凝集素结合性物质测定方法和凝集素结合性物质测定试剂盒、以及用于它们的嵌段化标记凝集素技术

一种凝集素结合性物质测定方法，其为测定试样中的凝集素结合性物质的方法，其具备：测定工序，其中，使嵌段化标记凝集素与上述试样接触，上述嵌段化标记凝集素具备：包含第1水溶性高分子的水溶性载体以及固定于上述水溶性载体的标记物和凝集素。载体的标记物和凝集素。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】凝集素结合性物质测定方法和凝集素结合性物质测定试剂盒、以及用于它们的嵌段化标记凝集素


[0001]本专利技术涉及凝集素结合性物质测定方法和凝集素结合性物质测定试剂盒、以及用于它们的嵌段化标记凝集素。

技术介绍

[0002]近年，作为肿瘤标志物这类恶性疾病监测标志物，正在广泛研究糖蛋白、糖脂、游离糖链这类糖链或具有糖链的物质的测定方法。其中，从不仅能够测定上述待测物质的量变，而且能够测定由该糖链变化导致的质变的观点出发，使用与待测物质的糖链部分结合的凝集素的测定方法、将该测定方法与利用该待测物质的抗体的测定组合的测定方法备受关注。作为上述能够利用凝集素来测定的待测物质(凝集素结合性物质)，例如已知在肝炎、肝硬化、肝细胞癌等中表达的癌胚糖蛋白即甲胎蛋白(AFP)中，具有添加岩藻糖得到的糖链(核心岩藻糖结构)的甲胎蛋白L3(AFP
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L3)为与肝细胞癌特异性高的标志物。目前，富士胶片和光纯药株式会社已制造销售将与AFP部分结合的抗体和与核心岩藻糖结构结合的凝集素(小扁豆凝集素(LCA))组合而成的“μTASWako AFP
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L3”作为AFP
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L3级分检测用试剂。该试剂使用LBA(Liquid
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phase Binding Assay，液相结合测定)法，上述LBA法通过离子交换柱、电泳分离、测定在液相中进行抗原抗体反应后形成的免疫复合体，需要使用为了实施该方法而设计的通用性低的专用设备等，具有测定成本高的问题。
[0003]作为上述凝集素结合性物质的测定方法，此外，例如国际公开第2017/183711号(专利文献1)记载了一种凝集素靶分子的捕捉方法，其包括：在含有凝集素反应性糖链的实体存在下，使凝集素与凝集素靶分子(凝集素结合性物质)结合。
[0004]另外，在使用抗体等探针与酶等标记物的复合体的免疫学测定方法中，正在进行以高灵敏度化为目标的各种研究，例如，作为上述复合体，国际公开第2006/070732号(专利文献2)记载了一种嵌段化酶探针复合体，其中，在分子量为20000～4000000的2分子以上的载体介由酶而结合，且使酶结合于该载体而成的复合体上结合有探针分子，日本特开2001
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181299号公报(专利文献3)记载了在载体上结合2个以上的酶，且上述酶中的至少1个以上结合有对其它物质显示特异性结合性的蛋白质的酶
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蛋白质复合体。另外，例如，作为测定条件，日本特开2018
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4323号公报(专利文献4)、日本特开昭61
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79164号公报(专利文献5)记载了在免疫化学反应中共存葡聚糖等活化因子的技术。现有技术文献专利文献
[0005]专利文献1:国际公开第2017/183711号专利文献2:国际公开第2006/070732号专利文献3:日本特开2001
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181299号公报专利文献4:日本特开2018
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4323号公报专利文献5:日本特开昭61
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79164号公报

技术实现思路

专利技术所要解决的技术问题
[0006]但是，使用凝集素简便地测定凝集素结合性物质的方法尚未进行充分研究。另外，测定凝集素结合性物质的方法存在以下问题：即使仅使用凝集素，凝集素与糖链的亲和性比抗原抗体反应弱，因此利用CLEIA法(化学发光酶免疫测定法)等的高灵敏度测定是困难的。此外，在使用凝集素的测定方法中，凝集素也与目标物以外的物质(例如，结合于对象以外的蛋白质等的凝集素识别糖链)非特异性结合，因此背景变高，特异性变低，由此也具有难以以高灵敏度进行测定的问题。
[0007]本专利技术是鉴于上述技术问题而完成的，其目的在于，提供能够简便且高灵敏度测定试样中的凝集素结合性物质的凝集素结合性物质测定方法和凝集素结合性物质测定试剂盒、以及用于它们的嵌段化标记凝集素。用于解决问题的技术方案
[0008]本专利技术人等发现：在试样中的凝集素结合性物质的测定中，使用复合体(嵌段化标记凝集素)，其中，上述复合体具备包含水溶性高分子的水溶性载体以及固定于上述水溶性载体的标记物和凝集素，从而能够仅通过使其与上述试样接触的简便手法充分提高凝集素结合性物质的测定灵敏度，最终完成本专利技术。
[0009]通过上述见解而得到的本专利技术的方式如以下所示。(1)一种凝集素结合性物质测定方法，其为测定试样中的凝集素结合性物质的方法，其包括：测定工序，使嵌段化标记凝集素与上述试样接触，上述嵌段化标记凝集素具备：包含第1水溶性高分子构成的水溶性载体以及固定于上述水溶性载体的标记物和凝集素。(2)根据(1)记载的凝集素结合性物质测定方法，其中，在第2水溶性高分子存在下实施上述测定工序。(3)根据(1)或(2)记载的凝集素结合性物质测定方法，其中，上述嵌段化标记凝集素是第1水溶性高分子的重均分子量为200000以上的高分子量嵌段化标记凝集素与第1水溶性高分子的重均分子量小于100000的低分子量嵌段化标记凝集素的组合。(4)根据(1)～(3)中任一项记载的凝集素结合性物质测定方法，其中，上述测定工序还包括：使具备标记物和凝集素的标记化凝集素与上述试样接触的工序。(5)一种嵌段化标记凝集素，其用于(1)～(4)中任一项记载的凝集素结合性物质测定方法，上述嵌段化标记凝集素具备包含第1水溶性高分子的水溶性载体以及固定于上述水溶性载体的标记物和凝集素。(6)一种凝集素结合性物质测定试剂盒，其用于测定试样中的凝集素结合性物质，上述试剂盒包含(5)记载的嵌段化标记凝集素。(7)根据(6)记载的凝集素结合性物质测定试剂盒，其中，上述嵌段化标记凝集素是第1水溶性高分子的重均分子量为200000以上的高分子量嵌段化标记凝集素与第1水溶性高分子的重均分子量小于100000的低分子量嵌段化标记凝集素的组合。(8)根据(6)或(7)记载的凝集素结合性物质测定试剂盒，其还包含第2水溶性高分子。(9)根据(6)～(8)中任一项记载的凝集素结合性物质测定试剂盒，其还包含具备
标记物和凝集素的标记化凝集素。
[0010]应予说明，通过本专利技术的构成能够达到上述目的的理由尚不确定，但是本专利技术人等推测如下。即，本专利技术人等推测：在本专利技术的凝集素结合性物质测定中使用的嵌段化标记凝集素中，与上述凝集素结合性物质结合的凝集素和标记物被固定于包含水溶性高分子的水溶性载体，因此由多种凝集素为高分子的上述水溶性载体形成一体的复合体。如果其与试样中的凝集素结合性物质接触，则上述多种凝集素分别与目标物质即凝集素结合性物质的凝集素结合性糖链结构结合，因此即使凝集素与上述凝集素结合性糖链结构的各自的结合点上的亲和性弱，但是针对一个复合体产生多个结合点而使复合体整体的亲和性提高，能够以高灵敏度测定上述凝集素结合性物质。专利技术的效果
[0011]根据本专利技术，能够提供能够简便且高灵敏度测定试样中的凝集素结合性物质的凝集素结合性物质测定方法和凝集素结合性物质测定试剂盒，以及用于它们的嵌段化标记凝集素。
附本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种凝集素结合性物质测定方法，其为测定试样中的凝集素结合性物质的方法，所述方法包括：测定工序，其中，使嵌段化标记凝集素与所述试样接触，所述嵌段化标记凝集素具备：包含第1水溶性高分子的水溶性载体、以及固定于所述水溶性载体的标记物和凝集素。2.根据权利要求1所述的凝集素结合性物质测定方法，其中，在第2水溶性高分子的存在下实施所述测定工序。3.根据权利要求1或2所述的凝集素结合性物质测定方法，其中，所述嵌段化标记凝集素是第1水溶性高分子的重均分子量为200000以上的高分子量嵌段化标记凝集素与第1水溶性高分子的重均分子量小于100000的低分子量嵌段化标记凝集素的组合。4.根据权利要求1～3中任一项所述的凝集素结合性物质测定方法，其中，所述测定工序还包括：使具备标记物和凝集素的标记化凝集素与所述试样接触的工序。5.一种嵌段化标记凝集素...

【专利技术属性】
技术研发人员：西井友教，冈田和训，石川直树，饭田久美子，八木慎太郎，青柳克己，
申请(专利权)人：富士瑞必欧株式会社，
类型：发明
国别省市：