一种类角膜上皮细胞、组织工程化角膜上皮及制备与应用制造技术

本发明专利技术属于组织工程技术领域，具体涉及一种以类角膜上皮细胞为种子细胞构建组织工程化角膜上皮的方法与应用。本发明专利技术提供了一种采用两步法诱导皮肤来源的表皮细胞转分化为类角膜上皮细胞，以诱导获得的类角膜上皮细胞为种子细胞替代角膜缘干细胞构建组织工程化角膜上皮，制得的组织工程化角膜上皮，具有透明度良好，弹性好，可操作性强等特点，可用于移植修复人类或动物因角膜缘干细胞缺损导致视力严重下降或失明的眼表，用于因角膜缘干细胞缺损而失明的动物模型的自体移植和同种异体移植均能取得良好的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种类角膜上皮细胞、组织工程化角膜上皮及制备与应用
本专利技术属于组织工程
，具体涉及一种类角膜上皮细胞、组织工程化角膜上皮及制备与应用。
技术介绍
根据调查统计，在我国角膜盲约占双眼盲患者15.38％，已成为第二位致盲性眼病。我国角膜盲病人每年约400万（包括单眼患者），这些病人中75％以上可以通过角膜移植达到复明的目的。由于角膜供体严重匮乏，我国每年仅有4000例左右手术机率，只占病人的2‰。构建可用于人体移植的组织工程角膜满足患者需求，成为迫切需要解决的医学难题。以非角膜来源的自体组织干细胞替代角膜缘干细胞构建组织工程角膜上皮是解决这一医学难题的理想选择。国内外学者进行了口腔粘膜上皮细胞、骨髓间充质干细胞、表皮干细胞、毛囊干细胞和胚胎干细胞诱导分化为角膜上皮细胞的研究，试图解决这一难题[NishidaK，etal.2004,NEnglJMed;351(12):1187–1196;GaoN,etal.2007,SciChinaCLifeSci;50(1):101-110;YangXY,etal.2008,MolVis;14:1064-1070;MaY,etal.2006,S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种类角膜上皮细胞的制备方法，其特征在于包含如下步骤：（1）以人或哺乳动物皮肤表皮细胞为种子细胞，采用含终浓度为30～50μg/mL EGF和20～30ng/mL LIF的无血清培养基诱导培养10～24h，使表皮细胞去分化、回到较原始的状态，得到去分化的表皮细胞；（2）将步骤（1）制得的去分化的表皮细胞与人或哺乳动物角膜基质成纤维细胞采用transwell共培养系统进行共培养，培养3～5天，使皮肤表皮细胞向角膜上皮细胞分化，得到类角膜上皮细胞。

【技术特征摘要】
1.一种类角膜上皮细胞的制备方法，其特征在于包含如下步骤：（1）以人或哺乳动物皮肤表皮细胞为种子细胞，采用含终浓度为30～50μg/mLEGF和20～30ng/mLLIF的无血清培养基诱导培养10～24h，使表皮细胞去分化、回到较原始的状态，得到去分化的表皮细胞；（2）将步骤（1）制得的去分化的表皮细胞与人或哺乳动物角膜基质成纤维细胞采用transwell共培养系统进行共培养，培养3～5天，使皮肤表皮细胞向角膜上皮细胞分化，得到类角膜上皮细胞。2.根据权利要求1所述的类角膜上皮细胞的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的含终浓度为30～50μg/mLEGF和20～30ng/mLLIF的无血清培养基的组分为：F12+1～1.2%BSA+30～50ng/mLEGF+20～30ng/mLLIF+100U/mL青链霉素+100μg/mL链霉素。3.根据权利要求1所述的类角膜上皮细胞的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的诱导培养的时间为20～24h。4.一种类角膜上皮细胞，其特征在于通过权利要求1～3任一项所述的制备方法制备得到。5.权利要求4所述的类角膜上皮细胞在制备移植、修复、重建角膜缘干细胞缺损产品中的应用。6.一种组织工程化角膜上皮，其特征在于由权利要求5所述的类角膜上皮细胞构建得到。7.权利要求6所述的组织工程化角膜上皮的制备方法，其特征在于包含如下步骤：将上...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨学义，郭燕杰，马西亚，张沛，
申请(专利权)人：洛阳师范学院，
类型：发明
国别省市：河南,41