The invention discloses a method for rapidly applying solid culture products of Actinomyces evansi to control pine wilt disease, which belongs to the technical field of microbial biological control. The invention adds harmless plasticizer to the solid culture product after adding a certain proportion of nutrients, protective agents, growth stimulating factors, sporulation stimulating factors and adhesives to the solid culture product and mixing them evenly, and then processes them into long rod products, finally wraps a layer of glutinous rice paper on the surface of the solid culture product. The whole production process is isolated from the outside environment without any need. Man-made operation can reduce the pollution caused by man-made factors or exposure to the outside environment. It only needs drilling and pinning into two operation links, and does not need high-pressure plug, which greatly reduces the manpower and material resources; at the same time, it greatly prolongs the storage period of the product and significantly improves its biological activity; it solves the problem that solid culture products can not be directly applied to biological control. The invention is applied to forest time prevention and control work with simple operation and low cost.
【技术实现步骤摘要】
一种快速应用伊氏杀线菌固体培养产物防治松萎蔫病的方法
本专利技术属于微生物生物防治
,具体涉及一种应用松材线虫寄生真菌-伊氏杀线菌固体发酵产物对松萎蔫病进行防治的方法。
技术介绍
松萎蔫病又称松材线虫病,是由松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)引起的松树快速死亡、连片毁灭的一种危险性病害,主要以松褐天牛等昆虫为媒介进行传播。该病于1905年在日本首次报道,并迅速蔓延至中国、韩国、越南以及欧洲等国家和地区,严重威胁世界范围内的松林安全。该病具有传播途径多、发病速度快、治理难度大等特点,截止目前仍没有有效的防治办法,被称为松树的癌症。我国松树种植面积大、感病寄主多、传播媒介广、气候条件适宜,致使松萎蔫病在我国大范围爆发。松萎蔫病于1982年在南京市中山陵首次发现,并迅速蔓延至全国各地。根据2017年秋季普查结果(国家林业局公告,2018年第1号),该病已扩散蔓延至福建、浙江、江苏、辽宁等16个省(市、自治区)的325个县级行政区,其中2017年度新增疫区78个(辽宁省占12个),发生面积127.54万亩,病死树118.95万株,出现了“疫区和新发疫区大量增加,发生面积及病死树大量增加”两个增加的局面。松萎蔫病已经成为我国最为严重的森林灾害,导致森林资源、自然景观和生态环境遭到严重破坏,同时直接或间接导致的经济损失超过千亿元,也严重影响了我国林业生态文明建设发展,其控制已刻不容缓。松萎蔫病的防控是世界性的难题,尽管我国采取了一系列防治措施,在一定程度上降低了其扩散速度,但疫点仍不断增加、发生范围不断扩大。目前的防治松萎蔫病常用的方 ...
【技术保护点】
1.一种快速应用伊氏杀线菌固体培养产物防治松萎蔫病的方法,包括有预先得到的伊氏杀线菌菌落,其特征在于,包括以下步骤:(1)预处理:将操作间、超净工作台、固体搅拌发酵罐以及之后步骤中使用的所有器具进行灭菌处理,并将灭好菌的所有器具放入超净工作台,开启紫外灯、鼓风;操作人员穿戴好灭过菌的工作服、帽、口罩和手套;(2)菌种制备:称取27g PDB粉末溶解于1L蒸馏水中,并分装于培养容器中,常规高温高压灭菌20分钟;冷却后接入伊氏杀线菌菌落,置于摇床上培养5‑6天,培养温度为26℃,摇床转速为120转/分钟;培养结束后得到伊氏杀线菌菌种;(3)菌剂扩繁:称取540gPDB粉末溶解于20L蒸馏水中,加入混合物重量0.1%的消泡剂,随后将混合液倒入发酵罐中,常规高温高压灭菌30分钟;当罐内液体培养基冷却至室温时,在火焰消毒环境下将步骤(2)所得菌种接种至发酵罐内,26℃培养3‑4天;(4)固体发酵培养基配置:将麦麸、碎木屑、葡萄糖按照重量比5:4‑4.8:0.2‑1的比例混合均匀后,装入固体搅拌发酵罐,加入混合物重量10%的蒸馏水,采用常规高温高压灭菌1小时,得到无菌固体培养基;(5)菌剂接种和培 ...
【技术特征摘要】
1.一种快速应用伊氏杀线菌固体培养产物防治松萎蔫病的方法,包括有预先得到的伊氏杀线菌菌落,其特征在于,包括以下步骤:(1)预处理:将操作间、超净工作台、固体搅拌发酵罐以及之后步骤中使用的所有器具进行灭菌处理,并将灭好菌的所有器具放入超净工作台,开启紫外灯、鼓风;操作人员穿戴好灭过菌的工作服、帽、口罩和手套;(2)菌种制备:称取27gPDB粉末溶解于1L蒸馏水中,并分装于培养容器中,常规高温高压灭菌20分钟;冷却后接入伊氏杀线菌菌落,置于摇床上培养5-6天,培养温度为26℃,摇床转速为120转/分钟;培养结束后得到伊氏杀线菌菌种;(3)菌剂扩繁:称取540gPDB粉末溶解于20L蒸馏水中,加入混合物重量0.1%的消泡剂,随后将混合液倒入发酵罐中,常规高温高压灭菌30分钟;当罐内液体培养基冷却至室温时,在火焰消毒环境下将步骤(2)所得菌种接种至发酵罐内,26℃培养3-4天;(4)固体发酵培养基配置:将麦麸、碎木屑、葡萄糖按照重量比5:4-4.8:0.2-1的比例混合均匀后,装入固体搅拌发酵罐,加入混合物重量10%的蒸馏水,采用常规高温高压灭菌1小时,得到无菌固体培养基;(5)菌剂接种和培养:待步骤(4)所得无菌固体培养基冷却至室温后,将步骤(3)扩繁后的菌剂在无菌环境下接种至固体搅拌发酵罐中的培养基,室温环境下搅拌发酵培养14天,通气量为5m3/h,检测菌剂生长情况并调节固体培养产物的含水量至低于10%;(6)确认步骤(5)固体培养产物生长良好且无污染后,向固体搅拌发酵罐中加入灭菌后的PDA粉末、保护剂、菌丝生长刺激因子、产孢刺激因子以及粘附剂和塑化剂,并搅拌均匀,得到伊氏杀线菌固体培养...
【专利技术属性】
技术研发人员:王海华,殷灿,王云波,陶然,高杰,段贝贝,王春燕,王振,成昌根,
申请(专利权)人:成昌根,
类型:发明
国别省市:韩国,KR
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