目前尚无临床应用。此外，有研究报道血浆中胎儿游离DNA在胎盘植入孕产妇外周血中升高，但是临床意义并不明确。因此，目前并没有可供临床应用的、采用母体血液中生物标记物辅助检测胎盘植入的方法。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于提供一种辅助检测胎盘植入的试剂盒，用于检测母体血液中生物标记物VEGF-A，以便于提供一种胎盘植入辅助检测的方法，为胎盘植入的产前诊断提供参考数据。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种辅助检测胎盘植入的试剂盒，包含有检测VEGF-A浓度的试剂。本专利技术还提供一种辅助检测胎盘植入的方法，具体技术方案如下：一种胎盘植入的辅助检测方法，包括以下步骤：取样：分别采集待检孕妇外周血样本；制备标准曲线：使用检测VEGF-A浓度的试剂检测梯度浓度的VEGF-A标准品，绘制标准曲线；检测：使用检测VEGF-A浓度的试剂检测待检孕妇外周血样本，通过标准曲线计算得待检孕妇外周血样本中的VEGF-A浓度。基于上述技术方案，本专利技术具有以下效果：本专利技术将能够检测VEGF-A浓度的试剂应用于检测孕妇外周血，以正常分娩孕产妇分娩前外周血清的VEGF-A浓度为参考值，待检孕妇的外周血为检测值，将检测值/参考值以1.0作为截断值，制备得到用于辅助检测胎盘植入的试剂盒，其不仅对于胎盘植入的孕妇和正常分娩孕妇具有中等强度的区分性能，而且对于胎盘植入的孕妇和采用其他方法辅助诊断结果为假阳性的孕妇具有中等强度的区分性能。该试剂盒提供了一种方便、快捷的辅助检测手段，检测得到的浓度数据作为参考值，可与其他方法的结果结合分析，有利于提高孕妇胎盘植入风险筛查的准确度。附图说明图1-6为正常分娩孕妇以及产后病理确诊患有胎盘植入的孕妇于分娩前采集的非抗凝外周血血清进行VEGF-A浓度检测的结果；图7-8为分娩前超声诊断为前置胎盘但分娩后并没有发生胎盘植入的孕妇以及病理确诊患有前置胎盘合并胎盘植入的孕妇于分娩前采集的非抗凝外周血血清进行VEGF-A浓度检测的结果；图9-10为正常分娩或者发生其它并发症但是并没有发生胎盘植入的孕妇以及病理确诊患有前置胎盘合并胎盘植入的孕妇于分娩前采集的非抗凝外周血血清进行VEGF-A浓度检测的结果。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照实施例对本专利技术进行更全面的描述，以下给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以用许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(NewYork：ColdSpringHarborLaboratoryPress，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术提供了一种辅助检测胎盘植入的试剂盒，包含有检测VEGF-A浓度的试剂，该试剂用于检测孕妇外周血中的VEGF-A浓度，试剂盒中还包含有VEGF-A标准品。在其中一些实施例中，试剂盒中的VEGF-A检测试剂为VEGF-A酶联免疫吸附检测试剂、VEGF-A化学发光免疫检测试剂。优选地，所述VEGF-A检测试剂为Bio-PlexAssay171AC600M。本专利技术还提供了一种胎盘植入的辅助检测方法，其步骤包括：取样：分别采集待检孕妇外周血样本；制备标准曲线：使用检测VEGF-A浓度的试剂检测梯度浓度的VEGF-A标准品，绘制标准曲线；检测：使用检测VEGF-A浓度的试剂检测待检孕妇外周血样本，通过标准曲线计算得待检孕妇外周血样本中的VEGF-A浓度。其中，所述取样还可包括采集正常分娩外周血样本；外周血为非抗凝外周血血清，在采集后，900×g～1100×g离心9～11min，优选地，于1000×g离心10min，去除血小板及沉淀物。如果采集后不能马上检测，可以于超低温冰箱保存，超低温冰箱温度设置为-70℃～-85℃。另外，胎盘植入的辅助检测方法，还包括：使用VEGF-A检测试剂检测正常孕妇外周血样本、通过标准曲线计算得所述孕妇外周血样本中的VEGF-A浓度；计算待检孕妇外周血样本中的VEGF-A浓度与正常孕妇外周血样本中的VEGF-A浓度的比值；为胎盘植入的产前诊断提供参考数据。其比值大于1.0者，应在孕妇分娩前进一步通过影像学检测的方法，结合上述参考数据进行预测、判断。胎盘植入高度疑似者应尽早加强临床监护，预防严重不良妊娠结局。在其中一些实施例中，所述VEGF-A检测试剂为：VEGF-A酶联免疫吸附检测试剂、VEGF-A化学发光免疫检测试剂。优选地，所述检测VEGF-A浓度的试剂为Bio-PlexAssay171AC600M。实施例1一、材料与设备试剂盒:Bio-PlexAssay171AC600M；仪器型号：Bio-Plex200；涡旋混合仪；适用1.5-2ml离心管的冷冻离心机；微孔板振荡器(能达到500rpm的转速)；磁性分离板(Hand-HeldMagneticPlateWasher)；2μl-1000μl单道移液器；20μl-300μl多道移液器；多道移液器储液槽；去离子水、烧杯、试管、吸水纸等。二、采集外周血样本征得同意后，在分娩前分别采集疑似病例的非抗凝外周血血清和30-50例正常分娩孕产妇的非抗凝外周血血清，在室温下凝固30-45分钟，4℃1000g离心15分钟，然后转移到低温冻存管中。冻存于-80℃超低温冰箱。待样本采集完毕后，4℃冻融50μl血清，1000g重复离心10分钟，以完全去除血小板和其他沉淀物。三、验证VEGF-A作为辅助检测胎盘植入的血清标志物1、样本稀释：按照1:4的比例用蒸馏水稀释血清样本，采用质控合格厂家例如Bio-Plex的VEGF-A检测试剂盒，按照说明书在同一块板上检测所有样本的VEGF-A浓度。2、试剂稀释：washbuffe本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辅助检测胎盘植入的试剂盒，其特征在于，包含有检测VEGF‑A浓度的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种辅助检测胎盘植入的试剂盒，其特征在于，包含有检测VEGF-A浓度的试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包含有VEGF-A标准品。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测VEGF-A浓度的试剂为：VEGF-A酶联免疫吸附检测试剂、VEGF-A化学发光免疫检测试剂。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述检测VEGF-A浓度的试剂为Bio-PlexAssay171AC600M。5.一种胎盘植入的辅助检测方法，其特征在于，包括以下步骤：取样：分别采集待检孕妇外周血样本；制备标准曲线：使用检测VEGF-A浓度的试剂检测梯度浓度的VEGF-A标准品，绘制标准曲线；检测：使用检测VEGF-A浓度的试剂检测待检孕妇外周血样本，通过标准曲线计算得待检孕妇外周血样本中的VEGF-A浓度。6.根据权利要求5所述的辅助检测方法，其特征在于，还包括以下步骤：采集正常...

【专利技术属性】
技术研发人员：余波澜，陈敦金，
申请(专利权)人：余波澜，陈敦金，
类型：发明
国别省市：广东,44