一种椒目的组织培养快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种椒目的组织培养快繁方法，通过组织培养技术获得株系稳定的种苗的育苗方法。本发明专利技术以椒目带节藤茎为外植体，通过诱导不定芽、丛生芽增殖培养、试管苗生根以及炼苗移栽等阶段实现了椒目种苗的组织培养快速繁殖。解决了椒目大规模种植的种苗供应，也为以椒目药材为原料的药品生产提供了原料保证。

A Rapid Propagation Method for Tissue Culture of Pepper

The invention discloses a tissue culture and rapid propagation method of Capsicum spp. and a seedling raising method for obtaining stable strains through tissue culture technology. The method takes the stem of Piper with Artemisia sinensis as explant, and achieves rapid tissue culture and propagation of Piper seedlings through induction of adventitious buds, multiplication and culture of cluster buds, rooting of test-tube seedlings and transplanting of seedlings. It solves the problem of seedling supply for large-scale cultivation of Zanthoxylum, and also provides raw material guarantee for the production of medicines using Zanthoxylum as raw materials.

【技术实现步骤摘要】
一种椒目的组织培养快繁方法
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种椒目的组织培养快繁方法。
技术介绍
椒目为芸香科植物，花椒的种子。主产河北、山西、贵州、河南等地。7~8月果实成熟后，剪取果枝，晒干，除去枝叶杂质，分出种子。气香，味辛辣。具有利水，消痰。治水肿胀满，腹水，痰饮咳喘。由于近年来各地大力推广桉树种植，炼山造林频繁以及除草剂使用等原因，野生资源急剧减少，无法满足医药的需要。发展人工种植是解决椒目供需矛盾的途径之一，目前椒目种苗繁殖主要依靠种子繁殖以及分根、插蔓和留蔸繁殖，这些繁殖方式速度慢、效率低，无法满足椒目规模化种植对优质种苗的需求，因此，非常有必要建立一套完整的椒目组织培养快繁体系。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种椒目的组织培养快繁方法，通过诱导不定芽、丛生芽增殖、试管苗生根、炼苗移栽等阶段，使椒目通过丛生芽的离体快繁方式获得大量试管苗，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术的一种椒目的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤：步骤（1），诱导不定芽：选取椒目带节藤茎为外植体,经75%～80%酒精消毒20秒种后，用无菌水冲洗9次后置于0.1%～0.3%的升汞溶液中消毒37分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加4.5%蔗糖、0.8%琼脂、1.1%活性炭、1.5%酸性水解酪蛋白以及3.0mg/LKT、3.0mg/LIBA和2.0mg/L2,4-D，pH值为5.3;步骤（2），丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照22小时，光照强度为1700lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，32天转接一次；增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加4.5mg/L6-BA、3.5mg/LNAA、6.5mg/L核黄素、2.5mg/LD-泛酸钙、8.5mg/L抗坏血酸、7.5mg/LL-半胱氨酸和4.8%蔗糖、1.8%琼脂、0.8%活性炭，pH值为5.3;步骤（3），试管苗生根：将长至8cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养18天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，附加1.5mg/LIBA、1.5mg/LGGR、3.0mg/LL-半胱氨酸和3.0%蔗糖、1.0%琼脂、0.8%活性炭，pH值为5.3;步骤（4），炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙=2：1混合成的基质中并定植于大田中。其特征在于步骤（1）所述的椒目带藤茎外植体在进行不定芽诱导之前需进行预处理，处理的方法是：将从野外采集的椒目带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.01%～0.05%的高锰酸钾溶液中浸泡12小时，再用自来水冲洗8次后胶塑料袋密封后置于3～5℃冰箱中过夜备用。本专利技术的优点是：利用植物组织培养技术进行椒目种苗规模化生产，建立了椒目的组织培养快繁方法，而本专利技术具有简单、易行、经济的特点。通过本专利技术育成的椒目试管苗移栽成活率达到93%以上，可以为椒目规模化种植提供种苗保障。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1：1、外植体预处理：将从野外采集的椒目带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.03%的高锰酸钾溶液中浸泡7小时，再用自来水冲洗9次后胶塑料袋密封后置于2℃冰箱中过夜备用。2、培养过程：（1）诱导不定芽：椒目带节藤茎经75%酒精消毒10秒种后，用无菌水冲洗5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒18分钟，然后用无菌水冲洗5次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在28℃条件下全暗培养，培养48天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.5mg/LKT+1.0mg/LIBA和1.5mg/L2,4-D+3.0%蔗糖+0.6%琼脂+0.06%活性炭+0.4%酸性水解酪蛋白，pH值为5.3;（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照17小时，光照强度为1400lx，培养温度为28℃的条件下培养，27天转接一次，增殖系数为8。所采用的增殖培养基为：MS+2.5mg/L6-BA+2.0mg/LNAA+2.5mg/L核黄素+1.5mg/LD-泛酸钙+1.0mg/L抗坏血酸+1.0mg/LL-半胱氨酸+3.0%蔗糖+1.5%琼脂+1.0%活性炭，pH值为5.3；（3）试管苗生根：将长至7cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3200lx，培养温度为28℃的条件下培养21天生根，生根率达96%。所采用的生根培养基为：1/2MS+1.0mg/LIBA+1.2mg/LGGR+1.5mg/LL-半胱氨酸+3.5%%蔗糖+0.8%琼脂+0.6%活性炭，pH值为5.3；（4）炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙=2：1混合成的基质中并定植于大田中，成活率达93%。实施例2：1、外植体预处理：将从野外采集的椒目带藤茎用自来水冲洗干净泥沙后置于0.01%的高锰酸钾溶液中浸泡8小时，再用自来水冲洗4次后胶塑料袋密封后置于4℃冰箱中过夜备用。2、培养过程：（1）诱导不定芽：椒目带节藤茎经78%酒精消毒10秒种后，用无菌水冲洗9次后置于0.2%的升汞溶液中消毒16分钟，然后用无菌水冲洗9次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在25℃条件下全暗培养，培养43天后形成不定芽。所采用的诱导培养基为：GS+1.0mg/LKT+0.8mg/LIBA和0.6mg/L2,4-D+4.0%蔗糖+0.8%琼脂+0.4%活性炭+0.8%酸性水解酪蛋白，pH值为5.7;（2）丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照13小时，光照强度为1600lx，培养温度为25℃的条件下培养，30天转接一次，增殖系数为8。所采用的增殖培养基为：MS+1.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA+3.5mg/L核黄素+0.5mg/LD-泛酸钙+4.0mg/L抗坏血酸+5.0mg/LL-半胱氨酸+4.0%蔗糖+0.8%琼脂+0.18%活性炭，pH值为5.7；（3）试管苗生根：将长至8cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2600lx，培养温度为25℃的条件下培养30天生根，生根率达93%。所采用的生根培养基为：1/2MS+0.9mg/LIBA+1.6mg/LGGR+3.2mg/LL-半胱氨酸+1.5%%蔗糖+0.8%琼脂+0.12%活性炭，pH值为5.7；（4）炼苗移栽：将长至12cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙=2：1混合成的基质中并定植本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种椒目的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：步骤（1），诱导不定芽：选取椒目带节藤茎为外植体,经75%～80%酒精消毒20秒种后，用无菌水冲洗9次后置于0.1%～0.3%的升汞溶液中消毒37分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加4.5%蔗糖、0.8%琼脂、1.1%活性炭、1.5%酸性水解酪蛋白以及3.0mg/L KT、3.0mg/L IBA和2.0mg/L 2,4‑D，pH值为5.3;步骤（2），丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照22小时，光照强度为1700lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，32天转接一次；增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加4.5mg/L 6‑BA、3.5mg/L NAA 、6.5mg/L核黄素、2.5mg/L D‑泛酸钙、8.5mg/L抗坏血酸、7.5mg/L L‑半胱氨酸和4.8%蔗糖、1.8%琼脂、0.8%活性炭，pH值为5.3;步骤（3），试管苗生根：将长至8cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25～28℃条件下全暗培养18天，然后置于每天光照18小时，光照强度为3500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，附加1.5mg/L IBA、1.5mg/L GGR、3.0 mg/L L‑半胱氨酸和3.0%蔗糖、1.0%琼脂、0.8%活性炭，pH值为5.3;步骤（4），炼苗移栽：将长至9cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗9天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和河沙=2：1混合成的基质中并定植于大田中。...

【技术特征摘要】
1.一种椒目的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤：步骤（1），诱导不定芽：选取椒目带节藤茎为外植体,经75%～80%酒精消毒20秒种后，用无菌水冲洗9次后置于0.1%～0.3%的升汞溶液中消毒37分钟，然后用无菌水冲洗10次，经无菌滤纸吸干水分后接种到诱导培养基上,在25～28℃条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽；诱导培养基为：以GS为基本培养基，附加4.5%蔗糖、0.8%琼脂、1.1%活性炭、1.5%酸性水解酪蛋白以及3.0mg/LKT、3.0mg/LIBA和2.0mg/L2,4-D，pH值为5.3;步骤（2），丛生芽增殖培养：将不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后置于每天光照22小时，光照强度为1700lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，32天转接一次；增殖培养基为：以MS为基本培养基，附加4.5mg/L6-BA、3.5mg/LNAA、6.5mg/L核黄素、2.5mg/LD-泛酸钙、8.5mg/L抗坏血酸、7.5mg/LL-半胱氨酸和4.8%蔗糖、1.8%琼脂、0.8...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟天路，
申请(专利权)人：钟天路，
类型：发明
国别省市：广西,45