细胞外囊泡的清洗方法技术

本发明专利技术提供用于在操作细胞外囊泡的系统中降低杂质的混入的技术。更具体而言，本发明专利技术提供细胞外囊泡的清洗方法等，所述清洗方法包含用非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡，所述非离子性表面活性剂为包含

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞外囊泡的清洗方法


[0001]本专利技术涉及细胞外囊泡的清洗方法等。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡(extracellular vesicles：EV)是由各种细胞分泌的、具有膜结构的微小囊泡，存在于血液等体液中或细胞培养液中。被分泌至细胞外的细胞外囊泡包含：外泌体(exosome)、核外粒体(ectosome)，凋亡小体(apoptotic bleb)。细胞外囊泡是包含承担细胞间的信息传达等功能的各种物质的多样化集团，因此为了诊断、制药等目的而正在被解析。因此，需要开发对这样的解析有用的细胞外囊泡的清洗方法。例如，专利文献1记载了一种EV的分离方法，其通过在免疫沉淀时和/或清洗时添加非离子性表面活性剂，而使固相载体彼此间的凝聚降低。
[0003]现有技术文献
[0004]专利文献
[0005]专利文献1：国际公开第2015/068772号

技术实现思路

[0006]专利技术所解决的技术问题
[0007]在检测体液等检体中的EV内包含的物质的情况下，该物质可能也大量存在于检体中的EV之外。通常而言，EV中包含的对象物质的量与检体中的存在于EV外的相同物质的量相比，是微量的。因此在对从检体回收的EV中的对象物质进行检测或测定时，体液中的大量存在于EV外的该物质会作为杂质混入，成为背景，因此难以对EV中的对象物质进行检测或测定。例如，有报告称通过对作为EV中的癌症标志物的CEA进行测定，可提高诊断性能，但在对血液检体来源的EV中的CEA进行检测或测定的情况下，血液检体中包含的CEA显著比EV多，因此在EV外的CEA作为杂质吸附在EV表面、容器表面时，无法准确地检测或测定作为对象物质的EV内CEA。
[0008]因此，本专利技术的目的是开发能够在操作细胞外囊泡的系统中降低杂质混入的方法。
[0009]解决问题的技术手段
[0010]本专利技术人等进行了深入研究，结果发现，通过使用包含给定的非离子性表面活性剂的清洗液清洗EV，能够降低EV外包含的相同对象物质等杂质(例如，与检测或测定的对象物质相同的物质)的混入量，完成了本专利技术。
[0011]即，本专利技术如下。
[0012][1]一种细胞外囊泡的清洗方法，其包含：
[0013]用非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡，所述非离子性表面活性剂为包含
‑
O
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
x
‑
H表示的结构的链状化合物，式中，x为1～300。
[0014][2]根据项[1]的方法，其中，
[0015]所述非离子性表面活性剂为醇乙氧基化物。
[0016][3]根据项[2]的方法，其中，
[0017]醇乙氧基化物为式(I)表示的化合物：
[0018][化学式1][0019][0020]式中，x为15～100；
[0021]y为0以上的整数；
[0022]z为0以上的整数；
[0023]y≥z；
[0024]y+z为5～30。
[0025][4]根据项[2]或[3]的方法，其中，
[0026]醇乙氧基化物为HLB为15以上或碳链的碳原子数为16以下的醇乙氧基化物。
[0027][5]根据项[1]的方法，其中，
[0028]所述非离子性表面活性剂为聚氧乙烯
‑
聚氧化亚烷基嵌段共聚物。
[0029][6]根据项[5]的方法，其中，
[0030]聚氧乙烯
‑
聚氧化亚烷基嵌段共聚物为式(III)表示的聚氧乙烯
‑
聚氧丙烯嵌段共聚物：
[0031][化学式2][0032]HO
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
x2
‑
((
‑
CH(
‑
CH3))CH2‑
O
‑
)
y2
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
z2
‑
H(III)
[0033]式中，x2为1以上的整数；
[0034]y2为10～100；
[0035]z2为1以上的整数；
[0036]x2+z2为20～300。
[0037][7]根据项[1]～[6]中的任一种方法，其用0.001～10.0w/v％的所述非离子性表面活性剂处理细胞外囊泡。
[0038][8]根据项[1]～[7]中的任一种方法，其中，
[0039]细胞外囊泡为外泌体。
[0040][9]根据项[1]～[8]中的任一种方法，其中，
[0041]用所述非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡是指：用所述非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡与细胞外囊泡膜结合物质的复合体。
[0042][10]根据项[1]～[9]中的任一种方法，其中，
[0043]细胞外囊泡膜结合物质是针对四跨膜蛋白的抗体。
[0044][11]一种细胞外囊泡纯化物的制造方法，其包含：
[0045](1)用非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡，所述非离子性表面活性剂为包含
‑
O
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
x
‑
H表示的结构的链状化合物，式中，x为1～300；和
[0046](2)分离清洗过的细胞外囊泡。
[0047][12]根据项[11]的方法，其中，
[0048]所述非离子性表面活性剂为醇乙氧基化物或聚氧乙烯
‑
聚氧丙烯嵌段共聚物。
[0049][13]根据项[11]或[12]的方法，其通过包含以下内容的步骤进行：
[0050](1
’
)用细胞外囊泡膜结合物质对细胞外囊泡进行处理，形成细胞外囊泡与细胞外囊泡膜结合物质的复合体；
[0051](2
’
)用所述非离子性表面活性剂清洗所述复合体；和
[0052](3
’
)分离所述复合体。
[0053][14]一种细胞外囊泡的分析方法，其包含：
[0054]对由[1]～[10]中的任一种方法清洗了的细胞外囊泡或由[11]～13]中的任一种方法制造得到的细胞外囊泡纯化物进行分析。
[0055][15]根据项[14]的方法，其中，
[0056]通过检测细胞外囊泡内部标志物来进行分析。
[0057][16]根据项[15]的方法，其中，
[0058]细胞外囊泡内部标志物为癌胚抗原(CEA)或CA125。
[0059][17]根据项[14]～[16]中的任一种方法，其通过包含以下内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞外囊泡的清洗方法，其包含：用非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡，所述非离子性表面活性剂为包含
‑
O
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
x
‑
H表示的结构的链状化合物，式中，x为1～300。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非离子性表面活性剂为醇乙氧基化物。3.根据权利要求2所述的方法，其中，醇乙氧基化物为式(I)表示的化合物：[化学式1]式中，x为15～100；y为0以上的整数；z为0以上的整数；y≥z；y+z为5～30。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，醇乙氧基化物为HLB为15以上或碳链的碳原子数为16以下的醇乙氧基化物。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非离子性表面活性剂为聚氧乙烯
‑
聚氧化亚烷基嵌段共聚物。6.根据权利要求5所述的方法，其中，聚氧乙烯
‑
聚氧化亚烷基嵌段共聚物为式(III)表示的聚氧乙烯
‑
聚氧丙烯嵌段共聚物：[化学式2]HO
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
x2
‑
((
‑
CH(
‑
CH3))CH2‑
O
‑
)
y2
‑
(
‑
CH2‑
CH2‑
O
‑
)
z2
‑
H(III)式中，x2为1以上的整数；y2为10～100；z2为1以上的整数；x2+z2为20～300。7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，用0.001～10.0w/v％的所述非离子性表面活性剂处理细胞外囊泡。8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，细胞外囊泡为外泌体。9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，用所述非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡是指：用所述非离子性表面活性剂清洗细胞外囊泡与细胞外囊泡...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾然，浅井芙美，犬塚达俊，
申请(专利权)人：富士瑞必欧株式会社，
类型：发明
国别省市：