含海藻糖的哺乳动物细胞保存用液制造技术

本发明专利技术的课题在于提供能够对在液体中保存哺乳动物细胞时产生的细胞生存率降低、在液体中保存哺乳动物干细胞时产生的自复制能力降低进行有效地抑制，并且在将哺乳动物细胞施予至哺乳动物的生物体内时，对哺乳动物的生存状态产生不良影响的可能性低的哺乳动物细胞保存用液等；作为其解决手段，使用包含海藻糖或其衍生物或者它们的盐、及作为pH调节剂的碳酸氢钠等碳酸氢盐、并且pH为6.5～8.5的哺乳动物细胞保存用液来保存哺乳动物细胞。物细胞保存用液来保存哺乳动物细胞。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含海藻糖的哺乳动物细胞保存用液


[0001]本专利技术涉及包含海藻糖或其衍生物或者它们的盐(以下，有时将它们统称为“海藻糖类”)、并且氢离子指数(pH)为6.5～8.5的哺乳动物细胞保存用液(以下，有时称为“本申请哺乳动物细胞保存用液”)；使用本申请哺乳动物细胞保存用液来保存哺乳动物细胞的方法等。

技术介绍

[0002]近年来，由于干细胞研究的迅速发展，向再生医疗中应用的形势高涨，其知识和理解不仅在研究者中、而且在普通人中也得到了广泛普及。使用干细胞的再生医疗是以利用干细胞所具有的自复制能力和多能性、干细胞分泌的因子来恢复因各种疾病而受到损伤的细胞和组织的功能为目的的医疗。若对白血病、再生不良性贫血等血液疑难病患者进行骨髓移植，造血干细胞在患者体内成活，在几乎一生内维持造血能力成为可能。此外，近来很多研究者以使用除造血干细胞以外的干细胞的临床应用为目标，对中枢神经、末梢神经、骨髓、小肠等中的干细胞进行鉴定，已开始实践针对外伤性疾病、组织变性疾病进行组织干细胞移植治疗(非专利文献1～3)。另一方面，癌症免疫细胞疗法是将具有攻击癌症的功能的免疫细胞取出至体外，强化其功能后再次移植回体内的最先进的细胞医疗，并已实践了树突状细胞疫苗疗法、αβT细胞疗法、γδT细胞疗法、CTL疗法、自然杀伤细胞疗法(NK细胞疗法)等使用T细胞的疗法。
[0003]在长期保存用于移植治疗中的干细胞、T细胞的情况下，在液体中保存时无法良好地维持细胞生存率。例如，已有报道称，将人骨髓干细胞在生理盐水中冷藏保存(4℃)时，细胞生存率在48小时后降低至40％以下，在72小时后降低至20％以下(非专利文献4)。因此，长期保存移植用干细胞、移植用T细胞时，一般进行冷冻保存。但是，由于在冷冻保存液中通常添加有DMSO、甘油等冷冻保存剂，因此，将经冷冻保存的干细胞、T细胞解冻之后，需要在进行移植治疗之前除去冷冻保存剂，存在耗费劳力的问题。另外，即使在冷冻保存液中添加冷冻保存剂，冷冻时水的结晶化对细胞骨架的损伤也很大，冷冻融解后的细胞生存率降低也成为问题。因此，当务之急是开发出简便性优异、且能够抑制细胞生存率降低的细胞保存液。
[0004]本申请的专利技术人报道了海藻糖具有抑制在液体中保存哺乳动物细胞时所产生的细胞生存率降低的作用(专利文献1及2)。但是，并不知晓在调节这些液体的pH时，抑制细胞生存率降低的效果进一步提高、具有抑制哺乳动物干细胞的自复制能力降低的效果。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：日本特开2012
‑
115253号公报
[0008]专利文献2：国际公开第2014/208053号小册子
[0009]非专利文献
[0010]非专利文献1：Gage,F.H.Science 287:1433
‑
1438(2000)
[0011]非专利文献2：Morrison,S.J.等人，Cell 96:737
‑
749(1999)
[0012]非专利文献3：Batle,E.等人，Cell 111:251
‑
263(2002)
[0013]非专利文献4：Lane,T.A.等人，Transfusion 49:1471
‑
1481(2009)

技术实现思路

[0014]专利技术所要解决的课题
[0015]本专利技术的课题在于提供能够对在液体中保存哺乳动物细胞时产生的细胞生存率降低、在液体中保存哺乳动物干细胞时产生的自复制能力降低进行有效地抑制，并且在将哺乳动物细胞施予至哺乳动物的生物体内时，对哺乳动物的生存状态产生不良影响的可能性低的哺乳动物细胞保存用液等。
[0016]用于解决课题的手段
[0017]本申请的专利技术人为了解决上述课题而持续进行了深入研究。在该过程中发现，若在包含海藻糖类和作为pH调节剂的碳酸氢盐、并且pH为6.5～8.5的液体中保存哺乳动物细胞，则即使该液体不具有pH缓冲作用的情况下，也能够有效地抑制细胞死亡，提高活细胞的比例。另外，还确认了若在该液体中保存哺乳动物干细胞，则即使该液体不具有pH缓冲作用的情况下，也可以有效地抑制哺乳动物干细胞的自复制能力降低。本专利技术是基于这些见解而完成的。
[0018]即，本专利技术如下所述。
[0019]〔1〕哺乳动物细胞保存用液，其包含海藻糖或其衍生物或者它们的盐、及作为pH调节剂的碳酸氢盐，并且pH为6.5～8.5。
[0020]〔2〕如上述〔1〕所述的保存用液，其中，碳酸氢盐为碳酸氢钠。
[0021]〔3〕如上述〔1〕或〔2〕所述的保存用液，其进一步包含多糖类或其衍生物或者它们的盐。
[0022]〔4〕如上述〔1〕～〔3〕中任一项所述的保存用液，其为等渗液。
[0023]〔5〕如上述〔4〕所述的保存用液，其中，等渗液为乳酸林格液。
[0024]〔6〕如上述〔3〕～〔5〕中任一项所述的保存用液，其中，多糖类为葡聚糖。
[0025]〔7〕如上述〔1〕～〔6〕中任一项所述的保存用液，其中，海藻糖或其衍生物或者它们的盐的浓度为2.0～6.0(w/v)％。
[0026]〔8〕如上述〔6〕或〔7〕所述的保存用液，其中，葡聚糖或其衍生物或者它们的盐的浓度为4.0～7.0(w/v)％。
[0027]〔9〕如上述〔1〕～〔8〕中任一项所述的保存用液，其用于在0～40℃保存哺乳动物细胞。
[0028]〔10〕如上述〔1〕～〔9〕中任一项所述的保存用液，其用于将哺乳动物细胞保存6小时～14天。
[0029]〔11〕如上述〔1〕～〔10〕中任一项所述的保存用液，其用于抑制哺乳动物细胞的生存率降低。
[0030]〔12〕如上述〔1〕～〔11〕中任一项所述的保存用液，其用于抑制哺乳动物细胞的自复制能力降低。
[0031]〔13〕如上述〔1〕～〔12〕中任一项所述的保存用液，其用于哺乳动物细胞的移植。
[0032]〔14〕如上述〔1〕～〔13〕中任一项所述的保存用液，其中，哺乳动物细胞为哺乳动物干细胞。
[0033]〔15〕如上述〔14〕所述的保存用液，其中，哺乳动物干细胞为哺乳动物间充质干细胞。
[0034]〔16〕粉末制剂，其包含海藻糖或其衍生物或者它们的盐、及作为pH调节剂的碳酸氢盐，并用于制备上述〔1〕～〔15〕中任一项所述的保存用液。
[0035]〔17〕如上述〔16〕所述的粉末制剂，其中，碳酸氢盐为碳酸氢钠。
[0036]〔18〕哺乳动物细胞的保存方法，其包括在保存用液中保存哺乳动物细胞的工序，所述保存用液包含海藻糖或其衍生物或者它们的盐、及作为pH调节剂的碳酸氢盐，并且pH为6.5～8.5。
[0037]〔19〕如上述〔18〕所述的保存方法，其中，碳酸氢盐为碳酸氢钠。
[0038]〔20〕如上述〔18〕或〔19〕所述的保存方法，其中，保存用液进一步包含多糖类或其本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.哺乳动物细胞保存用液，其包含海藻糖或其衍生物或者它们的盐、及作为pH调节剂的碳酸氢盐，并且pH为6.5～8.5。2.如权利要求1所述的保存用液，其中，碳酸氢盐为碳酸氢钠。3.如权利要求1或2所述的保存用液，其进一步包含多糖类或其衍生物或者它们的盐。4.如权利要求1～3中任一项所述的保存用液，其为等渗液。5.如权利要求4所述的保存用液，其中，等渗液为乳酸林格液。6.如权利要求3～5中任一项所述的保存用液，其中，多糖类为葡聚糖。7.如权利要求1～6中任一项所述的保存用液，其中，海藻糖或其衍生物或者它们的盐的浓度为2.0～6.0(w/v)％。8.如权利要求6或7所述的保存用液，其中，葡聚糖或其衍生物或者它们的盐的浓度为4.0～7.0(w/v)％。9.如权利要求1～8中任一项所述的保存用液，其用于在0～40℃保存哺乳动物细胞。10.如权利要求1～9中任一项所述的保存用液，其用于将哺乳动物细胞保存6小时～14天。11.如权利要求1～10中任一项所述的保存用液，其用于抑制哺乳动物细胞的生存率降低。12.如权利要求1～11中任一项所述的保存用液，其用于抑制哺乳动物细胞的自复制能力降低。13.如权利要求1～12中任一项所述的保存用液...

【专利技术属性】
技术研发人员：桥本宗祐，西村益浩，藤田泰毅，多田昭博，椿山谅平，小野寺杏花，野村嘉纪，白川智景，
申请(专利权)人：株式会社大塚制药工场，
类型：发明
国别省市：