静脉血栓风险基因多态性检测引物探针组及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种静脉血栓风险基因多态性检测试引物探针组及其检测试剂盒，包括以下用于荧光

【技术实现步骤摘要】
静脉血栓风险基因多态性检测引物探针组及其检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种静脉血栓风险基因多态性检测引物探针组及其检测试剂盒，属于生物医学检测

。

技术介绍

[0002]静脉血栓栓塞症
(VTE)
是指血液在静脉内不正常地凝结，使血管完全或不完全阻塞，属静脉回流障碍性疾病
。
研究显示，多种遗传因素在
VTE
发病中具有非常重要的作用
。
[0003]纤溶酶原激活物抑制物
‑
1(PAI
‑
1)
是组织型纤溶酶原激活物
(t
‑
PA)
的快速抑制物
。t
‑
PA
与
PAI
‑1间的动态平衡对维持血浆纤溶系统的稳态起决定性作用，
PAI
‑1活性或水平过高是血栓形成的主要原因之一
。
大量研究表明：
PAI
‑
1(4G/5G)
多态性与纤溶酶原激活物抑制物
‑1表达增高有关
。PAI
‑
1 4G/5G
多态性与亚洲人静脉血栓
(VTE)
风险增加显著相关
。
[0004]PROC
编码蛋白
C(PC)
，是人体重要的生理性抗凝蛋白，
PROC(574
‑
576del AAG)、PROC(565C>T)/>位点基因突变与个体发生
VTE
的风险增加之间存在关联
。
当
PC
缺陷
(
活性降低或表达减少
)
时，血栓抗凝蛋白缺陷风险增高
。PROC(574
‑
576del AAG)、PROC(565C>T)
变异会导致
PC
缺陷，进而增加血栓风险
。
[0005]THBD
编码血栓调节蛋白，是凝血酶激活蛋白
C
抗凝系统的重要成员
。
血栓调节蛋白的抗凝功能主要体现在协助凝血酶激活蛋白
C
方面，当血液凝固时，凝血酶激活蛋白
C
处于无活性状态，需要局部高浓度的凝血酶切割激活肽来激活凝血酶激活蛋白
C
成为活化的凝血酶激活蛋白
C
，这一单纯的凝血酶激活过程通常很缓慢，而在辅因子血栓调节蛋白的协助下，凝血酶激活蛋白
C
的活化速率提高
1000
倍，高效的产生足够的活化的凝血酶激活蛋白
C。
当
THBD(
‑
151G>T)
发生突变时，会导致血栓调节蛋白的表达量减少，从而降低血栓调节蛋白对凝血酶激活蛋白
C
的抗凝活性的激活
。
[0006]对
PAI
‑
1、PROC(565C>T)、PROC(574
‑
576delAAG)、THBD(
‑
151G>T)
进行基因多态性检测可以评估静脉血栓风险
。
[0007]目前，基因多态性检测方法有很多种，包括直接测序法
、
芯片法
、
限制性片段长度多态性法
、
扩增阻滞突变法
(ARMS
法
)、Taqman
荧光探针法等
。
其中，直接测序法和芯片法虽然一次可对多基因多位点进行检测，但是操作繁琐，检测周期长，成本相对较高，不利于临床推广
。
限制性片段长度多肽法需要对扩增产物进行凝胶电泳，不仅操作繁琐，而且非封闭管理操作容易引起污染造成假阳性
。ARMS
法和
Taqman
荧光探针法相结合，操作简便，灵敏度高，但是对单碱基突变，尤其是高
GC
含量基因中的单碱基突变的特异性较差，会导致非特异扩增，可能产生假阳性结果
。
因此，急需开发一种操作简单
、
特异性好
、
检测准确性高的人类静脉血栓风险基因多态性检测方法
。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种静脉血栓风险基因多态性检测引物探针组及其检测试剂盒，可
以有效解决上述问题
。
[0009]一种静脉血栓风险基因多态性检测引物探针组，包括以下用于荧光
PCR
熔解的引物和探针；
[0010]所述引物包括：
[0011]用于扩增
PAI
‑
1 4G/5G
位点的上游引物序列
PAI
‑1‑
F
，序列如
SEQ ID NO:1
所示；用于扩增
PAI
‑
1 4G/5G
位点的下游引物序列
PAI
‑1‑
R
，序列如
SEQ ID NO:2
所示；
[0012]用于扩增
PROC(565C>T)
位点的上游引物序列
PROC(565C>T)
‑
F
，序列如
SEQ ID NO:3
所示；用于扩增
PROC(565C>T)
位点的下游引物序列
PROC(565
[0013]C>T)
‑
R
，序列如
SEQ ID NO:4
所示；
[0014]用于扩增
PROC(574
‑
576delAAG)
位点的上游引物序列
PROC
‑
F
，序列如
SEQ ID NO:5
所示；用于扩增
PROC(574
‑
576delAAG)
位点的下游引物序列
PROC
‑
R
，序列如
SEQ ID NO:6
所示；
[0015]用于扩增
THBD(
‑
151G>T)
位点的上游引物序列
THBD(
‑
151G>T)
‑
F
，序列如
SEQ ID NO:7
所示；用于扩增
THBD(
‑
151G>T)
位点的下游引物序列
THBD(
‑
151G>T)
‑
R
，序列如
SEQ ID NO:8...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种静脉血栓风险基因多态性检测试引物探针组，其特征在于：包括以下用于荧光
PCR
熔解的引物和探针；所述引物包括：用于扩增
PAI
‑
1 4G/5G
位点的上游引物序列
PAI
‑1‑
F
，序列如
SEQ ID NO:1
所示；用于扩增
PAI
‑
1 4G/5G
位点的下游引物序列
PAI
‑1‑
R
，序列如
SEQ ID NO:2
所示；用于扩增
PROC(565C>T)
位点的上游引物序列
PROC(565C>T)
‑
F
，序列如
SEQ ID NO:3
所示；用于扩增
PROC(565C>T)
位点的下游引物序列
PROC(565C>T)
‑
R
，序列如
SEQ ID NO:4
所示；用于扩增
PROC(574
‑
576delAAG)
位点的上游引物序列
PROC
‑
F
，序列如
SEQ ID NO:5
所示；用于扩增
PROC(574
‑
576delAAG)
位点的下游引物序列
PROC
‑
R
，序列如
SEQ ID NO:6
所示；用于扩增
THBD(
‑
151G>T)
位点的上游引物序列
THBD(
‑
151G>T)
‑
F
，序列如
SEQ ID NO:7
所示；用于扩增
THBD(
‑
151G>T)
位点的下游引物序列
THBD(
‑
151G>T)
‑
R
，序列如
SEQ ID NO:8
所示；所述探针包括：用于检测
PAI
‑
1 4G/5G
位点的探针序列
PAI
‑1‑
P
，序列如
SEQ ID NO:9
所示；用于检测
PROC(565C>T)
位点的探针序列
PROC(565C>T)
‑
P
，序列如
SEQ ID NO:10
所示；用于检测
PROC(574
‑
576delAAG)
位点的探针序列
PROC
‑
P
，序列如
SEQ ID NO:11
所示；用于检测
THBD(
‑
151G>T)
位点的探针序列
THBD(
‑
151G>T)P
，序列如
SEQ ID NO:12
所示
。2.
一种权利要求1所述的引物探针组在制备静脉血栓风险基因多态性检测试剂中的应用
。3.
一种静脉血栓风险基因多态性检测试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈月琴，林民锋，翁水锦，
申请(专利权)人：美林美邦厦门生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：