The invention discloses a method for improving the construction of secretory expression vector of Pichia pastoris. The method uses natural human type I collagen signal peptide to replace the sequence of Pre-peptide of Saccharomyces cerevisiae alpha mating factor signal peptide of Pichia pastoris expression vector pPIC9K, and obtains the expression vector pPIC9K COL1P, which realizes the high secretory expression of human lysozyme, but not limited to one of human lysozymes. Protein.
【技术实现步骤摘要】
一种提高毕赤酵母分泌表达载体构建方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种提高毕赤酵母分泌表达载体构建方法。
技术介绍
随着生物技术的不断发展，利用基因工程技术开发重组蛋白已越来越受到人们的青睐。毕赤酵母(P.pastoris)作为甲醇酵母的一种，是单细胞低等真核生物，已发展成为广泛应用的表达宿主。毕赤酵母表达系统既有原核生物繁殖快、易于培养、培养基廉价和试验过程简单可行等特点，又具有强有力的启动子，还可以对外源蛋白进行加工折叠和翻译后修饰，具备了典型的真核生物表达体系的特点。毕赤酵母表达系统以其独特的优势和潜力已发展成为一个较为理想的蛋白表达系统，被国内外广泛应用于生产外源蛋白。外源蛋白在毕赤酵母系统中的分泌机制是多样的，其中信号肽引导蛋白质的分泌是蛋白质释放的主要方式之一，信号肽(signalpeptide)是存在于分泌蛋白质N末端的特异氨基酸序列，引导新合成的分泌性蛋白质至不同的转运系统。迄今在毕赤酵母成功实现外源蛋白分泌表达的信号肽主要类型包括酿酒酵母α-交配因子(α-MF)信号肽、酿酒酵母转化酶信号肽(SUC2)、毕赤酵母酸性磷酸酶信号肽(PHO...
【技术保护点】
1.一种提高毕赤酵母分泌表达载体构建方法，其特征在于：该方法利用天然人I型胶原蛋白信号肽，替换毕赤酵母表达载体pPIC9K的酿酒酵母α‑交配因子信号肽的Pre肽序列获得。
【技术特征摘要】
1.一种提高毕赤酵母分泌表达载体构建方法，其特征在于：该方法利用天然人I型胶原蛋白信号肽，替换毕赤酵母表达载体pPIC9K的酿酒酵母α-交配因子信号肽的Pre肽序列获得。2.根据权利要求1所述的提高毕赤酵母分泌表达载体构建方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：(1)pPIC9K原始载体的点突变将毕赤酵母pPIC9K原始载体中5709bp处XhoI酶切位点进行点突变；(2)提高毕赤酵母分泌表达载体的构建①设计合成引物根据天然人I型胶原蛋白信号肽的核苷酸序列和酿酒酵母α-交配因子信号肽序列，以天然人I型胶原蛋白信号肽替换酿酒酵母α-交配因子信号肽的Pre肽为目的，设计合成引物，引物序列如下：上游引物COL1P-BF：5'-TATGGATCCAAACGATGTTCAGCTTTGTGGACCTCCGGCTCCTG...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯增淼，李晓颖，李敏，杨金芳，高恩，杨小琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61
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