一种茜草再生体系的建立方法技术

本发明专利技术公开了一种茜草再生体系的建立方法，茜草采用常规的方法繁殖系数低,生长周期长，同时易受外界环境条件等因素的影响。而采用组织培养的方法，繁殖系数高，可以在任意生长阶段进行选材扩繁，对茜草优良品种的选育和工厂化育苗提供了便利的条件。本发明专利技术以茜草为外植体，经过分化培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了茜草离体再生植株，建立了茜草再生体系，为今后工厂化育苗栽培奠定坚实的基础，从而解决茜草引种难度高的问题。

A Method for Establishing Regeneration System of Rubia rubescens

The invention discloses a method for establishing regeneration system of Rubia rubescens. Rubia rubescens has low reproductive coefficient, long growth period and is vulnerable to external environmental conditions and other factors by conventional methods. The method of tissue culture has a high reproductive coefficient, which can be used to select materials at any growth stage, providing convenient conditions for the breeding of good varieties of Rubia rubescens and industrialized seedling breeding. The invention takes Rubia as explant, obtains in vitro regeneration plants of Rubia by differentiation culture, multiplication culture, rooting culture, seedling transplantation and other steps, establishes regeneration system of Rubia, lays a solid foundation for future industrial seedling cultivation, thereby solving the problem of high difficulty in introduction of Rubia.

【技术实现步骤摘要】
一种茜草再生体系的建立方法
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种茜草再生体系的建立方法。
技术介绍
茜草为多年生蔓性草本，分布全国大部份地区，秋采茎叶，冬采根，鲜用或晒干。味苦，性寒。具有活血止血，祛瘀通经。随着人们开发力度的加大，植物种群的数量急剧下降。因此应该釆取一些必要的保护措施和方法，以维护野生种质资源的数量。茜草的野生资源极其有限，近年来人们任意的采摘和盲目的挖掘，使其数量遭到了严重的破坏。主要采用播种、扦插、嫁接等方式进行繁殖，但繁殖系数低，生长周期长，同时易受外界环境条件等因素的影响。而釆用组织培养的方法，繁殖系数高，可以在任意生长阶段进行选材扩繁，对茜草优良品种的选育和工厂化育苗提供了便利的条件。本专利技术以茜草叶片为外植体，经过分化培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了离体再生植株，建立了茜草再生体系，为今后工厂化育苗及驯化栽培奠定坚实的基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供以茜草为外植体，经过分化培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了茜草离体再生植株，建立了茜草再生体系，从而实现了一种茜草再生体系的建立方法。本专利技术的一种茜草再生体系的建立方法，包括以下的步骤：步骤1，外植体消毒：采集茜草健康植株细嫩叶片，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒18s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒11min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；步骤2，分化培养：将经步骤1处理后的叶片叶柄切除，用无菌解剖刀在叶片上轻划几刀，以叶背面与培养基接触的方式接种于分化培养基中进行愈伤组织及丛生芽诱导,接种后先在29℃条件下全暗培养33天，然后置于每天光照19小时，光照强度为4300lx，置于培养温度为29℃的条件下培养28天后统计愈伤组织诱导率，43天后统计分化率；分化培养基为：MS+2.3mg/LTDZ+1.3mg/LIBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.3；步骤3，增殖培养：将步骤2诱导分化产生的带有丛生芽的愈伤组织分割成1.0cm左右的小块并接种到继代培养培养基进行增殖培养,接种后先在29℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照19小时，光照强度为5300lx，培养温度为29℃的条件下培养53天后以不定芽长度≥1.2cm为有效芽统计增殖倍数；继代培养基为：MS+1.3mg/LTDZ+0.8mg/LIBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.3；步骤4，生根培养：选取步骤3生长状态一致的组培苗，剪成6cm长的茎段并接种至生根培养中诱导生根,接种后置于每天光照19小时，光照强度为5300lx，培养温度为29℃的条件下培养43天后观察苗的生长状况并统计生根率；生根培养基为：1/2MS+3.5mg/LIBA+2.1mg/LABT1+31g/L蔗糖+6.6g/L琼脂，pH为5.3；步骤5，炼苗移栽：选取经生根培养后，根系发达且植株生长健壮的组培苗进行炼苗移栽，首先洗去组培苗基部附着的琼脂，之后将其移栽到事先浇透的河沙基质中，之后向小苗进行喷雾，搭建简易塑料拱棚，保证棚内空气相对湿度达99%，覆盖塑料薄膜，以保证炼苗期间棚内的湿度，之后逐渐掀膜通风透光并注意棚内的湿度，沙培28天后，将其移栽至由草炭土:腐殖土:珍珠岩=3:1:1组成的混合基质中，栽植后绕浇透水，日常养护时注意保证盆土湿润忌积水，并时常向叶片喷水，移栽23天后统计移栽成活率。与现有技术相比本专利技术的优点是：采用组织培养的方法繁殖系数高，可以在任意生长阶段进行选材扩繁，对茜草优良品种的选育和工厂化育苗提供了便利的条件。经过分化培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了离体再生植株，建立了茜草再生体系，为今后工厂化育苗及驯化栽培奠定坚实的基础,从而解决茜草引种驯化难度高的问题。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：（1）外植体消毒：采集茜草健康植株细嫩叶片，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒11s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。（2）分化培养：将经步骤（1）处理后的叶片叶柄切除，用无菌解剖刀在叶片上轻划几刀，以叶背面与培养基接触的方式接种于分化培养基中进行愈伤组织及丛生芽诱导。接种后先在26℃条件下全暗培养23天，然后置于每天光照17小时，光照强度为3300lx，置于培养温度为26℃的条件下培养28天后统计愈伤组织诱导率为98%，41天后统计分化率为98.1%。所述的分化培养基为：MS+1.8mg/LTDZ+0.6mg/LIBA+28g/L蔗糖+5.8g/L琼脂，pH为5.3。（3）增殖培养：将步骤（2）诱导分化产生的带有丛生芽的愈伤组织分割成0.8cm左右的小块并接种到继代培养培养基进行增殖培养。接种后先在26℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照17小时，光照强度为3300lx，培养温度为26℃的条件下培养31天后以不定芽长度≥1.2cm为有效芽统计增殖倍数为36.3。所述的继代培养基为：MS+0.8mg/LTDZ+0.4mg/LIBA+33g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.3。（4）生根培养：选取步骤（3）生长状态一致的组培苗，剪成6cm长的茎段并接种至生根培养中诱导生根。接种后置于每天光照17小时，光照强度为3800lx，培养温度为26℃的条件下培养43天后生根率94%。所述的生根培养基为：1/2MS+1.8mg/LIBA+1.3mg/LABT1+18g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.3。（5）炼苗移栽：选取经生根培养后，根系发达且植株生长健壮的组培苗进行炼苗移栽，首先洗去组培苗基部附着的琼脂，之后将其移栽到事先浇透的河沙基质中，之后向小苗进行喷雾，搭建简易塑料拱棚，保证棚内空气相对湿度达99%，覆盖塑料薄膜，以保证炼苗期间棚内的湿度，之后逐渐掀膜通风透光并注意棚内的湿度，沙培18天后，将其移栽至由草炭土:腐殖土:珍珠岩=3:1:1组成的混合基质中，栽植后绕浇透水，日常养护时注意保证盆土湿润忌积水，并时常向叶片喷水，移栽23天后统计移栽成活率为94.1%。实施例2：（1）外植体消毒：采集茜草健康植株细嫩叶片，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒12s后用无菌水6次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，用无菌水冲洗7次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。（2）分化培养：将经步骤（1）处理后的叶片叶柄切除，用无菌解剖刀在叶片上轻划几刀，以叶背面与培养基接触的方式接种于分化培养基中进行愈伤组织及丛生芽诱导。接种后先在28℃条件下全暗培养27天，然后置于每天光照17小时，光照强度为3700lx，置于培养温度为28℃的条件下培养26天后统计愈伤组织诱导率为94%，43天后统计分化率为92.5%。所述的分化培养基为：MS+2.4mg/LTDZ+0.4mg/LIBA+22g/L蔗糖+4.5g/L琼脂，pH为5.7。（3）增殖培养：将步骤（2）诱导分化产生的带有丛生芽的愈伤组织分割成0.7cm左右的小块并接种到继代培养培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茜草再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，外植体消毒：采集茜草健康植株细嫩叶片，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒18s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒11min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；步骤2，分化培养：将经步骤1处理后的叶片叶柄切除，用无菌解剖刀在叶片上轻划几刀，以叶背面与培养基接触的方式接种于分化培养基中进行愈伤组织及丛生芽诱导,接种后先在29℃条件下全暗培养33天，然后置于每天光照19小时，光照强度为4300lx，置于培养温度为29℃的条件下培养28天后统计愈伤组织诱导率，43天后统计分化率；分化培养基为：MS+2.3mg/L TDZ+1.3mg/L IBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.3；步骤3，增殖培养：将步骤2诱导分化产生的带有丛生芽的愈伤组织分割成1.0cm左右的小块并接种到继代培养培养基进行增殖培养,接种后先在29℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照19小时，光照强度为5300lx，培养温度为29℃的条件下培养53天后以不定芽长度≥1.2cm为有效芽统计增殖倍数；继代培养基为：MS+1.3mg/L TDZ+0.8mg/L IBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.3；步骤4，生根培养：选取步骤3生长状态一致的组培苗，剪成6cm长的茎段并接种至生根培养中诱导生根,接种后置于每天光照19小时，光照强度为5300lx，培养温度为29℃的条件下培养43天后观察苗的生长状况并统计生根率；生根培养基为：1/2MS+3.5mg/L IBA+2.1mg/L ABT1+31g/L蔗糖+6.6g/L琼脂，pH为5.3；步骤5，炼苗移栽：选取经生根培养后，根系发达且植株生长健壮的组培苗进行炼苗移栽，首先洗去组培苗基部附着的琼脂，之后将其移栽到事先浇透的河沙基质中，之后向小苗进行喷雾，搭建简易塑料拱棚，保证棚内空气相对湿度达99%，覆盖塑料薄膜，以保证炼苗期间棚内的湿度，之后逐渐掀膜通风透光并注意棚内的湿度，沙培28天后，将其移栽至由草炭土:腐殖土:珍珠岩=3:1:1组成的混合基质中，栽植后绕浇透水，日常养护时注意保证盆土湿润忌积水，并时常向叶片喷水，移栽23天后统计移栽成活率。...

【技术特征摘要】
1.一种茜草再生体系的建立方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，外植体消毒：采集茜草健康植株细嫩叶片，用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗，自来水冲洗6h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒18s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒11min，用无菌水冲洗9次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；步骤2，分化培养：将经步骤1处理后的叶片叶柄切除，用无菌解剖刀在叶片上轻划几刀，以叶背面与培养基接触的方式接种于分化培养基中进行愈伤组织及丛生芽诱导,接种后先在29℃条件下全暗培养33天，然后置于每天光照19小时，光照强度为4300lx，置于培养温度为29℃的条件下培养28天后统计愈伤组织诱导率，43天后统计分化率；分化培养基为：MS+2.3mg/LTDZ+1.3mg/LIBA+33g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.3；步骤3，增殖培养：将步骤2诱导分化产生的带有丛生芽的愈伤组织分割成1.0cm左右的小块并接种到继代培养培养基进行增殖培养,接种后先在29℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照19小时，光照强度为5300lx，培养温度为29℃的条件下培养5...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟天路，
申请(专利权)人：钟天路，
类型：发明
国别省市：广西,45