本发明专利技术公开了一种诊断MPLS的基因缺失突变，所述突变是FBN1基因上c.8275_8291delGAGAAGACAGCCATCTT。本发明专利技术首先通过二代测序筛选出MPLS患者中存在c.8275_8291delGAGAAGACAGCCATCTT，而后利用体外细胞系证明该突变抑制FBN1基因表达产物正常发挥作用，因此可以断定该突变是MPLS的致病突变。根据本发明专利技术的研究成果，可以制备诊断MPLS的产品以及治疗MPLS的候选药物以应用于临床。
Application of gene mutation as a marker for diagnosis of MPLS
The invention discloses a gene deletion mutation for diagnosing MPLS, which is c.8275_8291 delGAAGAGAGAGCCATCTT on FBN1 gene. The present invention firstly screens out the presence of c.8275_8291 delGAAGAGAGAGAGCCATCTT in MPLS patients by second generation sequencing, and then proves that the mutation inhibits the normal function of FBN1 gene expression products by in vitro cell lines, so it can be concluded that the mutation is the pathogenic mutation of MPLS. According to the research results of the present invention, products for the diagnosis of MPLS and candidate drugs for the treatment of MPLS can be prepared for clinical application.
【技术实现步骤摘要】
基因突变作为诊断MPLS标志物的应用
本专利技术属于医学诊断领域，涉及一种基因突变作为诊断MPLS标志物的应用。
技术介绍
马凡综合征早衰脂肪代谢障碍综合征(Marfanoid-progeroid-lipodystrophysyndrome，MPLS)是一种最近阐明的原纤维病，也是一种以加速衰老、出生后脂肪代谢障碍、产后体重增加、在临床上很少报道的特征性畸形面部特征为主要特征的复杂疾病。最近的研究表明由FBN1基因座编码的命名为aprosin的潜在激素作为脂肪代谢障碍表型的调节分子。Fibrillin-1(FBN1)基因编码大的糖蛋白，这些糖蛋白构成一大群细胞外蛋白，形成高度组织、扩展和普遍分布的聚集体(微纤维)的核心。与弹性纤维相关的自发和遗传结缔组织疾病光谱强调了原纤蛋白微纤维的重要意义。原纤维蛋白-1的主要构建组件包含47个表皮生长因子样(EGF)结构域，每个结构域由6个高度保守的半胱氨酸残基和7个转化生长因子-β结合蛋白样(TGFBP)结构域组成，其特征在于具有8个半胱氨酸残基。在这些EGF结构域中，43个是钙结合型(cbEGF)。此外，对微纤维组装有显著作用的原纤维蛋白-1和配体的相互作用是由cbEGF结构域介导的，而TGFBP结构域参与了各个原纤维蛋白-1分子间链间二硫键的形成。富含纤维蛋白的微纤维与基底膜和弹性纤维相互作用，为细胞外基质提供稳定性。参考序列NM_000138.4的FBN1转录物中的总外显子计数为66，并且第一个外显子被转录成mRNA的非翻译部分。所有MPLS个体在第64个外显子中始终存在杂合截短突变(基于参考序列NM_000138.4，该突变位于第65个外显子，如果计数从FBN1的第一个密码子开始，则是第64个外显子)，这导致FBN1的C末端结构域出现过早终止密码子。本申请公开了中国人群中的第一例MPLS。通过功能测定确定了截短FBN1突变的潜在影响，其传递不同的显性失活等位基因和常染色体显性遗传(AD)疾病性状。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种诊断MPLS的基因突变。本专利技术的目的之二在于提供前面所述的基因突变的用途。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取了如下技术方案：本专利技术提供了一种用于诊断MPLS的基因突变，所述基因突变是FBN1基因上的突变。进一步，所述突变是c.8275_8291delGAGAAGACAGCCATCTT。即可以通过检测FBN1基因c.8275_8291区段是否存在缺失突变来诊断MPLS。根据本专利技术的又一个方面，本专利技术还提供了前面所述的基因突变的检测试剂。所述试剂包括可以应用于本专利技术的检测前面所述的基因突变的方法中使用的试剂。可以通过本领域技术人员已知的某些方法来检测基因突变或变异，此类方法包括但不限于，DNA测序；引物延伸测定法，包括细胞突变特异性核苷酸掺入测定法和细胞突变特异性引物延伸测定法(例如细胞突变特异性PCR、细胞突变特异性连接链式反应(LCR)、和缺口-LCR)；突变特异性寡核苷酸杂交测定法(例如寡核苷酸连接测定法)；切割保护测定法，其中使用免受切割剂作用的保护来检测核酸双链体中的错配碱基；对MutS蛋白结合的分析；比较变异型和野生型核酸分子迁移率的电泳分析；变性梯度凝胶电泳(DGGE，如在例如Myers等(1985)Nature313：495中的)；对RNA酶在错配碱基对处切割的分析；分析对异源双链DNA的化学或酶促切割；质谱术(例如MALDI-TOF)；遗传比特分析(geneticbitanalysis，GBA)；5’核酸酶测定法(例如TaqManTM)；和采用分子信标的测定法。这些方法中的某些在下文有更详细的讨论。可以使用本领域中公知技术通过靶核酸的分子克隆和测序来实现靶核酸中突变或变异的检测。或者，可以使用扩增技术诸如聚合酶链式反应(PCR)来直接自来自基因组DNA制备物扩增靶核酸序列。然后可以测定扩增序列的核酸序列，并自此鉴定变异。扩增技术是本领域中公知的，例如聚合酶链式反应记载于Saiki等，Science239：487，1988；美国专利号4,683,203和4,683,195。还可以使用连接酶链式反应(其是本领域中已知的)来扩增靶核酸序列。参见例如Wu等，Genomics4：560-569(1989)。另外，还可以修饰并使用称为等位基因特异性PCR的技术来检测体细胞突变(例如替代)。参见例如Ruano和Kidd(1989)NucleicAcidsResearch17：8392；McClay等(2002)AnalyticalBiochem.301：200-206。在此技术的某些实施方案中，使用突变特异性引物，其中所述引物的3’端核苷酸与靶核酸中的特定变异互补(即能够与靶核酸中的特定变异发生特异性碱基配对)。若不存在所述特定变异，则观察不到扩增产物。还可以使用扩增受阻突变系统(AmplificationRefractoryMutationSystem，ARMS)来检测变异(例如替代)。ARMS记载于例如欧洲专利申请公开文本No.0332435，及Newton等，NucleicAcidsResearch，17：7，1989。对于检测突变或变异(例如替代)有用的其它方法包括但不限于(1)突变特异性核苷酸掺入测定法，诸如单碱基延伸测定法(参见例如Chen等(2000)GenomeRes.10：549-557；Fan等(2000)GenomeRes.10：853-860；Pastinen等(1997)GenomeRes.7：606-614；及Ye等(2001)Hum.Mut.17：305-316)；(2)突变特异性引物延伸测定法(参见例如Ye等(2001)Hum.Mut.17：305-316；和及Shen等GeneticEngineeringNews，卷23，2003年3月15日)，包括体细胞突变特异性PCR；(3)5’核酸酶测定法(参见例如DeLaVega等(2002)BioTechniques32：S48-S54(记载了TaqManTM测定法)；Ranade等(2001)GenomeRes.11：1262-1268；和Shi(2001)Clin.Chem.47：164-172)；(4)采用分子信标的测定法(参见例如Tyagi等(1998)NatureBiotech.16：49-53；和Mhlanga等(2001)Methods25：463-71)；和(5)寡核苷酸连接测定法(参见例如Grossman等(1994)Nuc.AcidsRes.22：4527-4534；专利申请公开文本No.US2003/0119004A1；PCT国际公开文本No.WO01/92579A2；和美国专利号6,027,889)。还可以通过错配检测方法来检测突变或变异。错配指不是100％互补的杂交的核酸双链体。缺乏完全互补性可能是由于删除、插入、倒位、或替代。错配检测方法的一个例子是错配修复检测(MismatchRepairDetection，MRD)测定法，其记载于例如Faham等，Proc.NatlAcad.Sci.USA102：14717-14722(2005)和Faham等，Hum.Mol.Genet.10：1657-1664(2001本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于诊断MPLS的基因突变，其特征在于，所述基因突变是FBN1基因上的突变。
【技术特征摘要】
1.一种用于诊断MPLS的基因突变，其特征在于，所述基因突变是FBN1基因上的突变。2.根据权利要求1所述的基因突变，其特征在于，所述突变位点是FBN1基因上的c.8275_8291位，所述突变是c.8275_8291delGAGAAGACAGCCATCTT。3.权利要求1或2所述的基因突变的检测试剂。4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括所述基因突变位点的特异性扩增引物。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括dNTPs、Taq酶、...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴南，吴志宏，林茂，赵森，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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