一种检测白血病融合基因和基因突变的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种检测白血病融合基因和基因突变的试剂盒，具体的本发明专利技术提供了一种PCR‑电化学基因芯片法检测10项白血病融合基因和NPM1基因突变的试剂盒，实验结果表明，本发明专利技术的试剂盒可同时检测多种白血病融合基因和基因突变，几乎覆盖所有常见型别；而且具有高度的特异性及良好的敏感性，准确性强。

【技术实现步骤摘要】
一种检测白血病融合基因和基因突变的试剂盒
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种检测白血病融合基因和基因突变的试剂盒。
技术介绍
白血病是造血系统的恶性克隆性疾病，由于造血干细胞受损，导致克隆中的白血病细胞失去进一步分化成熟的能力而停滞在细胞发育的不同阶段。大部分的白血病中都存在着包括缺失、重复、易位等染色体畸变，导致原癌基因或抑癌基因结构变异，原癌基因激活或抑癌基因失活，产生新的融合基因，编码融合蛋白。而融合基因通常被认为是与其相关的白白血病的重要标志，可通过检测融合基因来辅助诊断白血病，确定具有不同发病机制的白血病群探索发病原因。因此，本领域技术人员致力于开发可同时检测多种白血病融合基因和突变基因的检测方法，以提高检测效率降低检测成本。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测白血病融合基因和基因突变的试剂盒，及检测方法。在本专利技术的第一方面，提供了一种检测白血病相关基因变异的引物对组，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括选自以下引物对1至引物对5中的一种或多种引物对：引物对1：特异性扩增BCR-ABL融合基因，包括：BCR-ABLP190-F:ACTCGCAACAGTCCTTCGACASEQIDNO：1BCR-ABLP210-F:CCGCTGACCATCAATAAGGASEQIDNO：2BCR-ABLP230-F:AGTGCGTGGAGGAGATCGAGSEQIDNO：3BCR-ABLP190/P210/P230-R:ATTATAGCCTAAGACCCGGAGCSEQIDNO：4；引物对2：特异性扩增PML-RARA融合基因，包括：PML-RARABCR1/BCR2-F:CACCTCCAAGGCAGTCTCACSEQIDNO：7PML-RARABCR3-F:ATGAAGTGCTACGCCTCGGASEQIDNO：8PML-RARABCR1/BCR2/BCR3-R:ACCCCATAGTGGTAGCCTGASEQIDNO：9；引物对3：特异性扩增SIL-TAL1融合基因，包括：SIL-TAL1-F:GCAAACAGACCTCAGCTCCSEQIDNO：12SIL-TAL1-R:CGTTCAGCAGGACCAGGSEQIDNO：13；引物对4：特异性扩增CBFB-MYH11融合基因，包括：CBFB-MYH11TYPEA/D/E-F:TGGAGTTTGATGAGGAGCGAGSEQIDNO：16CBFB-MYH11TYPED/E-R:AGACACGTTGAGCTTCTGCCSEQIDNO：17CBFB-MYH11TYPEA-R:TGTTGACTTCCAGCCGCAGTSEQIDNO：18；引物对5：特异性扩增E2A-PBX1融合基因，包括：E2A-PBX1-F:ACCAGCCTCATGCACAACCSEQIDNO：21E2A-PBX1-R:GTTGTCCAGCCGCATCAGSEQIDNO：22。在另一优选例中，所述引物对组还包括第二引物对集，所述第二引物对集包括选自以下引物对6至引物对11中的一种或多种引物对：引物对6：特异性扩增TEL-AML1融合基因，包括：TEL-AML1-F:AACCTCTCTCATCGGGAAGACCSEQIDNO：25TEL-AML1-R:GCCTCGCTCATCTTGCCTSEQIDNO：26；引物对7：特异性扩增NPM-ALK融合基因，包括：NPM-ALK-F:AGAGGCAATGAATTACGAAGGCAGSEQIDNO：29NPM-ALK-R:GTTGGGGTTGTAGTCGGTCASEQIDNO：30；引物对8：特异性扩增MLL-AF10融合基因，包括：MLL-AF10883/979/1931-F：CCTCAGCCACCTACTACAGGASEQIDNO：33MLL-AF10883/979-R：TGCAGTAGTATCTTCCAAGCGSEQIDNO：34MLL-AF101931-R：CAAATGCCCAGAAGACTGCSEQIDNO：35；引物对9：特异性扩增AMLI-ETO融合基因，包括：AMLI-ETO-F：GCAAGTCGCCACCTACCACAGSEQIDNO：42AMLI-ETO-R：ACGTTGTCGGTGTAAATGAACTSEQIDNO：43引物对10：特异性扩增dup-MLL融合基因，包括：dupMLL-F：AGGCTTAGGAATCTTGACTTCTGSEQIDNO：38dupMLL-R：GGGACTTCGCACTCTGACTTSEQIDNO：39引物对11：特异性扩增NPM1基因突变，包括：NPM1A/B-F：TCCCAAAGTGGAAGCCAAASEQIDNO：46NPM1A/B-R：CAGCCAGATATCAACTGTTACAGASEQIDNO：47。在另一优选例中，所述第一引物对集包括引物对1至引物对5中的至少两种引物对。在另一优选例中，所述第一引物对集包括引物对1至引物对5中的五种引物对。在另一优选例中，所述第二引物对集包括引物对6至引物对11中的至少两种引物对。在另一优选例中，所述第一引物对集包括引物对6至引物对11中的六种引物对。在另一优选例中，所述第一引物对集和/或所述第二引物对集用于多重不对称PCR。在另一优选例中，所述第一引物对集和/或所述第二引物对集还包括：引物对12：GAPDH-FGAAGGTGAAGGTCGGAGTCSEQIDNO：51，GAPDH-RGAAGATGGTGATGGGATTTCSEQIDNO：52。本专利技术的第二方面，提供了一种检测白血病相关基因变异的信号探针组，所述信号探针组包括选自下组的一种或多种信号探针：BCR-ABL-SP：CGCTGAAGGGCTTSEQIDNO：6，PML-RARA-SP：GCTGCTCTGGGTCTCSEQIDNO：11，SIL-TAL1-SP：AGGGACGGGACGCSEQIDNO：15，CBFB-MYH11-SP：GTGTCCTTCTCCGAGSEQIDNO：20，和E2A-PBX1-SP：GCCTCCCGACTCCTASEQIDNO：24。在另一优选例中，所述信号探针组还包括选自下组的一种或多种信号探针：TEL-AML1-SP：GTCTCCCCGCCTGAASEQIDNO：28，NPM-ALK-SP：TAAGGTTGAAGTGTGGSEQIDNO：32，MLL-AF10-SP：GGAGTGGTTTTGGGASEQIDNO：37，dupMLL-SP：AGTAGTGGGCATGTASEQIDNO：41，AMLI-ETO-SP：ACGCAATCTAGGCTGASEQIDNO：45，NPM1-A-SP：ATCTCTGTCTGGCAGTSEQIDNO：49，和NPM1-B-SP：ATCTCTGCATGGCAGTSEQIDNO：50。在另一优选例中，所述信号探针的5’端标记有Fc(二茂铁分子)。在另一优选例中，所述信号探针组还包括信号探针：GADPH-SP：CCCTTCATTGACCTCSEQIDNO：54。本专利技术的第三方面，提供了一种检测白血病相关基因变异的捕获探针组，所述捕获探针组包括选自下组的一种或多种捕获探针：BCR-ABL-CP：GG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测白血病相关基因变异的引物对组，其特征在于，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括选自以下引物对1至引物对5中的一种或多种引物对：引物对1：特异性扩增BCR‑ABL融合基因，包括：BCR‑ABL P190‑F:ACTCGCAACAGTCCTTCGACA SEQ ID NO：1BCR‑ABL P210‑F:CCGCTGACCATCAATAAGGA SEQ ID NO：2BCR‑ABL P230‑F:AGTGCGTGGAGGAGATCGAG SEQ ID NO：3BCR‑ABL P190/P210/P230‑R:ATTATAGCCTAAGACCCGGAGC SEQ ID NO：4；引物对2：特异性扩增PML‑RARA融合基因，包括：PML‑RARA BCR1/BCR2‑F:CACCTCCAAGGCAGTCTCAC SEQ ID NO：7PML‑RARA BCR3‑F:ATGAAGTGCTACGCCTCGGA SEQ ID NO：8PML‑RARA BCR1/BCR2/BCR3‑R:ACCCCATAGTGGTAGCCTGA SEQ ID NO：9；引物对3：特异性扩增SIL‑TAL1融合基因，包括：SIL‑TAL1‑F:GCAAACAGACCTCAGCTCC SEQ ID NO：12SIL‑TAL1‑R:CGTTCAGCAGGACCAGG SEQ ID NO：13；引物对4：特异性扩增CBFB‑MYH11融合基因，包括：CBFB‑MYH11 TYPE A/D/E‑F:TGGAGTTTGATGAGGAGCGAG SEQ ID NO：16CBFB‑MYH11 TYPE D/E‑R:AGACACGTTGAGCTTCTGCC SEQ ID NO：17CBFB‑MYH11 TYPE A‑R:TGTTGACTTCCAGCCGCAGT SEQ ID NO：18；引物对5：特异性扩增E2A‑PBX1融合基因，包括：E2A‑PBX1‑F:ACCAGCCTCATGCACAACC SEQ ID NO：21E2A‑PBX1‑R:GTTGTCCAGCCGCATCAG SEQ ID NO：22。...

【技术特征摘要】
1.一种检测白血病相关基因变异的引物对组，其特征在于，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括选自以下引物对1至引物对5中的一种或多种引物对：引物对1：特异性扩增BCR-ABL融合基因，包括：BCR-ABLP190-F:ACTCGCAACAGTCCTTCGACASEQIDNO：1BCR-ABLP210-F:CCGCTGACCATCAATAAGGASEQIDNO：2BCR-ABLP230-F:AGTGCGTGGAGGAGATCGAGSEQIDNO：3BCR-ABLP190/P210/P230-R:ATTATAGCCTAAGACCCGGAGCSEQIDNO：4；引物对2：特异性扩增PML-RARA融合基因，包括：PML-RARABCR1/BCR2-F:CACCTCCAAGGCAGTCTCACSEQIDNO：7PML-RARABCR3-F:ATGAAGTGCTACGCCTCGGASEQIDNO：8PML-RARABCR1/BCR2/BCR3-R:ACCCCATAGTGGTAGCCTGASEQIDNO：9；引物对3：特异性扩增SIL-TAL1融合基因，包括：SIL-TAL1-F:GCAAACAGACCTCAGCTCCSEQIDNO：12SIL-TAL1-R:CGTTCAGCAGGACCAGGSEQIDNO：13；引物对4：特异性扩增CBFB-MYH11融合基因，包括：CBFB-MYH11TYPEA/D/E-F:TGGAGTTTGATGAGGAGCGAGSEQIDNO：16CBFB-MYH11TYPED/E-R:AGACACGTTGAGCTTCTGCCSEQIDNO：17CBFB-MYH11TYPEA-R:TGTTGACTTCCAGCCGCAGTSEQIDNO：18；引物对5：特异性扩增E2A-PBX1融合基因，包括：E2A-PBX1-F:ACCAGCCTCATGCACAACCSEQIDNO：21E2A-PBX1-R:GTTGTCCAGCCGCATCAGSEQIDNO：22。2.如权利要求1所述的引物对组，其特征在于，所述引物对组还包括第二引物对集，所述第二引物对集包括选自以下引物对6至引物对11中的一种或多种引物对：引物对6：特异性扩增TEL-AML1融合基因，包括：TEL-AML1-F:AACCTCTCTCATCGGGAAGACCSEQIDNO：25TEL-AML1-R:GCCTCGCTCATCTTGCCTSEQIDNO：26；引物对7：特异性扩增NPM-ALK融合基因，包括：NPM-ALK-F:AGAGGCAATGAATTACGAAGGCAGSEQIDNO：29NPM-ALK-R:GTTGGGGTTGTAGTCGGTCASEQIDNO：30；引物对8：特异性扩增MLL-AF10融合基因，包括：MLL-AF10883/979/1931-F：CCTCAGCCACCTACTACAGGASEQIDNO：33MLL-AF10883/979-R：TGCAGTAGTATCTTCCAAGCGSEQIDNO：34MLL-AF101931-R：CAAATGCCCAGAAGACTGCSEQIDNO：35；引物对9：特异性扩增AMLI-ETO融合基因，包括：AMLI-ETO-F：GCAAGTCGCCACCTACCACAGSEQIDNO：42AMLI-ETO-R：ACGTTGTCGGTGTAAATGAACTSEQIDNO：43引物对10：特异性扩增dup-MLL融合基因，包括：dupMLL-F：AGGCTTAGGAATCTTGACTTCTGSEQIDNO：38dupMLL-R：GGGACTTCGCACTCTGACTTSEQIDNO：39引物对11：特异性扩增NPM1基因突变，包括：NPM1A/B-F：TCCCAAAGTGGAAGCCAAASEQIDNO：46NPM1A/B-R：CAGCCAGATATCAACTGTTACAGASEQIDNO：47。3.如权利要求1所述的引物对组，其特征在于，所述第一引物对集包括引物对1至引物对5中的至少两种引物对；和/或所述第二引物对集包括引...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋析文，黄桃生，李欣钰，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44