甲状腺球蛋白的测定方法及测定试剂技术

本发明专利技术公开一种甲状腺球蛋白的测定方法及测定试剂，其不受抗甲状腺球蛋白抗体的干扰的影响，可通过单独检查更准确地测定甲状腺球蛋白量。甲状腺球蛋白的测定方法包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合，通过免疫分析测定从生物体中分离的试样中的甲状腺球蛋白。甲状腺球蛋白的免疫分析用试剂具备含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液。

Method and reagent for determination of thyroglobulin

The invention discloses a method for the determination of thyroglobulin and a determination reagent, which is not affected by anti-thyroglobulin antibody and can more accurately determine the thyroglobulin content by single examination. The method for the determination of thyroglobulin includes a pretreatment procedure, in which the sample separated from the organism is mixed with a pretreatment solution containing either or both surfactants and acidifiers, and the thyroglobulin in the sample separated from the organism is determined by immunoassay. The immunoassay reagent for thyroglobulin has a pretreatment solution containing either or both surfactants and acidifiers.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】甲状腺球蛋白的测定方法及测定试剂
本专利技术涉及一种甲状腺球蛋白的测定方法及测定试剂。
技术介绍
甲状腺球蛋白(Tg)为仅由甲状腺滤泡细胞制造的分子量66万的糖蛋白。生物合成的Tg被释放至滤泡腔。在该过程中，通过过氧化物酶的作用而碘分子与Tg分子中的酪氨酸基结合，进行甲状腺激素的合成。滤泡腔的Tg再次被摄入滤泡细胞，在滤泡细胞内被分解，引起甲状腺激素的释放。另外，该过程通过促甲状腺激素(TSH)的作用而被活化。因此，在正常时，Tg本身向血液中的释放仅极少发生，Tg的血中释放表示甲状腺的某些异常。因此，Tg的脏器特异性高，在甲状腺疾病中为非常有用的标记物。特别是，血中Tg被作为了解甲状腺分化癌的手术评价、及有无术后复发或转移的标记物使用。此外，在突眼性甲状腺肿的治疗效果、缓解指标、先天性甲状腺功能减退症的类型的确定或鉴别、治疗监测等中也是有用的。另外，也暗示通过与影像诊断组合进行结节性甲状腺瘤的术前诊断、或鉴别良性甲状腺疾病与恶性肿瘤的可能性。但是，被检者为抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)阳性的情况下，即使实际上为高Tg值，也存在由于测定上的问题而显示低值的情况。例如，在甲状腺癌中，患者的20～30％为TgAb阳性，因此有必要在Tg测定时同时测定TgAb。另外，在TgAb阳性的桥本病中，难以准确地测定Tg的量，同样地，在观察到TgAb阳性的其它自体免疫性疾病(突眼性甲状腺肿)中，也有可能不能准确地测定Tg的量。现有技术文献非专利文献非专利文献1:SpencerCA，TakeuchiMandKazarosyanM：Currentstatusandperformancegoalsforserumthyroglobulinassays.，ClinChem，42，164－173(1996)
技术实现思路
专利技术所要解决的技术问题如果对于如上所述的TdAb阳性的患者也能准确地测量Tg的量，则有可能可以广泛利用于甲状腺疾病的治疗监测。本专利技术的目的在于，提供一种甲状腺球蛋白的测定方法及测定试剂，所述测定方法不受抗甲状腺球蛋白抗体的干扰的影响，可通过单独检查更准确地测定甲状腺球蛋白量。用于解决问题的技术方案本专利技术人等为了实现上述目的而进行了深入研究，结果发现，在测定生物体试样中的甲状腺球蛋白时，通过在将所述生物体试样供于免疫反应之前设置前处理工序，从而不受抗甲状腺球蛋白抗体的影响，可得到更准确的甲状腺球蛋白测定值，从而完成了本专利技术，其中，所述前处理工序将含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。本专利技术的构成如下所述。(1)一种通过免疫分析测定从生物体中分离的试样中的甲状腺球蛋白的方法，其包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。(2)根据(1)所述的方法，其中，所述前处理液含有酸性化剂，前处理工序中的酸性化剂的终浓度超过0.05N且为0.5N以下。(3)根据(1)所述的方法，其中，所述前处理液含有表面活性剂，该表面活性剂为阴离子型表面活性剂。(4)根据(3)所述的方法，其中，所述前处理工序在加热条件下进行。(5)一种甲状腺球蛋白的免疫分析用试剂，其具备含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液。专利技术效果根据本专利技术，可以提供一种Tg的测定方法及测定试剂，其即使在含有抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)的生物体试样中，也使甲状腺球蛋白(Tg)从TgAb游离并降低相互作用的影响，从而可更准确地测定试样中所含的Tg量。附图说明图1是比较了酸性化前处理样品和未处理样品的Tg测定结果的图。图2是比较了酸性化前处理样品和未处理样品的Tg测定结果的图。图3是对于在酸性化前处理样品和未处理样品中可看到Tg测定结果背离的血清被检体，将进行了酸性化的样品和未处理的样品供于凝胶过滤柱的色谱图。图4是对于在酸性化前处理样品和未处理样品中在Tg测定结果上没有看到差异的血清被检体，将进行了酸性化的样品和未处理的样品供于凝胶过滤柱的色谱图。图5是表示酸性化前处理液的酸浓度与被检体的Tg测定值的相关性的图。图6是比较了SDS前处理样品和未处理样品的Tg测定结果的图。图7是比较了SDS前处理样品和未处理样品的Tg测定结果的图。具体实施方式本说明书中所记载的“％”的浓度只要没有特殊说明则表示重量/体积(w/v)的浓度。＜甲状腺球蛋白的测定方法＞本专利技术中所测定的甲状腺球蛋白(Tg)为源自任意的动物的Tg，优选为源自哺乳动物(例如人、猴子、黑猩猩等灵长类；小鼠、大鼠、兔等啮齿类；狗、猫等宠物；猪、牛等家畜；马、绵羊等驯化动物)的Tg，更优选为源自灵长类的Tg，特别优选为源自人的Tg。1.前处理工序本专利技术的方法为通过使生物体试样和抗体反应、即免疫反应而测定存在于生物体试样中的Tg的方法，其特征在于，包含在免疫反应(反应工序)之前将生物体试样和前处理液进行混合的前处理工序。通过前处理工序，可以形成使Tg从自身抗体(TgAb)等游离的状态。前处理液可以含有表面活性剂及酸性化剂中的任一者，也可以含有两者。优选前处理液含有表面活性剂或酸性化剂中的任一者。在所述前处理工序中进行混合的生物体试样和前处理液的体积比优选设为1：10～10：1，特别优选设为1：5～5：1，进一步优选设为1：3～3：1。本专利技术中所使用的生物体试样只要是可能含有Tg的试样，就没有特别限定，可举出例如：血清、血浆、全血、尿、便、口腔粘膜、咽粘膜、肠道粘膜及活检试样(例如甲状腺细针抽吸细胞学检查(Fineneedleaspiration：FNA)试样、肠道试样、肝脏试样)。优选生物体试样为血清或血浆。作为所述前处理液中所含的表面活性剂，阴离子型表面活性剂、阳离子型表面活性剂、两性表面活性剂、非离子型表面活性剂中的任一者均可使用，特别优选阴离子型表面活性剂。作为阴离子型表面活性剂，可以优选使用十二烷基硫酸钠(SDS)、N-月桂酰肌氨酸、十二烷基硫酸锂、十二烷基苯磺酸钠、脱氧胆酸等，特别可以优选使用SDS。表面活性剂的浓度需要为足以使Tg从TgAb等游离的浓度。使用SDS的情况下，作为与生物体试样混合而成的混合液的前处理时的浓度，优选设为0.1～12.5％，特别优选设为0.25～10％，进一步优选设为0.5～7.5％。通过将SDS的浓度设为0.1～10％而发挥使Tg充分地游离、同时不易产生SDS的析出等效果。将前处理液中所含的主要的表面活性剂设为阴离子型表面活性剂的情况下，在前处理后，为了减轻带入于反应体系的阴离子表面活性剂的影响，可以添加含有阳离子型表面活性剂、两性表面活性剂、非离子型表面活性剂中的一种或多种的中和液。作为所述前处理液中所含的酸性化剂，可以优选使用盐酸、硫酸、醋酸等。使用酸性化剂的情况下，前处理液的酸的当量度以前处理时的浓度计优选设为超过0.05N且0.5N以下、特别为0.1N以上且0.4N以下。通过将酸的当量度设为超过0.05N且0.5N以下，充分地得到前处理的效果，且可以将对后段的反应工序的影响最小化。在前处理中使用酸性化剂的情况下，优选以在与生物体试样的混合时不产生沉淀的方式添加阳离子型表面活性剂。作为阳离子型表面活性剂，特别优选在同一分子中具有碳原子数10个以上的一条链烷基和叔胺或季铵盐的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过免疫分析测定从生物体中分离的试样中的甲状腺球蛋白的方法，其包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.06 JP 2016-1738351.一种通过免疫分析测定从生物体中分离的试样中的甲状腺球蛋白的方法，其包含前处理工序，所述前处理工序将从生物体中分离的试样和含有表面活性剂及酸性化剂中的任一种或两者的前处理液进行混合。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述前处理液含...

【专利技术属性】
技术研发人员：山本纮辅，北村由之，八木慎太郎，青柳克己，
申请(专利权)人：富士瑞必欧株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP