谷胱甘肽含量的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种谷胱甘肽含量的分析方法，所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其分析方法中，色谱柱为亲水性色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，采用缓冲盐溶液作为所述流动相A，所述缓冲盐溶液为用磷酸调节pH的磷酸盐溶液或醋酸盐溶液，采用有机溶剂作为所述流动相B，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇中的至少一种，洗脱方式为等度洗脱。本发明专利技术优点在于：能够准确的检测出谷胱甘肽的含量，重现性好，灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
谷胱甘肽含量的分析方法
本专利技术涉及药物分析
，具体地涉及一种谷胱甘肽含量的分析方法。
技术介绍
谷胱甘肽(glutathioneGSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合，含有巯基的的三肽，具有抗氧化作用和整合解毒作用。半胱氨酸上的巯基为谷胱甘肽活性基团(故谷胱甘肽常简写为G-SH)，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、芥子气，铅、汞、砷等重金属)等结合，而具有整合解毒作用。故谷胱甘肽(尤其是肝细胞内的谷胱甘肽)能参与生物转化作用，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排泄出体外。谷胱甘肽还能帮助保持正常的免疫系统的功能。然而，目前关于谷胱甘肽含量的分析检测方法未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够准确的检测出谷胱甘肽的含量、重现性好、灵敏度高谷胱甘肽含量的分析方法。根据本专利技术的一个方面，提供一种谷胱甘肽含量的分析方法：所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其分析方法中，色谱柱为亲水性色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，采用缓冲盐溶液作为所述流动相A，所述缓冲盐溶液为用磷酸调节pH的磷酸盐溶液或醋酸盐溶液，采用有机溶剂作为所述流动相B，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇中的至少一种，洗脱方式为等度洗脱。利用本专利技术的方法可以准确的检测出谷胱甘肽的含量，重现性好且灵敏度高。作为本专利技术的进一步改进，缓冲盐溶液为磷酸氢二铵、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾中的至少一种。作为本专利技术的进一步改进，紫外检测器的检测波长为220±2nm。作为本专利技术的进一步改进，高效液相色谱法的柱温为20-30℃。若温度过高或过低，分离的效果不理想。作为本专利技术的进一步改进，高效液相色谱法的流速为0.8-1.2ml/min，若流速过快或过慢，分离的效果不理想。作为本专利技术的进一步改进，流动相A中盐相的浓度为0.01-0.03mol/L，所述流动相A中盐相的pH值为2.0-4.0，使谷胱甘肽能具有良好的峰型，重现性好。作为本专利技术的进一步改进，流动相A和流动相B的体积比为(90-96)：(4-10)。作为本专利技术的进一步改进，该方法包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液；(2)色谱条件：采用亲水性色谱柱，所述流动相A中盐相的浓度为0.01-0.03mol/L，用磷酸调节其pH值为2.0-4.0，所述流动相A和流动相B的体积比为(90-96)：(4-10)；所述紫外检测器的检测波长为220±2nm，所述高效液相色谱法的柱温为20-30℃，流速为0.8-1.2ml/min，等度洗脱；(3)取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。作为本专利技术的进一步改进，上述方法包括下列之一：a.所述色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的VertexAQ-C18亲水性色谱柱，所述流动相A采用浓度为0.01mol/L并用磷酸调节pH至2.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相A和流动相B的体积比为90：10，柱温为30℃，检测波长为220nm，流速为0.8ml/min，等度洗脱；b.所述色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的YMC-PackODS-AQC18亲水性色谱柱，所述流动相A采用浓度为0.02mol/L并用磷酸调节pH至3.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相A和流动相B的体积比为93：7，柱温为25℃，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，等度洗脱；c.所述色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的DBC18亲水性色谱柱，所述流动相A采用浓度为0.03mol/L并用磷酸调节pH至4.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相A和流动相B的体积比为96：4，柱温为20℃，检测波长为220nm，流速为1.2ml/min，等度洗脱。本专利技术具有以下优点和效果：利用本专利技术所述的对于谷胱甘肽含量的分析能够准确的检测出谷胱甘肽的含量，重现性好且灵敏度更高。附图说明图1是本专利技术谷胱甘肽含量的分析方法的空白溶液图谱；图2是本专利技术实施例一中谷胱甘肽的高效液相色谱图；图3是本专利技术实施例二中谷胱甘肽的高效液相色谱图；图4是本专利技术实施例三中谷胱甘肽的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合各实施方式对本专利技术进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本专利技术的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本专利技术的保护范围之内。本专利技术公开了一种谷胱甘肽含量的分析方法，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液；(2)色谱条件：采用亲水性色谱柱，所述流动相A中盐相的浓度为0.01-0.03mol/L，用磷酸调节其pH值为2.0-4.0，所述流动相A和流动相B的体积比为(90-96)：(4-10)；所述紫外检测器的检测波长为220±2nm，所述高效液相色谱法的柱温为20-30℃，流速为0.8-1.2ml/min，等度洗脱；(3)取所述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。实施例一本实施例公开了本专利技术一种谷胱甘肽含量的分析方法的一种实施例。本实施例的具体步骤为：供试品溶液的制备(临用新制)：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液。同法制备对照品溶液(临用新制)。色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的VertexAQ-C18亲水性色谱柱，所述流动相A采用浓度为0.01mol/L并用磷酸调节pH至2.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相A和流动相B的体积比为90：10，柱温为30℃，检测波长为220nm，流速为0.8ml/min，等度洗脱。取上述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。图1是本专利技术谷胱甘肽含量的分析方法的空白溶液图谱，本实施例的系统适用性测定结果如图2所示：谷胱甘肽理论板数为8700。实施例二本实施例公开了本专利技术一种谷胱甘肽含量的分析方法的另一种实施例。本实施例的具体步骤为：供试品溶液的制备(临用新制)：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液。同法制备对照品溶液(临用新制)。色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的YMC-PackODS-AQC18亲水性色谱柱，所述流动相A采用浓度为0.02mol/L并用磷酸调节pH至3.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相A和流动相B的体积比为93：7，柱温为25℃，检测波长为220nm，流速为1.0ml/min，等度洗脱。取上述供试品溶液10μl，按照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算含量。如图3所示，系统适用性测定结果：谷胱甘肽理论板数为8500。实施例三本实施例公开了本专利技术一种谷胱甘肽含量的分析方法的另一种实施例。本实施例的具体步骤为：供试品溶液的制备(临用新制)：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液。同法制备对照品溶液(临用新制)。色谱条件为：采用250*4.6mm,5μm的DBC18亲水性色谱柱，所述流动相A采用浓度为0.03mol/L并用磷酸调节pH至4.0的磷酸二氢钾溶液，所述流动相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.谷胱甘肽含量的分析方法，其特征在于，所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其中，色谱柱为亲水性色谱柱；流动相由流动相A和流动相B组成；采用缓冲盐溶液作为所述流动相A，所述缓冲盐溶液为用磷酸调节pH的磷酸盐溶液或醋酸盐溶液；采用有机溶剂作为所述流动相B，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇中的至少一种；洗脱方式为等度洗脱。

【技术特征摘要】
1.谷胱甘肽含量的分析方法，其特征在于，所述方法是利用结合紫外检测器的高效液相色谱法进行，其中，色谱柱为亲水性色谱柱；流动相由流动相A和流动相B组成；采用缓冲盐溶液作为所述流动相A，所述缓冲盐溶液为用磷酸调节pH的磷酸盐溶液或醋酸盐溶液；采用有机溶剂作为所述流动相B，所述有机溶剂为甲醇、乙腈、乙醇中的至少一种；洗脱方式为等度洗脱。2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，所述缓冲盐溶液为磷酸氢二铵、磷酸二氢钾和磷酸氢二钾中的至少一种。3.根据权利要求1所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，所述紫外检测器的检测波长为220±2nm。4.根据权利要求1所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，所述高效液相色谱法的柱温为20-30℃。5.根据权利要求1所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，所述高效液相色谱法的流速为0.8-1.2ml/min。6.根据权利要求2所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，所述流动相A中盐相的浓度为0.01-0.03mol/L，所述流动相A中盐相的pH值为2.0-4.0。7.根据权利要求1所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，所述流动相A和流动相B的体积比为(90-96)：(4-10)。8.根据权利要求1所述的谷胱甘肽含量的分析方法，其中，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取谷胱甘肽适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含谷胱甘肽0.2mg的溶液；(2)色谱条件：采用亲水性色谱柱，所述流动相A中盐相的浓度为0.01-0....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘倩，平熠熠，王娜，周圆月，张莹，
申请(专利权)人：无锡福祈制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32