一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法技术

本发明专利技术提供一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，其中，结合垫的制备中，包括：S1：裁切结合垫：将结合垫裁切成组装成成品时所需要的尺寸；S2：标记复合物的制备：在标记物标记上抗体或抗原后，置于保存液中存放；S3：配制标记复合物的浸泡液：将稀释液与上述含有标记复合物的保存液混合稀释成一定浓度的标记复合物的浸泡液；S4：浸润结合垫：将定标记复合物的浸泡液加入结合垫中，浸润；S5：结合垫平衡过程：将浸润的结合垫平铺于载体上，在恒温恒湿环境中静置；S6：干燥结合垫：将平衡完成的结合垫进行干燥。本发明专利技术的方法能有效提高试纸条精密度以用于精确定量检测，且制备方法简单，生产效率高，生产成本低，便于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法
本专利技术涉及医学检测
，特别是涉及一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法。
技术介绍
试纸条技术是一种操作简单，无需专业培训，方便快捷，结果直观的免疫学检测技术。当前在疾病快速诊断、环境污染物分析及致病生物因子检定等领域得到广泛应用。其检测原理是将特异的抗体(或抗原)作为捕获试剂固定于硝酸纤维素膜的特定区域，加入待测样品后，在毛细作用力的推动下，待测样品沿着膜向前移动，当移动至固定有捕获试剂的区域时，样品中的抗原(或抗体)与捕获试剂发生特异性结合，标记试剂则显示出一定的颜色从而实现特异性检测的免疫分析方法。传统的胶体金试纸条通过金纳米颗粒显示出一定的颜色从而实现特异性检测的免疫分析，此方法虽然检测结果肉眼可见，但无法完成精准定量检测；荧光免疫层析试纸条检测技术是胶体金免疫层析试纸条技术后为实现定量检测兴起的新技术。目前，荧光免疫层析试纸条的结构由样品垫、结合垫、NC膜、吸水垫组成，并依次搭接并粘贴于PVC底板上，其中含有标记抗体/标记抗原的复合物采用喷涂或浸泡后干燥固化在结合垫上，结合垫采用的材质通常为玻纤。在测试过程中待测样本直接加到样品垫上或加样孔中。其中结合垫的处理方法主要有喷涂法和浸泡法。采用喷涂方式处理结合垫目前常用的有两种方式，(1)整张未裁切的结合垫在喷涂仪器中往复喷涂，采用这种方式可以准确定量每一大张结合垫的标记物的量，但需要准确控制喷涂参数，特别是喷涂速度和喷涂流量；(2)是预先将结合垫裁切成合适的尺寸，只喷涂一次，采用这种方式可以准确定量每一张结合垫上标记物的量，喷涂过程中需要准确对位，否则标记复合物溶液容易喷出结合垫外留在喷涂台面上，需要经常擦拭喷涂台面，因此影响生产效率并且极易造成结合垫间相互污染。另外采用喷涂方式标记复合物通常只沉积在结合垫的一个表面，并且标记物在结合垫上分布不均匀，甚至团聚在结合垫上，导致标记物在测试样本过程中很难均匀释放，结合垫上标记物容易残留，导致产品测试精密度较差。这种处理方式对样品垫、结合垫、NC膜材质要求较高，而且不同检测项目所用的材质不同，另外这种方法为了降低CV通常需对结合垫进行预处理。采用浸泡方式处理结合垫通常应用于试纸条的定性检测，应用于准确定量检测较少，如需定量检测通常采用的也有两种方式，(1)采用将整张结合垫浸入含有标记物的溶液后取出快速冻干；(2)标记物定量倾倒到整张结合垫上，用压辊来回赶匀，烘箱快速烘干。浸泡法的优点是方法简单，生产效率比喷涂法高；但其缺点是采用这种方式容易造成结合垫上标记物分布不均匀，特别容易产生边缘效应(也就是说边缘的结合垫标记复合物和中间的结合垫标记复合物分布不同)，导致产品测试精密度较差，CV较大，而且裁切过程中需要切除结合垫四周边缘部分，结合垫报废率高。因此，有必要开发一种简便的免疫层析试纸条的制备方法，以使制备所得的免疫层析试纸条CV值小，可适用于精确定量检测。
技术实现思路
为此，本专利技术所要解决的技术问题在于现有技术中免疫层析试纸测试精密度较差，不能用于精确定量检测的问题，进而提供一种免疫层析试纸条的制备方法，能有效提高试纸条精密度以用于精确定量检测，且制备方法简单，生产效率高，生产成本低，便于工业化生产。为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，包括步骤：硝酸纤维素膜的制备，样品垫的制备，结合垫的制备，试纸条的组装；其中，所述结合垫的制备中，包括以下步骤：S1：裁切结合垫：将结合垫裁切成组装成成品时所需要的尺寸；S2：标记复合物的制备：在标记物标记上抗体或抗原后，置于保存液中存放；S3：配制标记复合物的浸泡液：将稀释液与上述含有标记复合物的保存液混合稀释成一定浓度的标记复合物的浸泡液；S4：浸润结合垫：将定标记复合物的浸泡液加入结合垫中，浸润结合垫；S5：结合垫平衡过程：将浸润的结合垫平铺于载体上，在恒温恒湿环境中静置；S6：干燥结合垫：将平衡完成的结合垫进行干燥。进一步的，步骤S2中，所述标记物为时间分辨荧光微球、普通荧光微球、上转换发光微球、磁微球、胶体金、彩色乳胶微球、量子点、时间分辨荧光染料、普通荧光素、酶、生物素-亲和素与微球放大系统中的任意一种。进一步的，步骤S3中，所述稀释液包含缓冲对、蛋白、糖类、高聚物、防腐剂和表面活性剂。进一步的，所述稀释液的缓冲对为摩尔浓度为0.015M-0.025M的Tris-HCL(三羟甲基氨基甲烷-盐酸)缓冲液、摩尔浓度为0.015M-0.025M的PB(磷酸盐)缓冲液、摩尔浓度为0.015M-0.025MHEPES(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)缓冲液中的一种，所述蛋白为质量浓度为0.5％-2％的BSA(牛血清白蛋白)，所述糖类为质量浓度为2.0％-15％的海藻糖、质量浓度为2.0％-15％的蔗糖和质量浓度为1.0％-3％的葡聚糖20000，所述高聚物为质量浓度为0.25％-3％的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，所述防腐剂为质量浓度为0.01％-0.1％的Proclin300或质量浓度为0.01％-0.1％的NaN3(叠氮钠)，所述表面活性剂为质量浓度为0.05％-2％的TW-20(吐温-20)和质量浓度为0.05％-2％的PEG4000(聚乙二醇4000)。进一步的，步骤S3中，混合时标记复合物的保存液与稀释液体积比1:1000-20:1000。进一步的，步骤S4中，所述定量是指10μL-50μL。进一步的，步骤S4中，所述标记复合物的浸泡液加入结合垫中是将结合垫浸泡于标记复合物的浸泡液，或者采用取液设备将标记复合物的浸泡液均匀滴加于结合垫上。进一步的，步骤S5中，所述在恒温恒湿环境中静置，是指在温度20℃-50℃，湿度25％-60％环境下，静置35min-300min。更进一步的，步骤S5中，所述在恒温恒湿环境中静置包括两阶段，第一阶段是指是指在温度20℃-37℃，湿度40％-60％环境下，静置5min-60min；第二阶段是指是指在温度25℃-50℃，湿度25％-40％环境下，静置30min-240min。由此，可以更好的使浸泡液充分扩散于结合垫内，使标记复合物在结合垫内均匀分布。进一步的，步骤S5中，所述载体为玻璃板、不锈钢板和塑料板中的任意一种。进一步的，步骤S5中，所述载体具有疏水表面。本专利技术的有益效果在于：1、本专利技术的制备方法在结合垫浸润后还包括平衡过程，在恒温恒湿条件下放置于载体上，能保证放置于平整载体上的结合垫内标记复合物充分浸润扩散，干燥后标记复合物均匀分布于整个结合垫立体结构内，不需要用压辊来回赶匀和快速烘干。2、本专利技术的制备方法先将结合垫裁切成组装试纸条成品时结合垫需要的尺寸，再加入定量的浸泡液，由此，每一条固定尺寸的结合垫上标记复合物的量相同。3、本专利技术的制备方法结合垫的载体表面疏水，浸泡液只会在结合垫上流动，并且载体表面有一定的粗糙度，便于烘干后取下完整的结合垫，结合垫不易粘在结合垫载体上，并且疏水表面载体容易清洗便于重复利用。4、本专利技术的制备方法对于肉眼不可见的标记物，通过添加无毒带颜色的食用色素，可肉眼直接观察结合垫干燥后标记复合物分布情况。5、本专利技术的制备方法所得的免疫层析试纸条可用于精确定量检测，具有较低的不精密度，CV值小于5％。6、本专利技术的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，包括步骤：硝酸纤维素膜的制备，样品垫的制备，结合垫的制备，试纸条的组装，其特征在于，所述结合垫的制备中，包括以下步骤：S1：裁切结合垫：将结合垫裁切成组装成成品时所需要的尺寸；S2：标记复合物的制备：在标记物标记上抗体或抗原后，置于保存液中存放；S3：配制标记复合物的浸泡液：将稀释液与上述含有标记复合物的保存液混合稀释成一定浓度的标记复合物的浸泡液；S4：浸润结合垫：将定量标记复合物的浸泡液加入结合垫中，浸润结合垫；S5：结合垫平衡过程：将浸润的结合垫平铺于载体上，在恒温恒湿环境中静置；S6：干燥结合垫：将平衡完成的结合垫进行干燥。

【技术特征摘要】
1.一种精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，包括步骤：硝酸纤维素膜的制备，样品垫的制备，结合垫的制备，试纸条的组装，其特征在于，所述结合垫的制备中，包括以下步骤：S1：裁切结合垫：将结合垫裁切成组装成成品时所需要的尺寸；S2：标记复合物的制备：在标记物标记上抗体或抗原后，置于保存液中存放；S3：配制标记复合物的浸泡液：将稀释液与上述含有标记复合物的保存液混合稀释成一定浓度的标记复合物的浸泡液；S4：浸润结合垫：将定量标记复合物的浸泡液加入结合垫中，浸润结合垫；S5：结合垫平衡过程：将浸润的结合垫平铺于载体上，在恒温恒湿环境中静置；S6：干燥结合垫：将平衡完成的结合垫进行干燥。2.根据权利要求1所述的精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述标记物为时间分辨荧光微球、普通荧光微球、上转换发光微球、磁微球、胶体金、彩色乳胶微球、量子点、时间分辨荧光染料、普通荧光素、酶、生物素-亲和素与微球放大系统中的任意一种。3.根据权利要求1所述的精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述稀释液包含缓冲对、蛋白、糖类、高聚物、防腐剂和表面活性剂。4.根据权利要求3所述的精确定量检测免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述稀释液的缓冲对为摩尔浓度为0.015M-0.025M的Tris-HCL缓冲液、摩尔浓度为0.015M-0.025M的PB缓冲液、摩尔浓度为0.015M-0.025MHEPES缓冲液中的一种，所述蛋白为质量浓度为0.5％-2％的BSA，所述糖类为质量浓度为2.0％-15％的海藻糖、质量浓度为2.0％-15％的蔗糖和质量浓度为1.0％-3％...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑兰花，熊亮，洪礼清，蒋奎胜，庾琼，刘仁源，刘勇娥，李建霖，
申请(专利权)人：东莞东阳光科研发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44