一种生殖道病原体核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，包括加入检测样品后同时进行荧光定量PCR检测且呈冻干状态的第一检测组件、第二检测组件和第三检测组件，第一检测组件用以检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌，第二检测组件用以检测解脲支原体和人型支原体，第三检测组件用以检测生殖支原体。本发明专利技术能同时检测生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲支原体、人型支原体和生殖支原体5种核酸，将上述5种病原微生物的检测集成在一个耗材内，同时采用冻干工艺，提高试剂稳定性，单人份一次性使用，只需一次采样、一步操作，极大地解放了实验操作人员，降低检测成本，同时减少患者不便，减轻患者经济负担。

A Kit for Detecting Genital Pathogen Nucleic Acid

The invention discloses a genital tract pathogen nucleic acid detection kit, which comprises the first detection module, the second detection module and the third detection module, which simultaneously carry out fluorescence quantitative PCR detection and freeze-dried state after adding detection samples. The first detection module is used to detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae, the second detection module is used to detect Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis, and the third detection module is used to detect Mycoplasma ho The detection module is used to detect Mycoplasma genitalium. The invention can simultaneously detect five nucleic acids of Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis and Mycoplasma genitalium, and integrates the detection of the five pathogenic microorganisms in a consumable material. At the same time, the freeze-drying process is adopted to improve the stability of the reagent, and a single sample and one-step operation are used, which greatly liberates the experimental operator. To reduce the cost of detection, reduce the inconvenience of patients and reduce the financial burden of patients.

【技术实现步骤摘要】
一种生殖道病原体核酸检测试剂盒
本专利技术属于分子诊断
，具体涉及一种生殖道病原体核酸检测试剂盒。
技术介绍
不孕症是指一年未采取避孕措施，性生活正常而未能成功妊娠。研究表明，不孕症困扰着全球约16％的育龄夫妇。国内外的调查均表明，生物学因素中的输卵管因素是造成中国不孕症的首要因素。而生殖道病原体的感染是导致不孕不育的主要因素。支原体、衣原体和淋球菌是生殖道感染的主要病原菌，可引起男性尿道炎、女性阴道炎、宫颈炎、盆腔炎及不孕症等。沙眼衣原体(CT)引起的性传播疾病是全世界近年来主要的导致不孕症的性传播疾病。CT感染的主要病理改变是慢性炎症，感染前期可能无明显临床症状，但是随着感染的发展，会引发组织损伤，后期还可形成瘢痕，对器官的正常功能造成影响。淋病奈瑟菌(NG)为淋病的病原菌，可造成黏膜上皮的损伤，导致输卵管阻塞、粘连，从而影响黏膜上皮的正常分泌机制，导致不孕。淋球菌性附睾-睾丸炎可导致持续性的少精症、无精症。感染生殖道的支原体中的主要包括解脲支原体(UU)、人型支原体(MH)和生殖器支原体(MG)三种类型。支原体可在生殖道细胞表面形成黏附，对正常的细胞进行杀伤从而引起子宫内膜、输卵管慢性炎症的发生，输卵管黏膜遭到损伤后，会造成输卵管粘连或阻塞；另外，UU、MH和MG还对输卵管纤毛的运动造成一定的影响，阻碍受精卵的形成，从而导致不孕症的发生。目前临床用于生殖道感染病原体检测的方法有培养技术、免疫技术和PCR技术等，这些技术在临床诊断中已发挥了巨大的作用，但仍存在一些缺点。培养技术繁琐而费时；免疫技术要有特异的抗血清。PCR技术本身的优越性是无可厚非的，但是由于实验步骤较多，而PCR气溶胶又极易发生污染，导致严重的假阳性结果，配套仪器昂贵，耗材采取开放性设计，对生物安全性考虑不够。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种生殖道病原体核酸检测试剂盒。本专利技术的技术方案如下：一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，包括加入检测样品后同时进行荧光定量PCR检测且呈冻干状态的第一检测组件、第二检测组件和第三检测组件，第一检测组件用以检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌，第二检测组件用以检测解脲支原体和人型支原体，第三检测组件用以检测生殖支原体；其中，第一至第三检测组件均由海藻糖、甘露醇、PEG和检测剂组合物混合后冻干制成，第一至第三检测组件的检测剂组合物中均由10×PCR缓冲液、dNTPs、检测引物对、内参引物对、检测探针、内参探针、MgCl2、BSA、r-Taq酶、UNG酶和水组成，海藻糖的量为所对应的检测剂组合物的1.8N11％，甘露醇的量为所对应的检测剂组合物的1.5～5％，PEG的量为所对应的检测剂组合物的0.5～2.5％，上述百分比均为质量体积百分比，BSA在所对应的检测剂组合物中的浓度为0.01～0.03mg/mL，上述PEG的分子量为5500～8000。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述第一检测组件中，其检测引物对由CT引物对和NG引物对组成，其检测探针由CT探针和NG探针组成，该CT引物对由分别如SEQIDNO01和02所示的CT上游引物和CT下游引物组成，该NG引物对由分别如SEQIDNO04和05所示的NG上游引物和NG下游引物组成，该CT探针的序列如SEQIDNO03所示，该NG探针的序列如SEQIDNO06所示。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述第二检测组件中，其检测引物对由MH引物对和UU引物对组成，其检测探针由MH探针和UU探针组成，该MH引物对由分别如SEQIDNO07和08所示的MH上游引物和MH下游引物组成，该UU引物对由分别如SEQIDNO10和11所示的UU上游引物和UU下游引物组成，该MH探针的序列如SEQIDNO09所示，该UU探针的序列如SEQIDNO12所示。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述第三检测组件中，其检测引物维MG引物对，其检测探针为MG探针，该MG引物对由分别如SEQIDNO13和14所示的MG上游引物和MG下游引物组成，该MG探针的序列如SEQIDNO15所示。在本专利技术的一个优选实施方案中，所述内参引物对由分别如SEQIDNO16和17所示的内参上游引物和内参下游引物组成，所述内参探针如SEQIDNO18所示。进一步优选的，所述第一至第三检测组件中，海藻糖的量为所对应的检测剂组合物的2～10％，甘露醇的量为所对应的检测剂组合物的2～5％，PEG的量为所对应的检测剂组合物的0.5～2％，上述百分比均为质量体积百分比。更进一步优选的，所述第一至第三检测组件中，BSA在所对应的检测剂组合物中的浓度为0.01～0.02mg/mL。更进一步优选的，所述PEG的分子量为6000～7000。本专利技术的有益效果是：本专利技术能同时检测生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲支原体、人型支原体和生殖支原体5种核酸，将上述5种病原微生物的检测集成在一个耗材内，同时采用冻干工艺，提高试剂稳定性，单人份一次性使用，只需一次采样、一步操作，极大地解放了实验操作人员，降低检测成本，同时减少患者不便，减轻患者经济负担。附图说明图1为本专利技术实施例2中单独检测沙眼衣原体的荧光PCR图。图2为本专利技术实施例2中沙眼衣原体菌液荧光PCR图。图3为本专利技术实施例2中单独检测淋病奈瑟菌的荧光PCR图。图4为本专利技术实施例2中淋病奈瑟菌菌液荧光PCR图。图5为本专利技术实施例2中单独检测解脲支原体的荧光PCR图。图6为本专利技术实施例2中解脲支原体菌液荧光PCR图。图7为本专利技术实施例2中单独检测人型支原体的荧光PCR图。图8为本专利技术实施例2中人型支原体菌液荧光PCR图。图9为本专利技术实施例2中单独检测生殖支原体的荧光PCR图。图10为本专利技术实施例2中生殖支原体菌液荧光PCR图。图11为本专利技术实施例3中样本原液1的检测结果图。图12为本专利技术实施例3中样本原液2的检测结果图。具体实施方式以下通过具体实施方式对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。实施例1一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，包括加入检测样品后同时进行荧光定量PCR检测且呈冻干状态的第一检测组件、第二检测组件和第三检测组件，第一检测组件用以检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌，第二检测组件用以检测解脲支原体和人型支原体，第三检测组件用以检测生殖支原体；其中，第一至第三检测组件均由海藻糖、甘露醇、PEG和检测剂组合物混合后冻干制成，第一至第三检测组件的检测剂组合物中均由10×PCR缓冲液、dNTPs、检测引物对、内参引物对、检测探针、内参探针、MgCl2、BSA、r-Taq酶、UNG酶和水组成，海藻糖的量为所对应的检测剂组合物的2～10％，甘露醇的量为所对应的检测剂组合物的2～5％，PEG的量为所对应的检测剂组合物的0.5～2％，上述百分比均为质量体积百分比，BSA在所对应的检测剂组合物中的浓度为0.01～0.02mg/mL，上述PEG的分子量为6000～7000。所述第一检测组件中，其检测引物对由CT引物对和NG引物对组成，其检测探针由CT探针和NG探针组成，该CT引物对由分别如SEQIDNO01和02所示的CT上游引物和CT下游引物组成，该NG引物对由分别如SEQIDNO04和04～6所示的NG上游引物和NG下游引物组成，该CT探针的序列如SEQIDNO03所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：包括加入检测样品后同时进行荧光定量PCR检测且呈冻干状态的第一检测组件、第二检测组件和第三检测组件，第一检测组件用以检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌，第二检测组件用以检测解脲支原体和人型支原体，第三检测组件用以检测生殖支原体；其中，第一至第三检测组件均由海藻糖、甘露醇、PEG和检测剂组合物混合后冻干制成，第一至第三检测组件的检测剂组合物中均由10×PCR缓冲液、dNTPs、检测引物对、内参引物对、检测探针、内参探针、MgCl2、BSA、r‑Taq酶、UNG酶和水组成，海藻糖的量为所对应的检测剂组合物的1.8～11％，甘露醇的量为所对应的检测剂组合物的1.5～5％，PEG的量为所对应的检测剂组合物的0.5～2.5％，上述百分比均为质量体积百分比，BSA在所对应的检测剂组合物中的浓度为0.01～0.03mg/mL，上述PEG的分子量为5500～8000。

【技术特征摘要】
1.一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：包括加入检测样品后同时进行荧光定量PCR检测且呈冻干状态的第一检测组件、第二检测组件和第三检测组件，第一检测组件用以检测沙眼衣原体和淋病奈瑟菌，第二检测组件用以检测解脲支原体和人型支原体，第三检测组件用以检测生殖支原体；其中，第一至第三检测组件均由海藻糖、甘露醇、PEG和检测剂组合物混合后冻干制成，第一至第三检测组件的检测剂组合物中均由10×PCR缓冲液、dNTPs、检测引物对、内参引物对、检测探针、内参探针、MgCl2、BSA、r-Taq酶、UNG酶和水组成，海藻糖的量为所对应的检测剂组合物的1.8～11％，甘露醇的量为所对应的检测剂组合物的1.5～5％，PEG的量为所对应的检测剂组合物的0.5～2.5％，上述百分比均为质量体积百分比，BSA在所对应的检测剂组合物中的浓度为0.01～0.03mg/mL，上述PEG的分子量为5500～8000。2.如权利要求1所述的一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述第一检测组件中，其检测引物对由CT引物对和NG引物对组成，其检测探针由CT探针和NG探针组成，该CT引物对由分别如SEQIDNO01和02所示的CT上游引物和CT下游引物组成，该NG引物对由分别如SEQIDNO04和05所示的NG上游引物和NG下游引物组成，该CT探针的序列如SEQIDNO03所示，该NG探针的序列如SEQIDNO06所示。3.如权利要求1所述的一种生殖道病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：所述第二检测组件中，其检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑丽金，朱伟灏，沈义峰，
申请(专利权)人：美林美邦厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35