一种刺槐组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种刺槐组织培养方法，该方法通过对MS基础培养基进行改进，采用GS培养基中的大量元素，同时去除MS的大量元素，改良MS培养基中的无机盐浓度和配比，合并组成基础培养基后，可以有效的提高不定芽诱导率，并且培养出来的组培苗成活率高，栽培后生长旺盛，生长势强。

A Tissue Culture Method of Robinia pseudoacacia

The invention discloses a tissue culture method of Robinia pseudoacacia. By improving MS basic culture medium, adopting a large number of elements in GS culture medium, removing a large number of elements of MS, improving the concentration and proportion of inorganic salts in MS culture medium, and combining the basic culture medium, the induction rate of adventitious buds can be effectively improved, and the survival rate of tissue culture seedlings is high. After that, it grows vigorously and vigorously.

【技术实现步骤摘要】
一种刺槐组织培养方法
本专利技术涉及组织培养
，具体涉及一种刺槐组织培养方法。
技术介绍
刺槐最适宜山区造林绿化，不仅是矿柱、枕木、车船、农具等重要用材来源，而且是良好的蜜源植物。其耐旱、适应性强、生长快、繁殖易、用途广，是重要的速生用材树种之一，是我国西北、华北等地区优良的保持水土、防风固沙、改良土壤和″四旁″绿化树种。刺槐树对二氧化硫、光化学烟雾等具有一定抗性，并且外形树冠高达、叶色鲜绿素雅而芳香，是园艺中最佳的树种；此外刺槐树的木材坚硬、耐水湿，具有很高的经济价值；并且刺槐耐盐碱，将其作为盐碱地的种植植被，能够使得盐碱地林业生态功能得以提升，并且通过选育耐盐刺槐树种造林，能够有效的改善盐碱地生态功能。因此，刺槐的需求量也越来越高。由于刺槐组培的研究较少，对其研究还处于初级阶段，因此在组培过程中出现的各种问题需要通过不断摸索才能成功，在试验过程中专利技术人发现，将常规的MS作为基础培养基，在接种后，不定芽诱导率较低，并且在生根过程中发现虽然生根，但是根系较少，成活率虽然不低，但是移栽后生长不旺盛的现象。
技术实现思路
针对上述存在的问题，本专利技术提供一种刺槐组织培养方法，该方法通过对培养基进行改进，提高了不定芽诱导率，培养出来的组培苗成活率高，栽培后生长旺盛，生长势强。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种刺槐组织培养方法，所述方法包括如下步骤：(1)外植体的选择及消毒处理：以幼嫩的刺槐茎尖为外植体，用自来水冲洗干净后放入75％酒精中30～45s，无菌水冲洗2～3遍后，用0.1％的HgCl2浸泡灭菌4～6min，再用无菌水冲洗2～3遍备用；(2)接种培养：将经过步骤(1)消毒处理的外植体接种到接种培养基中，所述接种培养基为GS的大量元素+去除大量元素的MS+2，4-D0.5～1mg/L+6-BA2.5～5mg/L+GA30.025～0.05mg/L+蔗糖3.5％+琼脂0.4％，每瓶只接一段外植体，培养2～3天开始生长，每30天接转一次；(3)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，25～30天开始生根，当根生长到3em左右出瓶；所述生根培养基为：GS的大量元素+去除大量元素的MS+IAA0.6～0.8mg/l+蔗糖3.0％+活性炭0.1％。其中，接种培养的条件为：pH值为5.8，培养温度为24～28℃，光照强度1400～2000lx，光照时间为12～14小时/天。生根培养的培养条件为：pH值为5.8，温度为22～25℃，光照强度2600～28001x，光照时间为12～14小时/天。进一步地，上述刺槐组织培养方法，还包括组培苗移栽，具体如下：出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗1～2d，然后解开封口膜，炼苗4～6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，然后移栽到经消毒的基质中，温度控制在24-26℃，湿度控制在70％左右，14d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间要遮光，使光照强度为自然光的40～60％。优选地，所述栽培基质为泥炭土和珍珠岩混合基质，两者以3∶1的体积比混合。本专利技术方法具有如下优点：专利技术人对培养基进行了改进，对于在试验中出现的问题，申请人对MS基础培养基进行了改进，引入GS培养基，并且仅采用其大量元素，同时去除MS的大量元素，改良MS培养基中的无机盐浓度和配比，合并组成基础培养基后，可以有效的提高不定芽诱导率，并且培养出来的组培苗成活率高，栽培后生长旺盛，生长势强。本专利技术通过摸索一系列合理的培养基配方和培养条件，实现了使刺槐有效繁殖的目的，组培苗生产整齐一致，为其快速繁殖提供了有效的支持，也为进一步探索刺槐的基因工程、拓宽外植体材料等奠定了基础。并且还为实现规模化工业生产成为可能，具有广泛的应用前景。附图说明图1是本专利技术不同基础培养基第6天愈伤组织分化情况对比；图2是不同基础培养基第35天时不定芽的分化情况对比；图3是本专利技术刺槐的生根情况；图4本专利技术刺槐的移栽生长情况。具体实施方式下面将通过具体实施例对本专利技术进行详细的描述。提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本专利技术的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本专利技术的范围。本专利技术的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1一种刺槐组织培养方法，所述方法包括如下步骤：(1)外植体的选择及消毒处理：以幼嫩的刺槐茎尖为外植体，用自来水冲洗干净后放入75％酒精中30s，无菌水冲洗2遍后，用0.1％的HgCl2浸泡灭菌4min，再用无菌水冲洗2遍备用；(2)接种培养：将经过步骤(1)消毒处理的外植体接种到接种培养基中，所述接种培养基为GS的大量元素+去除大量元素的MS+2，4-D0.5mg/L+6-BA2.5mg/L+GA30.05mg/L+蔗糖3.5％+琼脂0.4％，每瓶只接一段外植体，培养2～3天开始生长，每30天接转一次；(3)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，25天开始生根，当根生长到3cm左右出瓶；所述生根培养基为：GS的大量元素+去除大量元素的MS+IAA0.6mg/l+蔗糖3.0％+活性炭0.1％。(4)组培苗移栽，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗1d，然后解开封口膜，炼苗6d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，然后移栽到经消毒的基质中，温度控制在24℃，湿度控制在70％左右，14d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽期间要遮光，使光照强度为自然光的40％。实施例2一种刺槐组织培养方法，所述方法包括如下步骤：(1)外植体的选择及消毒处理：以幼嫩的刺槐茎尖为外植体，用自来水冲洗干净后放入75％酒精中40s，无菌水冲洗3遍后，用0.1％的HgCl2浸泡灭菌6min，再用无菌水冲洗2遍备用；(2)接种培养：将经过步骤(1)消毒处理的外植体接种到接种培养基中，所述接种培养基为GS的大量元素+去除大量元素的MS+2，4-D1mg/L+6-BA2.5mg/L+GA30.025mg/L+蔗糖3.5％+琼脂0.4％，每瓶只接一段外植体，培养2～3天开始生长，每30天接转一次；(3)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，30天开始生根，当根生长到3cm左右出瓶；所述生根培养基为：GS的大量元素+去除大量元素的MS+IAA0.8mg/1+蔗糖3.0％+活性炭0.1％。(4)组培苗移栽，出瓶前练苗一周，先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗1d，然后解开封口膜，炼苗5d，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，用多菌灵或百菌清1000倍液清洗并浸泡幼苗根部，然后移栽到经消毒的基质中，温度控制在25℃，湿度控制在70％左右，14d以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下，炼苗移栽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种刺槐组织培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)外植体的选择及消毒处理：以幼嫩的刺槐茎尖为外植体，用自来水冲洗干净后放入75％酒精中30～45s，无菌水冲洗2～3遍后，用0.1％的HgCl2浸泡灭菌4～6min，再用无菌水冲洗2～3遍备用；(2)接种培养：将经过步骤(1)消毒处理的外植体接种到接种培养基中，所述接种培养基为GS的大量元素+去除大量元素的MS+2，4‑D 0.5～1mg/L+6‑BA 2.5～5mg/L+GA3 0.025～0.05mg/L+蔗糖3.5％+琼脂0.4％，每瓶只接一段外植体，培养2～3天开始生长，每30天接转一次；(3)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，25～30天开始生根，当根生长到3cm左右出瓶；所述生根培养基为：GS的大量元素+去除大量元素的MS+IAA0.6～0.8mg/l+蔗糖3.0％+活性炭0.1％。

【技术特征摘要】
1.一种刺槐组织培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)外植体的选择及消毒处理：以幼嫩的刺槐茎尖为外植体，用自来水冲洗干净后放入75％酒精中30～45s，无菌水冲洗2～3遍后，用0.1％的HgCl2浸泡灭菌4～6min，再用无菌水冲洗2～3遍备用；(2)接种培养：将经过步骤(1)消毒处理的外植体接种到接种培养基中，所述接种培养基为GS的大量元素+去除大量元素的MS+2，4-D0.5～1mg/L+6-BA2.5～5mg/L+GA30.025～0.05mg/L+蔗糖3.5％+琼脂0.4％，每瓶只接一段外植体，培养2～3天开始生长，每30天接转一次；(3)生根培养：将经过继代培养的分化芽转移到生根培养基上诱导生根，25～30天开始生根，当根生长到3cm左右出瓶；所述生根培养基为：GS的大量元素+去除大量元素的MS+IAA0.6～0.8mg/l+蔗糖3.0％+活性炭0.1％。2.根据权利要求1所述的刺槐组织培养方法，其特征在于，接种培...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹帮华，王甜甜，郝木征，祁琳，王筱，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东,37