一种轻质石油烃降解肠杆菌及其制备方法和应用技术

本申请公开了的一种轻质石油烃降解肠杆菌及其制备方法和应用，肠杆菌为肠杆菌HJ‑06，且所述肠杆菌HJ‑06保藏于中国普通微生物保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.16465。本申请公开的轻质石油烃降解肠杆菌对石油烃类物质有很好的降解能力，该菌株15天内对石油烃类物质的降解率为30.67％，且同样适用于对土壤中石油烃类物质的降解。本申请公开的肠杆菌源于含油污染物，因此该菌株进入含油污染物后很快成为优势菌群，有效促进石油烃类物质的降解；本申请公开的肠杆菌是以单一菌种实现石油烃类物质的降解，减少混合菌剂制备过程中的复杂步骤。

A Light Petroleum Hydrocarbon Degrading Enterobacter and Its Preparation and Application

The present application discloses a light petroleum hydrocarbon degrading Enterobacter and its preparation method and application. The Enterobacter is Enterobacter HJ 06. The Enterobacter HJ 06 is stored in the China General Microbial Preservation Management Center with the storage number CGMCC NO. 16465. The light oil hydrocarbon degrading Enterobacter has good degradability to petroleum hydrocarbons. The degradability of the strain to petroleum hydrocarbons is 30.67% within 15 days, and it is also applicable to the degradation of petroleum hydrocarbons in soil. The Enterobacter spp. disclosed in this application originates from oil-containing pollutants, so it quickly becomes the dominant bacteria group after entering oil-containing pollutants and effectively promotes the degradation of petroleum hydrocarbons. The Enterobacter spp. disclosed in this application realizes the degradation of petroleum hydrocarbons by a single strain and reduces the complex steps in the preparation of mixed bacterial agents.

【技术实现步骤摘要】
一种轻质石油烃降解肠杆菌及其制备方法和应用
本申请涉及微生物石油烃降解
，尤其涉及一种轻质石油烃降解肠杆菌及其制备方法和应用。
技术介绍
自20世纪以来，石油已经成为人类最重要的能源之一，而在被大量开采和使用的同时，石油及其加工品对环境及人类造成的危害也日趋严重，我国石油类污染程度远高于发达国家，且呈逐年累积加重态势。石油烃类物质的主体物质是由占比70％-80％的脂肪烃和占比20％-30％的芳香烃构成，其余物质是微量的含硫、含氮有机组分。按挥发性划分，石油烃类物质包含大量的挥发性有机物(VolatileOrganicCompounds，VOCs)和半挥发性有机物(Semi-VolatileOrganicCompounds，SVOCs)，因此具有很高的迁移性，污染面积广，生物有效性高，能够直接影响生物体。而且，石油烃类物质的长链部分因其分子质量大，结构紧密，所以其乳化性能较低，在土壤中有很强的滞留性，将对土壤结构以及生物种群造成严重影响，并如同重金属污染物质一样，富集于积累性植物中，进入食物链，对人们的健康造成威胁。因此，石油烃污染场地的修复处理，不仅对我们当代人而且对子孙后代的健康生活乃至今后的社会发展都是一项必须重视的责任。生物降解石油烃的方法分为两类，一是向油污泥中投加营养物质，曝气，促进污泥土著微生物生长增殖，从而实现对污染物的降解；二是向油污泥中投加高效降解石油烃的微生物菌剂；但是目前的微生物降解菌剂以复合微生物菌剂为主，多种菌株需要单独培养活化后按一定比例混合，再进行第二次培养活化后作为降解复合菌剂对污染物进行降解，培养工艺操作频繁。现有技术中也并没有使用单一的菌种实现较为优异的含油污泥中石油烃类的降解的方案；同时，目前对石油烃降解微生物的研究大多集中于沿海港口或是油田区域，所研究的石油烃类物质多是以原油或航运重油为目标，但这样的研究以及所培育的菌种能否适用在内陆地区的工业石油烃类物质污染还是未知数。
技术实现思路
本申请提供了一种轻质石油烃降解肠杆菌及其制备方法和应用，运用单一菌种降解石油烃，以解决复合菌剂降解石油烃工艺繁杂的问题。为了解决上述技术问题，本申请实施例公开了如下技术方案：本申请提供了一种轻质石油烃降解肠杆菌，所述轻质石油烃降解肠杆菌为肠杆菌HJ-06，且所述肠杆菌HJ-06已于2018年9月12日保藏于中国普通微生物保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.16465，且分类命名为：肠杆菌Enterobactersp.。优选地，所述肠杆菌HJ-06为兼性厌氧发酵型革兰氏阴性菌；所述肠杆菌HJ-06进行二乙酰试验及吲哚试验时呈阴性，所述肠杆菌HJ-06进行氧化酶及硝酸盐还原试验时呈阳性；所述肠杆菌HJ-06进行生理活动产生H2S；所述肠杆菌HJ-06可利用枸橼酸且具有H2O2触媒。本申请还提供了一种轻质石油烃降解肠杆菌的制备方法，包括如下步骤：称取原始场地污染物质并溶于无机盐培养液中，得到含土著菌种的培养液，并将所述含土著菌种的培养液震荡培养，得到土著菌悬浊液；称取所述土著菌悬浊液至备有无机盐培养液的锥形瓶中，并向所述锥形瓶中加入目标单种石油烃物质后震荡培养，得到初筛菌种悬浊液；称取所述初筛菌种悬浊液至备有无机盐培养液的锥形瓶中，并向所述锥形瓶中加入目标混合石油烃物质后震荡培养，得到复筛菌种悬浊液；称取所述复筛菌种悬浊液并涂布于牛肉膏蛋白胨培养基，恒温培养5天后检测所述目标混合石油烃物质的降解率，并淘汰所述降解率为5％以下的菌种，得到纯化菌落；将所述纯化菌落涂布于牛肉膏蛋白胨培养基，恒温培养5天后检测所述目标混合石油烃物质的降解率，选择降解率最高的为肠杆菌HJ-06；将所述肠杆菌HJ-06进行环境驯化，所述环境驯化包括液基驯化和土基驯化。优选地，所述液基驯化包括：将所述肠杆菌HJ-06接种于牛肉膏蛋白胨培养基制作第一种子液，将所述第一种子液恒温培养并备用；将所述目标混合石油烃物质加入无机盐培养液中作为驯化培养液；涂布蘸取所述第一种子液并将所述种子液轻触所述驯化培养液的液面，将所述肠杆菌HJ-06接种于所述驯化培养液的液面后依次进行恒温培养和震荡培养.所述土基驯化包括：将所述肠杆菌HJ-06接种于盛有无机盐培养基及所述目标混合石油烃物质的锥形瓶中后震荡培养制作第二种子液，将所述第二种子液恒温培养并备用；将搅拌均匀的土样及无机盐培养液均加入锥形瓶中，将所述第二种子液接种于所述锥形瓶中进行恒温培养和震荡培养。优选地，所述将所述含土著菌种的培养液震荡培养包括：震荡温度为37℃，震荡转速为180r/min，震荡周期为24h。优选地，所述向所述锥形瓶中加入目标单种石油烃物质后震荡培养包括：震荡温度为37℃，震荡转速为180r/min，震荡周期为5天。优选地，所述向所述锥形瓶中加入目标混合石油烃物质后震荡培养包括：震荡温度为37℃，震荡转速为180r/min，震荡周期为5天。优选地，所述目标单种石油烃物质包括齿轮油、废液压油或重载柴油中的一种。优选地，所述目标混合石油烃物质包括齿轮油、废液压油及重载柴油；所述齿轮油、废液压油及重载柴油的质量比为5:3:2。本申请还提供了一种轻质石油烃降解肠杆菌的应用，所述轻质石油烃降解肠杆菌按照上述制备方法制备，所述轻质石油烃降解肠杆菌用于降解石油烃类物质。与现有技术相比，本申请的有益效果为：(1)本申请公开的肠杆菌源于含油污染物，因此该菌株进入含油污染物后很快成为优势菌群，占据一定生态优势，有效促进石油烃类物质及土壤中石油烃类物质的降解。(2)本申请公开的肠杆菌是以石油烃物质无碳源筛选出来的优势菌株，菌株在生长繁殖过程中可改变含油污泥中石油烃类物质的性质，使含油污泥中石油烃类物质的组分发生变化。(3)本申请公开的肠杆菌是以单一菌种实现石油烃类物质的降解，减少混合菌剂制备过程中的复杂步骤，且单一菌种可以避免降解后的反应产物复杂，可融合其他方法进一步降解石油烃。(4)本申请提供的肠杆菌能够适用鱼内陆地区的工业石油烃类物质污染的治理。应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本申请。附图说明为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本申请提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06的显微镜下40x的镜检示意图；图2为本申请提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06的显微镜下100x的镜检示意图；图3为本申请提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06接种于液体培养基18h后的状态示意图；图4为本申请提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06接种于混合油后的状态示意图；图5为本申请提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06降解前石油烃的气相色谱图；图6为本申请提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06降解石油烃5d后的气相色谱图；图7为本专利技术提供的轻质石油烃降解肠杆菌HJ-06的制备方法的流程示意图。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部实施例。基于本申本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种轻质石油烃降解肠杆菌，其特征在于，所述轻质石油烃降解肠杆菌为肠杆菌HJ‑06，且所述肠杆菌HJ‑06保藏于中国普通微生物保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.16465。

【技术特征摘要】
1.一种轻质石油烃降解肠杆菌，其特征在于，所述轻质石油烃降解肠杆菌为肠杆菌HJ-06，且所述肠杆菌HJ-06保藏于中国普通微生物保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.16465。2.根据权利要求1所述的轻质石油烃降解肠杆菌，其特征在于，所述肠杆菌HJ-06为兼性厌氧发酵型革兰氏阴性菌；所述肠杆菌HJ-06进行二乙酰试验及吲哚试验时呈阴性，所述肠杆菌HJ-06进行氧化酶及硝酸盐还原试验时呈阳性；所述肠杆菌HJ-06进行生理活动产生H2S；所述肠杆菌HJ-06可利用枸橼酸且具有H2O2触媒。3.一种轻质石油烃降解肠杆菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：称取原始场地污染物质并溶于无机盐培养液中，得到含土著菌种的培养液，并将所述含土著菌种的培养液震荡培养，得到土著菌悬浊液；称取所述土著菌悬浊液至备有无机盐培养液的锥形瓶中，并向所述锥形瓶中加入目标单种石油烃物质后震荡培养，得到初筛菌种悬浊液；称取所述初筛菌种悬浊液至备有无机盐培养液的锥形瓶中，并向所述锥形瓶中加入目标混合石油烃物质后震荡培养，得到复筛菌种悬浊液；称取所述复筛菌种悬浊液并涂布于牛肉膏蛋白胨培养基，恒温培养5天后检测所述目标混合石油烃物质的降解率，并淘汰所述降解率为5％以下的菌种，得到纯化菌落；将所述纯化菌落涂布于牛肉膏蛋白胨培养基，恒温培养5天后检测所述目标混合石油烃物质的降解率，选择降解率最高的为肠杆菌HJ-06；将所述肠杆菌HJ-06进行环境驯化，所述环境驯化包括液基驯化和土基驯化。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述液基驯化包括：将所述肠杆菌HJ-06接种于牛肉膏蛋白胨培养基制作第一种子液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈果，郑旭煦，殷钟意，
申请(专利权)人：重庆工商大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50