一种基于高通量测序检测人RNA TCR免疫组库的方法及其专用引物组技术

本发明专利技术公开了一种基于高通量测序检测人RNA TCR免疫组库的方法及其专用引物。本发明专利技术保护的引物组由序列1至155所示的155条引物组成。本发明专利技术还保护一种方法：(1)以待测样本的RNA为模板，采用引物组中的引物组一进行PCR扩增；(2)以步骤(1)的产物为模板，采用引物组中的引物组二进行PCR扩增，回收扩增产物；(3)以步骤(3)的扩增产物为模板，采用测序平台的通用上游引物和测序平台的通用下游引物进行PCR扩增，回收扩增产物，即为DNA文库。本发明专利技术中提供的引物组可以实现在一管中进行多重PCR扩增。采用本发明专利技术提供的引物组或方法获得人RNA TCR免疫组库，具有灵敏度高、特异性高、可重复性高、实验成本低的优势。

A High-throughput Sequencing Method for Detecting Human RNA TCR Immunohistological Library and Its Primers

The invention discloses a method for detecting human RNA TCR immunohistochemical Library Based on high throughput sequencing and a special primer thereof. The primer set protected by the invention consists of 155 primers shown in sequence 1 to 155. The invention also protects a method: (1) using the RNA of the sample to be tested as a template, using the primer group 1 of the primer group to carry out PCR amplification; (2) using the product of step (1) as a template, using the primer group 2 of the primer group to carry out PCR amplification and recover the amplified products; (3) using the amplified product of step (3) as a template, using the universal upstream primer of the sequencing platform and the universal downstream primer of the sequencing platform to import the amplified products. The amplified products were recovered by PCR, which was called DNA library. The primer set provided in the invention can realize multiplex PCR amplification in one tube. The human RNA TCR immunohistochemical library is obtained by using the primer group or method provided by the invention, which has the advantages of high sensitivity, high specificity, high repeatability and low experimental cost.

【技术实现步骤摘要】
一种基于高通量测序检测人RNATCR免疫组库的方法及其专用引物组
本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于高通量测序检测人RNATCR免疫组库的方法及其专用引物组。
技术介绍
T细胞通过T细胞受体(TCR)和抗原主要组织相容性复合体分子(MHC)的相互作用调节抗原识别。大部分人源TCR由α链和β链构成，少部分人源TCR由γ和δ链构成。α/β链构成的T细胞是获得性免疫的关键介质，识别MHCI类和II类蛋白相关抗原。根据统计，α/β链T细胞占总的T细胞群体的百分之九十以上，而且相比于γ/δ链T细胞具有更高的多样性。当前关于TCR的主要研究对象也是集中在α/β链T细胞上。人源TCR的α链由V区、J区和C区构成(V区和J区组成可变区)，人源TCR的β链由V区、D区、J区和C区构成(V区、D区和J区组成可变区)。因为每个区都有很多高度相似的亚群，且重排的时候还可能带有插入、缺失等突变，从而带来不同的重排组合达到1018种之多。这种组合的多样性，反应了人体免疫力的强弱。互补决定区3(CDR3)，位于受体基因的多变区，是T细胞受体直接与抗原结合的部位，CDR3的氨基酸序列是决定受体特异性的重要信息。当前针对TCR免疫组库的研究中，根据研究目的的不同，选择的起始模板材料也不尽相同。选择基因组DNA作为起始材料的好处不言而喻，正常情况下不容易降解的稳定性，单个细胞中模板的唯一性都能够对TCR研究带来很大的便利。然而相对的，选择基因组DNA带来的缺陷就是基因组DNA无法对目的基因的表达情况上提供任何信息，而且因为内含子的存在也会对测序结果上带来一定的错误。现在很多研究方法都选择使用RNA作为起始模板，因为研究的mRNA包含最终的TCR重排产物，可以直接进行完整CDR3变化的测序，并且提供表达量信息。相对某些低起始量的样本，例如单细胞样本，RNA也比基因组DNA样本更好检测。巢氏PCR是使用两组引物扩增目的产物的方法，第一组引物扩增原理与传统PCR相似，第二对引物设计的结合区域在第一次PCR产物的内部，使得第二次的扩增片段长度短于第一次扩增。相对于传统PCR，巢氏PCR具有很高的特异性，因为如果第一次扩增产生了错误片段，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于高通量测序检测人RNATCR免疫组库的方法及其专用引物组。本专利技术保护一种引物组(引物组甲)，由引物组一和引物组二组成；引物组一由如下79条引物组成：α链步骤一上游引物-1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-6为序列表的序列6所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-7为序列表的序列7所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-8为序列表的序列8所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-9为序列表的序列9所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-10为序列表的序列10所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-11为序列表的序列11所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-12为序列表的序列12所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-13为序列表的序列13所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-14为序列表的序列14所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-15为序列表的序列15所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-16为序列表的序列16所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-17为序列表的序列17所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-18为序列表的序列18所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-19为序列表的序列19所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-20为序列表的序列20所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-21为序列表的序列21所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-22为序列表的序列22所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-23为序列表的序列23所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-24为序列表的序列24所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-25为序列表的序列25所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-26为序列表的序列26所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-27为序列表的序列27所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-28为序列表的序列28所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-29为序列表的序列29所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-30为序列表的序列30所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-31为序列表的序列31所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-32为序列表的序列32所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-33为序列表的序列33所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-34为序列表的序列34所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-35为序列表的序列35所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-36为序列表的序列36所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-37为序列表的序列37所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-38为序列表的序列38所示的单链DNA分子；α链步骤一下游引物为序列表的序列39所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-1为序列表的序列40所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-2为序列表的序列41所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-3为序列表的序列42所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-4为序列表的序列43所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-5为序列表的序列44所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-6为序列表的序列45所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-7为序列表的序列46所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-8为序列表的序列47所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-9为序列表的序列48所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-10为序列表的序列49所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-11为序列表的序列50所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-12为序列表的序列51所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-13为序列表的序列52所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-14为序列表的序列53所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-15为序列表的序列54所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-16为序列表的序列55所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-17为序列表的序列56所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-18为序列表的序列57所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-19为序列表的序列58所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-20为序列表的序列59所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-21为序列表的序列60所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-22为序列表的序列61所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-23为序列表的序列62所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-24本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物组，由引物组一和引物组二组成；引物组一由如下79条引物组成：α链步骤一上游引物‑1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑6为序列表的序列6所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑7为序列表的序列7所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑8为序列表的序列8所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑9为序列表的序列9所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑10为序列表的序列10所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑11为序列表的序列11所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑12为序列表的序列12所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑13为序列表的序列13所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑14为序列表的序列14所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑15为序列表的序列15所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑16为序列表的序列16所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑17为序列表的序列17所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑18为序列表的序列18所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑19为序列表的序列19所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑20为序列表的序列20所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑21为序列表的序列21所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑22为序列表的序列22所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑23为序列表的序列23所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑24为序列表的序列24所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑25为序列表的序列25所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑26为序列表的序列26所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑27为序列表的序列27所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑28为序列表的序列28所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑29为序列表的序列29所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑30为序列表的序列30所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑31为序列表的序列31所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑32为序列表的序列32所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑33为序列表的序列33所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑34为序列表的序列34所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑35为序列表的序列35所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑36为序列表的序列36所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑37为序列表的序列37所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物‑38为序列表的序列38所示的单链DNA分子；α链步骤一下游引物为序列表的序列39所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑1为序列表的序列40所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑2为序列表的序列41所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑3为序列表的序列42所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑4为序列表的序列43所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑5为序列表的序列44所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑6为序列表的序列45所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑7为序列表的序列46所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑8为序列表的序列47所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑9为序列表的序列48所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑10为序列表的序列49所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑11为序列表的序列50所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑12为序列表的序列51所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑13为序列表的序列52所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑14为序列表的序列53所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑15为序列表的序列54所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑16为序列表的序列55所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑17为序列表的序列56所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑18为序列表的序列57所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑19为序列表的序列58所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑20为序列表的序列59所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑21为序列表的序列60所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑22为序列表的序列61所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑23为序列表的序列62所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物‑24...

【技术特征摘要】
1.引物组，由引物组一和引物组二组成；引物组一由如下79条引物组成：α链步骤一上游引物-1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-6为序列表的序列6所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-7为序列表的序列7所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-8为序列表的序列8所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-9为序列表的序列9所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-10为序列表的序列10所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-11为序列表的序列11所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-12为序列表的序列12所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-13为序列表的序列13所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-14为序列表的序列14所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-15为序列表的序列15所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-16为序列表的序列16所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-17为序列表的序列17所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-18为序列表的序列18所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-19为序列表的序列19所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-20为序列表的序列20所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-21为序列表的序列21所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-22为序列表的序列22所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-23为序列表的序列23所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-24为序列表的序列24所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-25为序列表的序列25所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-26为序列表的序列26所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-27为序列表的序列27所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-28为序列表的序列28所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-29为序列表的序列29所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-30为序列表的序列30所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-31为序列表的序列31所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-32为序列表的序列32所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-33为序列表的序列33所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-34为序列表的序列34所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-35为序列表的序列35所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-36为序列表的序列36所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-37为序列表的序列37所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-38为序列表的序列38所示的单链DNA分子；α链步骤一下游引物为序列表的序列39所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-1为序列表的序列40所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-2为序列表的序列41所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-3为序列表的序列42所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-4为序列表的序列43所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-5为序列表的序列44所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-6为序列表的序列45所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-7为序列表的序列46所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-8为序列表的序列47所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-9为序列表的序列48所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-10为序列表的序列49所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-11为序列表的序列50所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-12为序列表的序列51所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-13为序列表的序列52所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-14为序列表的序列53所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-15为序列表的序列54所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-16为序列表的序列55所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-17为序列表的序列56所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-18为序列表的序列57所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-19为序列表的序列58所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-20为序列表的序列59所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-21为序列表的序列60所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-22为序列表的序列61所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-23为序列表的序列62所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-24为序列表的序列63所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-25为序列表的序列64所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-26为序列表的序列65所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-27为序列表的序列66所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-28为序列表的序列67所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-29为序列表的序列68所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-30为序列表的序列69所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-31为序列表的序列70所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-32为序列表的序列71所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-33为序列表的序列72所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-34为序列表的序列73所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-35为序列表的序列74所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-36为序列表的序列75所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-37为序列表的序列76所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-38为序列表的序列77所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-39为序列表的序列78所示的单链DNA分子；β链步骤一下游引物为序列表的序列79所示的单链DNA分子；引物组二由如下76条引物组成：α链步骤二上游引物-1为序列表的序列80所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-2为序列表的序列81所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-3为序列表的序列82所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-4为序列表的序列83所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-5为序列表的序列84所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-6为序列表的序列85所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-7为序列表的序列86所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-8为序列表的序列87所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-9为序列表的序列88所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-10为序列表的序列89所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-11为序列表的序列90所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-12为序列表的序列91所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-13为序列表的序列92所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-14为序列表的序列93所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-15为序列表的序列94所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-16为序列表的序列95所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-17为序列表的序列96所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-18为序列表的序列97所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-19为序列表的序列98所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-20为序列表的序列99所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-21为序列表的序列100所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-22为序列表的序列101所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-23为序列表的序列102所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-24为序列表的序列103所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-25为序列表的序列104所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-26为序列表的序列105所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-27为序列表的序列106所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-28为序列表的序列107所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-29为序列表的序列108所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-30为序列表的序列109所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-31为序列表的序列110所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-32为序列表的序列111所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-33为序列表的序列112所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-34为序列表的序列113所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-35为序列表的序列114所示的单链DNA分子；α链步骤二上游引物-36为序列表的序列115所示的单链DNA分子；α链步骤二下游引物为序列表的序列116所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-1为序列表的序列117所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-2为序列表的序列118所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-3为序列表的序列119所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-4为序列表的序列120所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-5为序列表的序列121所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-6为序列表的序列122所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-7为序列表的序列123所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-8为序列表的序列124所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-9为序列表的序列125所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-10为序列表的序列126所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-11为序列表的序列127所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-12为序列表的序列128所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-13为序列表的序列129所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-14为序列表的序列130所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-15为序列表的序列131所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-16为序列表的序列132所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-17为序列表的序列133所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-18为序列表的序列134所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-19为序列表的序列135所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-20为序列表的序列136所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-21为序列表的序列137所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-22为序列表的序列138所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-23为序列表的序列139所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-24为序列表的序列140所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-25为序列表的序列141所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-26为序列表的序列142所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-27为序列表的序列143所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-28为序列表的序列144所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-29为序列表的序列145所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-30为序列表的序列146所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-31为序列表的序列147所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-32为序列表的序列148所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-33为序列表的序列149所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-34为序列表的序列150所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-35为序列表的序列151所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-36为序列表的序列152所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-37为序列表的序列153所示的单链DNA分子；β链步骤二上游引物-38为序列表的序列154所示的单链DNA分子；β链步骤二下游引物为序列表的序列155所示的单链DNA分子。2.引物组，由引物组一和引物组二组成；引物组一由如下79条引物组成：α链步骤一上游引物-1为序列表的序列1所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-2为序列表的序列2所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-3为序列表的序列3所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-4为序列表的序列4所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-5为序列表的序列5所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-6为序列表的序列6所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-7为序列表的序列7所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-8为序列表的序列8所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-9为序列表的序列9所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-10为序列表的序列10所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-11为序列表的序列11所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-12为序列表的序列12所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-13为序列表的序列13所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-14为序列表的序列14所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-15为序列表的序列15所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-16为序列表的序列16所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-17为序列表的序列17所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-18为序列表的序列18所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-19为序列表的序列19所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-20为序列表的序列20所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-21为序列表的序列21所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-22为序列表的序列22所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-23为序列表的序列23所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-24为序列表的序列24所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-25为序列表的序列25所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-26为序列表的序列26所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-27为序列表的序列27所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-28为序列表的序列28所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-29为序列表的序列29所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-30为序列表的序列30所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-31为序列表的序列31所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-32为序列表的序列32所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-33为序列表的序列33所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-34为序列表的序列34所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-35为序列表的序列35所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-36为序列表的序列36所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-37为序列表的序列37所示的单链DNA分子；α链步骤一上游引物-38为序列表的序列38所示的单链DNA分子；α链步骤一下游引物为序列表的序列39所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-1为序列表的序列40所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-2为序列表的序列41所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-3为序列表的序列42所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-4为序列表的序列43所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-5为序列表的序列44所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-6为序列表的序列45所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-7为序列表的序列46所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-8为序列表的序列47所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-9为序列表的序列48所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-10为序列表的序列49所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-11为序列表的序列50所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-12为序列表的序列51所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-13为序列表的序列52所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-14为序列表的序列53所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-15为序列表的序列54所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-16为序列表的序列55所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-17为序列表的序列56所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-18为序列表的序列57所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-19为序列表的序列58所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-20为序列表的序列59所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-21为序列表的序列60所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-22为序列表的序列61所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-23为序列表的序列62所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-24为序列表的序列63所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-25为序列表的序列64所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-26为序列表的序列65所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-27为序列表的序列66所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-28为序列表的序列67所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-29为序列表的序列68所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-30为序列表的序列69所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-31为序列表的序列70所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-32为序列表的序列71所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-33为序列表的序列72所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-34为序列表的序列73所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-35为序列表的序列74所示的单链DNA分子；β链步骤一上游引物-36为序列表的序列75...

【专利技术属性】
技术研发人员：姬晓雯，冯越，
申请(专利权)人：北京迈基诺基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11