阿尔茨海默病突变蛋白、突变基因及其医药用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种阿尔茨海默病突变蛋白、突变基因及其医药用途。具体地，本发明专利技术涉及家族性阿尔茨海默病致病基因PSEN1编码的早老素蛋白1(presenilin 1)3个新突变位点。更具体地，本发明专利技术涉及一种蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NOs:1－3中任一序列所示。本发明专利技术人在中国EOFAD中发现PSEN1 3个新突变，它们与各家系AD的发病密切相关，具有应用于制备治疗和/或预防或者诊断阿尔茨海默病的药物或者试剂的潜力。

Alzheimer's Disease Mutant Protein, Mutant Gene and Their Medical Use

The invention belongs to the field of biomedicine, and relates to a mutant protein, mutant gene of Alzheimer's disease and its medical use. Specifically, the present invention relates to three novel mutation sites of presenilin 1 encoded by PSEN1, a pathogenic gene of familial Alzheimer's disease. More specifically, the present invention relates to a protein whose amino acid sequence is shown as any sequence in SEQ ID NOs:1-3. The inventor found 13 new mutations of PSEN 1 in EOFAD in China, which are closely related to the occurrence of AD in various families, and have the potential to prepare drugs or reagents for the treatment and/or prevention or diagnosis of Alzheimer's disease.

【技术实现步骤摘要】
阿尔茨海默病突变蛋白、突变基因及其医药用途
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种阿尔茨海默病突变蛋白、突变基因及其医药用途。具体地，本专利技术涉及家族性阿尔茨海默病致病基因PSEN1编码的早老素蛋白1(presenilin1)3个新突变位点。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease，AD)是痴呆最常见的类型，主要表现为以记忆障碍为特征的进行性全面认知功能减退。从遗传学角度，AD可分为家族性AD(familialAD，FAD)和散发性AD(sporadicAD，SAD)。FAD呈家族聚集性，发病年龄(ageatonset，AAO)较早，疾病进程较快，临床症状较严重。FAD与SAD存在共同的病理特点：细胞外淀粉样老年斑(senileplaque，SP)和细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillarytangles，NFTs)。淀粉样蛋白级联假说仍是AD发病的主流学说1，目前认为较易聚集的可溶性的淀粉样蛋白具有更大的神经毒性2,3。研究报道，FAD相关的致病基因突变可导致较长肽段Aβ42/Aβ43的绝对或相对升高4。早老素1基因(presenilin1，简称为PSEN1)、早老素2基因(presenilin2，简称为PSEN2)和淀粉样前体蛋白基因(amyloidprecursorprotein，简称为APP)是已知的3个重要的阿尔茨海默病致病基因，其中PSEN1是最常见的一种。PSEN1是常染色体显性遗传AD最常见的致病基因，目前世界范围内报道的PSEN1突变种类200余种(https://www.alzforum.org)，国内仅有数例报道5-12。已报道的200余种突变类型大多为错义突变，也有少数缺失和(或)插入等突变类型。大多数PSEN1突变为致病性突变，也有部分为基因多态性或致病性不明。由于不同的基因背景和(或)环境因素，不同的PSEN1突变位点或同一位点突变为不同的氨基酸类型，携带PSEN1突变的AD患者的临床表现具有较大的异质性。因此，发现携带PSEN1新突变的FAD有助于丰富FAD的临床表型和扩大FAD的突变谱，为开发防治阿尔茨海默病的药物和方法提供新的途径。
技术实现思路
本专利技术人对满足纳入和排除标准的FAD家系成员收集临床资料、影像学检查和血液标本。对3个早发性家族性阿尔茨海默病(EarlyonsetFamilyAlzheimer’sdisease,EOFAD)家系成员进行已知致病基因(APP,PSEN1,PSEN2)测序以筛查突变。对发现的PSEN1新突变位点进行突变信息分析。构建表达野生型和突变型PSEN1的体外细胞模型(HEK293/APPPsw)，检测PSEN1新突变对Aβ产生的影响。本专利技术人在3个EOFAD中发现了PSEN1的3个新突变位点PSEN1G111V、PSEN1M139L和PSEN1L172W。本专利技术人发现，该3个PSEN1突变在体外细胞水平均可导致Aβ产生的改变。3个新突变PSEN1G111V、PSEN1M139L和PSEN1L172W为很可能的致病突变，可能与早发AD有关。由此提供了下述专利技术：本专利技术的一个方面涉及一种突变的蛋白，其为野生型人PSEN1蛋白发生选自如下的任意1个、任意2个或者3个突变：G111V、M139L和L172W；优选地，所述野生型人PSEN1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；优选地，所述蛋白的氨基酸序列如SEQIDNOs:1－3中任一序列所示。表述形式G111V、M139L或L172W具有本领域技术人员知悉的含义，例如，分别是指野生型人PSEN1蛋白的第111个氨基酸由甘氨酸(G)突变为缬氨酸(V)，第139位的甲硫氨酸(M)突变为亮氨酸(L)，第172位的亮氨酸(L)突变为色氨酸(W)。PSEN1G111V的氨基酸序列如下：467aaMTELPAPLSYFQNAQMSEDNHLSNTVRSQNDNRERQEHNDRRSLGHPEPLSNGRPQGNSRQVVEQDEEEDEELTLKYGAKHVIMLFVPVTLCMVVVVATIKSVSFYTRKDQLIYTPFTEDTETVGQRALHSILNAAIMISVIVVMTILLVVLYKYRCYKVIHAWLIISSLLLLFFFSFIYLGEVFKTYNVAVDYITVALLIWNFGVVGMISIHWKGPLRLQQAYLIMISALMALVFIKYLPEWTAWLILAVISVYDLVAVLCPKGPLRMLVETAQERNETLFPALIYSSTMVWLVNMAEGDPEAQRRVSKNSKYNAESTERESQDTVAENDDGGFSEEWEAQRDSHLGPHRSTPESRAAVQELSSSILAGEDPEERGVKLGLGDFIFYSVLVGKASATASGDWNTTIACFVAILIGLCLTLLLLAIFKKALPALPISITFGLVFYFATDYLVQPFMDQLAFHQFYI(SEQIDNO:1)PSEN1M139L的氨基酸序列如下：467aaMTELPAPLSYFQNAQMSEDNHLSNTVRSQNDNRERQEHNDRRSLGHPEPLSNGRPQGNSRQVVEQDEEEDEELTLKYGAKHVIMLFVPVTLCMVVVVATIKSVSFYTRKDGQLIYTPFTEDTETVGQRALHSILNAAIISVIVVMTILLVVLYKYRCYKVIHAWLIISSLLLLFFFSFIYLGEVFKTYNVAVDYITVALLIWNFGVVGMISIHWKGPLRLQQAYLIMISALMALVFIKYLPEWTAWLILAVISVYDLVAVLCPKGPLRMLVETAQERNETLFPALIYSSTMVWLVNMAEGDPEAQRRVSKNSKYNAESTERESQDTVAENDDGGFSEEWEAQRDSHLGPHRSTPESRAAVQELSSSILAGEDPEERGVKLGLGDFIFYSVLVGKASATASGDWNTTIACFVAILIGLCLTLLLLAIFKKALPALPISITFGLVFYFATDYLVQPFMDQLAFHQFYI(SEQIDNO:2)PSEN1L172W的氨基酸序列如下：467aaMTELPAPLSYFQNAQMSEDNHLSNTVRSQNDNRERQEHNDRRSLGHPEPLSNGRPQGNSRQVVEQDEEEDEELTLKYGAKHVIMLFVPVTLCMVVVVATIKSVSFYTRKDGQLIYTPFTEDTETVGQRALHSILNAAIMISVIVVMTILLVVLYKYRCYKVIHAWLIISSLLLFFFSFIYLGEVFKTYNVAVDYITVALLIWNFGVVGMISIHWKGPLRLQQAYLIMISALMALVFIKYLPEWTAWLILAVISVYDLVAVLCPKGPLRMLVETAQERNETLFPALIYSSTMVWLVNMAEGDPEAQRRVSKNSKYNAESTERESQDTVAENDDGGFSEEWEAQRDSHLGPHRSTPESRAAVQELSSSILAGEDPEERGVKLGLGDFIFYSVLVGKASATASGDWNTTIACF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种突变的蛋白，其为野生型人PSEN1蛋白发生选自如下的任意1个、任意2个或者3个突变：G111V、M139L和L172W；优选地，所述野生型人PSEN1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；优选地，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NOs:1－3中任一序列所示。

【技术特征摘要】
1.一种突变的蛋白，其为野生型人PSEN1蛋白发生选自如下的任意1个、任意2个或者3个突变：G111V、M139L和L172W；优选地，所述野生型人PSEN1蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；优选地，所述蛋白的氨基酸序列如SEQIDNOs:1－3中任一序列所示。2.一种核酸分子，其编码权利要求1所述的蛋白；优选地，所述核酸分子如SEQIDNOs:4－6中任一序列所示。3.一种核酸构建体，其含有权利要求2所述的核酸分子；优选地，所述核酸构建体为重组载体；优选地，所述重组载体为重组表达载体。4.一种重组宿主细胞，其表达权利要求1所述的蛋白，或者含有权利要求2所述的核酸分子或者权利要求3所述的核酸构建体。5.一种组合物，其包含权利要求1所述的蛋白、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的核酸构建体或者权利要求4所述的重组宿主细胞；可选地，所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。6.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其能够特异性地结合权利要求1所述的蛋白。7.一种偶联物，其包含权利要求6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段以及偶联部分，其中，所述偶联部分为可检测的标记；优选地，所述偶联部分为放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶。8.一种引物或探针，其能够特异性地结合权利要求2所述的核酸分子；优选地，所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；优选地，所述荧光报告基团选自FAM、Hex、VIC、ROX和Cy5；优选地，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、TAMRA、JOE、BHQ2和BHQ3。9.一种试剂盒，其包含权利要求6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、权利要求7所述的偶联物或者包含权利要求8所述的引物或探针；优选地，当包含权利要求6所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或者权利要求7所述的偶联物时，所述试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾建平，贾龙飞，邱琼琼，王琪，李妍，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：北京,11