胰腺癌动物模型的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种胰腺癌动物模型的构建方法，包括：(1)构建KC鼠并对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代；(2)准备P53鼠并对P53鼠进行扩繁得到P53鼠的子代；(3)采用所述KC鼠的子代与所述P53鼠的子代进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型。本发明专利技术的构建方法具有时间短、成本低的优点。

Establishment of animal models of pancreatic cancer

The invention provides a method for constructing an animal model of pancreatic cancer, which includes: (1) constructing KC mice and multiplying KC mice to obtain the offspring of KC mice; (2) preparing P53 mice and multiplying P53 mice to obtain the offspring of P53 mice; (3) using the offspring of KC mice and the offspring of P53 mice to reproduce to obtain a KPC pancreatic cancer mouse model. The construction method of the invention has the advantages of short time and low cost.

【技术实现步骤摘要】
胰腺癌动物模型的构建方法
本专利技术属于医学生物学
，具体地，本专利技术涉及一种动物模型的构建方法，更具体地，本专利技术涉及一种胰腺癌动物模型的快速构建方法。
技术介绍
胰腺癌具有临床表现缺乏特异性、早期诊断困难、手术切除率低等特点，所以通常难以获得不同发病阶段的胰腺癌组织标本，也难以在临床上观察胰腺癌的发生、发展过程。因此，通过胰腺癌动物模型，可以在动物体内模拟人胰腺癌的发生、发展过程，为深入研究胰腺癌的发生、发展机制以及指导治疗奠定基础。胰腺癌动物模型例如胰腺癌鼠模型包括KrasKO、P53KO、PC、KC和KPC鼠，这些模型均易发生肿瘤，但是周期均较长，有的甚至长达数月。在这些模型中，KPC鼠模型由于包含3种基因缺陷，因此与其它胰腺癌模型(细胞系、异种移植瘤等)相比，存在扩繁费用较高、周期更长等缺陷。但是，KPC鼠模型保留了胰腺癌天然的肿瘤微环境和免疫系统，为胰腺癌的肿瘤免疫机制研究和免疫治疗以及化疗增敏治疗等提供了有利便捷的工具。因此，目前急需一种能够快速且低成本的获得KPC胰腺癌动物模型的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的缺陷，提供了一种胰腺癌动物模型的构建方法。本专利技术的胰腺癌动物模型的构建方法包括：(1)构建KC鼠并对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代；(2)准备P53鼠并对P53鼠进行扩繁得到P53鼠的子代；(3)采用所述KC鼠的子代与所述P53鼠的子代进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型。进一步，步骤(1)中，所述构建KC鼠采用如下方法进行：将LSL-KrasG12D鼠与Pdx1-Cre鼠按照雌：雄＝1∶1至3∶1进行合笼交配，获得的LSL-KrasG12D阳性且Pdx1-Cre阳性的子代即为所述KC鼠。进一步，步骤(1)中，所述对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代采用如下方法进行：采用所述KC鼠与野生型鼠自然交配进行扩繁得到KC鼠的子代；或者，采用所述KC鼠的精子与野生型鼠的卵子通过快速扩繁进行扩繁得到KC鼠的子代。进一步，所述KC鼠是杂合KC鼠。进一步，步骤(2)中，所述对P53鼠进行扩繁得到P53鼠的子代采用如下方法进行：采用所述P53鼠与野生型鼠自然交配进行扩繁得到P53鼠的子代；或者，采用所述P53鼠的精子与野生型鼠的卵子通过快速扩繁进行扩繁得到P53鼠的子代。进一步，所述P53鼠是纯合P53鼠或杂合P53鼠。进一步，步骤(3)中，采用所述KC鼠的子代与所述P53鼠的子代自然交配进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型；或者，采用所述KC鼠的子代的卵子与所述P53鼠的子代的精子通过快速扩繁进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型。进一步，所述P53鼠的子代是P53纯合雄鼠或P53杂合雄鼠。进一步，所述P53鼠的子代是P53纯合雄鼠。进一步，所述KC鼠的子代是杂合KC鼠。本专利技术的技术方案至少具有如下有益效果：(1)本专利技术的构建方法基于IVF快速扩繁技术，能够在短时间内获得KPC胰腺癌鼠模型，具有时间短且成本低的优点。(2)本专利技术的构建方法主要以P53纯合雄鼠来进行扩繁，使KPC胰腺癌鼠模型的获得比例提高了一倍。附图说明图1显示了本专利技术实施例1中LSL-KrasG12D/+小鼠PCR鉴定结果。图2显示了本专利技术实施例1中Pdx-1-Cre小鼠PCR鉴定结果。图3显示了本专利技术实施例1中KC小鼠PCR鉴定结果。图4显示了本专利技术实施例3中P53纯合小鼠的PCR鉴定结果。图5显示了本专利技术实施例5中KPC小鼠PCR鉴定结果。具体实施方式为充分了解本专利技术之目的、特征及功效，借由下述具体的实施方式，对本专利技术做详细说明，但本专利技术并不仅仅限于此。定义为了便于理解，在此对本专利技术涉及的技术术语进行汇总。除非另有说明，或上下文中隐含有其含义，下述术语和短语包括下面提供的含义。除非另有明确说明，或从上下文看是显而易见的，下面的术语和短语不排除所述术语或短语在其所属
内已有的含义。定义被提供以有助于描述特定实施方式，但并不旨在限制本专利技术，因为本专利技术的范围只受权利要求书的限制。除非另有限定，本文使用的所有技术与科学术语与本专利技术所属领域的技术人员通常理解的具有相同的含义。本文所述的“体外受精”(in-vitrofertilization，IVF)是指分别将卵子与精子从哺乳动物内取出并在体外受精，发育成胚胎后，再移植回母体子宫内，以达到受孕目的的一种技术。本文所述的“快速扩繁”或“快速扩繁技术”是指对适龄雌鼠采用超数排卵的方式获得大量卵母细胞，通过新鲜或冷冻精子进行体外受精的方式获得需要的受精卵，受精卵发育到合适阶段时将其移植到代孕母鼠体内，短时间(一代)获得大量子代的技术。本文所述的“鼠”可以是小鼠、大鼠等，在本专利技术的具体实施例中主要以小鼠为例对本专利技术的技术方案进行说明。本文所述的“KPC胰腺癌鼠模型”是指LSL-KrasG１2D/+；LSL-Trp53R172H/+；Pdx-1-Cre鼠，其是经典的胰腺导管细胞癌动物模型。本文所述的“KC鼠”是指LSL-KrasG12D/+；Pdx-1-Cre(又称Lpf1-cre)鼠。本文所述的“P53鼠”是指LSL-Trp53R172H/+鼠。KPC胰腺癌动物模型的构建方法针对目前KPC胰腺癌动物模型构建周期长、费用高等问题，本专利技术的专利技术人创造性的提出了一种KPC胰腺癌动物模型的快速且高效的构建方法，该构建方法具体包括如下步骤：S101：构建KC鼠并对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代；S102：准备P53鼠并对P53鼠进行扩繁得到P53鼠的子代S103：采用KC鼠的子代与P53鼠的子代进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型。上述步骤S101和步骤S102顺序可互相，无先后顺序的设定。进一步，步骤S101包括：S1011：将LSL-KrasG12D鼠与Pdx1-Cre鼠按照雌：雄＝1∶1至3∶1进行合笼交配，获得的LSL-KrasG12D阳性且Pdx1-Cre阳性的子代即为所述KC鼠。其中，LSL-KrasG12D鼠与Pdx1-Cre鼠交配得到的子代通过PCR技术来鉴定其中的LSL-KrasG１2D阳性且Pdx1-Cre阳性的子代。在本专利技术中，LSL-KrasG12D鼠与Pdx1-Cre鼠可通过购买获得。S1012：采用KC鼠与野生型鼠自然交配进行扩繁得到KC鼠的子代；或者，采用KC鼠的精子与野生型鼠的卵子通过快速扩繁进行扩繁得到KC鼠的子代。得到KC鼠的子代采用PCR技术进行鉴定。优选地，步骤S1012采用KC鼠的精子与野生型鼠的卵子通过快速扩繁进行扩繁得到KC鼠的子代。优选地，步骤S1012采用的KC鼠是杂合体。专利技术人通过研究发现，Kras纯合突变鼠致死，杂合KC鼠成年后会发生胰腺癌(pancreaticductaladenocarcinoma，PDA)，6月龄时死亡率大概20％，因此，步骤S1012中的扩繁采用杂合KrasCre(KC)阳性鼠与野生型鼠交配扩繁或IVF快速扩繁。进一步，步骤S102包括：S1021：准备P53鼠。在本专利技术中P53鼠可通过购买获得。S1022：采用P53鼠与野生型鼠自然交配进行扩繁得到P53鼠的子代；或者，采用P53鼠的精子与野生型鼠的卵子通过快速扩繁进行扩繁得到P53鼠的子代。得到P53鼠的子代采用PCR技术进行鉴定。优选地，步骤S1022采用P53鼠的精本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胰腺癌动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建KC鼠并对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代；(2)准备P53鼠并对P53鼠进行扩繁得到P53鼠的子代；(3)采用所述KC鼠的子代与所述P53鼠的子代进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型。

【技术特征摘要】
1.一种胰腺癌动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建KC鼠并对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代；(2)准备P53鼠并对P53鼠进行扩繁得到P53鼠的子代；(3)采用所述KC鼠的子代与所述P53鼠的子代进行繁殖得到KPC胰腺癌鼠模型。2.根据权利要求1所述的胰腺癌动物模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述构建KC鼠采用如下方法进行：将LSL-KrasG12D鼠与Pdx1-Cre鼠按照雌∶雄＝1∶1至3∶1进行合笼交配，获得的LSL-KrasG12D阳性且Pdx1-Cre阳性的子代即为所述KC鼠。3.根据权利要求1所述的胰腺癌动物模型的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对KC鼠进行扩繁得到KC鼠的子代采用如下方法进行：采用所述KC鼠与野生型鼠自然交配进行扩繁得到KC鼠的子代；或者，采用所述KC鼠的精子与野生型鼠的卵子通过快速扩繁进行扩繁得到KC鼠的子代。4.根据权利要求3所述的胰腺癌动物模型的构建方法，其特征在于，所述KC鼠是杂合KC鼠。5.根据权利要求1所述的胰腺癌动物模...

【专利技术属性】
技术研发人员：张太平，赵玉沛，曹喆，冯梦宇，杨刚，邱江东，郑连芳，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11