一种兔舌癌动物模型的建立方法技术

本发明专利技术提供了一种兔舌癌动物模型的建立方法，包括以下步骤：建立兔舌鳞癌细胞系；将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养；取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型；基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型，建立具有高淋巴结转移潜能的舌癌动物模型，完整再现舌癌的临床特点及淋巴结转移生物学特性，为舌癌的预防及治疗提供更好的实验基础，可用于抗肿瘤化疗药物的敏感性评价，还可以进行放疗、内分泌治疗、免疫治疗、分子靶向治疗等新治疗手段的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，尤其涉及一种兔舌癌动物模型的建立方法。
技术介绍
近年来，随着基础和临床医学研究的不断发展，口腔颌面部鳞状细胞癌(OSCC)的诊断、治疗水平得到了显著提高，经过以手术、放疗和化疗为主的综合序列治疗后，5年生存率已达到64％左右，但仍有超过1/3的病人5年内死于肿瘤的局部复发和(或)远处转移[1-2]。早期(I、II期)的口腔癌患者，仍有约25％的病人不能得到治愈，而对于晚期(III、IV期)患者，这一数字则更高[3]。因此，阐明口腔颌面部恶性肿瘤的发病机制，全面提高该病的治愈率和有效地预防其发生、发展，成为口腔颌面-头颈肿瘤科面临的迫切任务。借助于肿瘤动物模型的间接研究，可有意识地施加或限制各种在自然条件下无法做到的干预因素，以便更准确地观察实验结果并与人类口腔颌面部鳞状细胞癌进行比较，有助于更简洁、更客观地认识该疾病的发生、发展规律，以提高该病的整体疗效和寻找有效的预防方法。因此，使用动物模型具有明显的优越性。对于研究颌面部恶性肿瘤的发生、发展规律及其转归等都具有重要的意义。适于口腔颌面部恶性肿瘤研究的动物模型至少应具备以下几个特点：①建立在具有正常免疫功能的动物体内；②细胞株本身应是非致免疫性的[4]，即最好是动物细胞自然发生恶性转化后形成的。③动物模型的病理类型、生物学行为应与人口腔颌面部恶性肿瘤基本相似，使用此模型进行的研究结果更具有参考价值。目前国内常用于鳞癌研究的主要是裸鼠移植瘤模型，裸鼠是免疫缺陷动物，不适合肿瘤免疫治疗和生物治疗研究。加之裸鼠平均寿命短等无法满足如抗癌药物的筛选及最佳化疗方案的选择、放化疗结合治疗颌面部转移癌的疗效机制、影像诊断和介入放射治疗学中有关药物的靶向性分布研究等。裸鼠个头太小，也不便于诸如热疗、放疗、介入治疗等局部治疗的实施。显然裸鼠口腔癌模型很难满足基础及临床研究的需要。
技术实现思路
本专利技术提供了一种兔舌癌动物模型的建立方法，建立具有高淋巴结转移潜能的舌癌动物模型，完整再现舌癌的临床特点及淋巴结转移生物学特性，为舌癌的预防及治疗提供更好的实验基础。本专利技术提供的技术方案如下：一种兔舌癌动物模型的建立方法，包括以下步骤：建立兔舌鳞癌细胞系；将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养；取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型；基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型。上述的建立方法，其中，所述建立兔舌鳞癌细胞系的步骤包括：建立口腔鳞癌动物模型；将口腔鳞癌动物模型分别以贴块法、消化法和癌腹水培养法进行原代培养；原代培养首次传代后用反复贴壁和胰酶消化法交替进行纯化。上述的建立方法，其中，所述将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养的步骤包括：选4周龄BALA/c-nu裸鼠，在SPF条件下饲养；取兔舌鳞癌细胞培养的第60代细胞；将上述第60代细胞接种在裸鼠后肢双侧臀部皮下，每只两个接种点。上述的建立方法，其中，所述取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型的步骤包括：无菌切取经过培养的裸鼠皮下成瘤的肿瘤组织并剪成2mm3大小组织块；将制成的组织块接种在兔舌前三分之二舌缘处，建立兔舌癌模型。上述的建立方法，其中，所述基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型的步骤包括：基于兔舌癌模型筛选出发生颈淋巴结转移的兔鳞癌；基于颈淋巴结转移的兔鳞癌建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型。上述的建立方法，其中，所述基于颈淋巴结转移的兔鳞癌建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型的步骤包括：将颈淋巴结转移的兔子进行培养；在经过培养的兔子上取淋巴结转移组织并修剪成1mm3小块；取2只新西兰兔并在臀部皮肤下分别植入所述小块后用1-0号线缝合继续饲养；取经过饲养后的2只新西兰白兔臀部的肿瘤组织；取10只新西兰白兔并将上述肿瘤组织植入新西兰白兔的舌体实质内经过培养后选出淋巴结转移的新西兰白兔；将上述的步骤进行循环操作直到建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型。上述的建立方法，其中，所述建立兔舌鳞癌细胞系的步骤中，原代培养的条件为：在5％CO2、37℃培养箱内的20％RPMI1640兔血清培养基中培养。上述的建立方法，其中，所述建立兔舌鳞癌细胞系的步骤中，原代培养首次传代后用反复贴壁和胰酶消化法交替进行纯化，在传代时用0.02％的EDTA和0.25％胰蛋白酶1∶4的混合液在37℃温箱内孵育15～20min。上述的建立方法，其中，所述将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养的步骤中，取对数生长期的兔舌鳞癌细胞消化、离心、收集细胞，0.9％生理盐水洗涤1次，血球计数板上计数，用PBS制成细胞悬液，以1×106先后接种在裸鼠后肢双侧臀部皮下，每只两个接种点，共20个接种点。上述的建立方法，其中，所述取10只新西兰白兔并将上述肿瘤组织植入新西兰白兔的舌体实质内经过培养后选出淋巴结转移的新西兰白兔的步骤中，其中植入的具体位置为舌前三分之二舌缘处的舌体实质内。本专利技术提供了一种兔舌癌动物模型的建立方法及制备方法，包括以下步骤：建立兔舌鳞癌细胞系；将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养；取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型；基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型，由于舌癌是最常见的口腔癌，其生物学特征具有生长快、浸润性强、早期可发生淋巴结转移等特点。随着诊治技术，尤其是综合序列治疗在临床上的应用，舌癌患者的治愈率和生存率已有明显提高。但局部复发和淋巴结转移仍是舌癌患者主要致死因素，并以区域淋巴结转移为其主要表现形式，也是判断患者愈合的可靠指标。因此，建立具有高淋巴结转移潜能的舌癌动物模型，完整再现舌癌的临床特点及淋巴结转移生物学特性，为舌癌的预防及治疗提供更好的实验基础。附图说明通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术及其特征、外形和优点将会变得更明显。在全部附图中相同的标记指示相同的部分。并未刻意按照比例绘制附图，重点在于示出本专利技术的主旨。图1为本专利技术一种兔舌癌动物模型的建立方法示意图；图2为本专利技术中兔舌种植瘤在光镜片下成像示意图；图3为本专利技术中肿瘤细胞在透射电镜下的成像示意图；图4为本专利技术中超微结构细胞间桥粒连接示意图；图5为本专利技术中新西兰白兔舌鳞癌细胞接种裸鼠成瘤生长曲线。具体实施方式在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本专利技术更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员而言显而易见的是，本专利技术可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本专利技术发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。为了彻底理解本专利技术，将在下列的描述中提出详细的步骤以及详细的结构，以便阐释本专利技术的技术方案。本专利技术的较佳实施例详细描述如下，然而除了这些详细描述外，本专利技术还可以具有其他实施方式。如图1-图5所示，本专利技术提供的一种兔舌癌动物模型本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：建立兔舌鳞癌细胞系；将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养；取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型；基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型。

【技术特征摘要】
1.一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
建立兔舌鳞癌细胞系；
将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养；
取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型；
基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型。
2.如权利要求1所述的一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征在于，
所述建立兔舌鳞癌细胞系的步骤包括：
建立口腔鳞癌动物模型；
将口腔鳞癌动物模型分别以贴块法、消化法和癌腹水培养法进行原代培
养；
原代培养首次传代后用反复贴壁和胰酶消化法交替进行纯化。
3.如权利要求1所述的一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征在于，
所述将兔舌鳞癌细胞接种在裸鼠皮下并进行培养的步骤包括：
选4周龄BALA/c-nu裸鼠，在SPF条件下饲养；
取兔舌鳞癌细胞培养的第60代细胞；
将上述第60代细胞接种在裸鼠后肢双侧臀部皮下，每只两个接种点。
4.如权利要求1所述的一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征在于，
所述取经过培养的裸鼠皮下肿瘤组织接种在兔舌上，建立兔舌癌模型的步骤
包括：
无菌切取经过培养的裸鼠皮下成瘤的肿瘤组织并剪成2mm3大小组织块；
将制成的组织块接种在兔舌前三分之二舌缘处，建立兔舌癌模型。
5.如权利要求1-4任一所述的一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征
在于，所述基于兔舌癌模型建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型的步骤包括：
基于兔舌癌模型筛选出发生颈淋巴结转移的兔鳞癌；
基于颈淋巴结转移的兔鳞癌建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型。
6.如权利要求5所述的一种兔舌癌动物模型的建立方法，其特征在于，
所述基于颈淋巴结转移的兔鳞癌建立高淋巴结转移兔舌癌动物模型的...

【专利技术属性】
技术研发人员：任国欣，鞠侯雨，郭伟，吴云腾，王润湘，吕炯，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：上海;31