NKIRAS2基因调控区序列、调控序列及其在鼻咽癌中的应用制造技术

本发明专利技术提供了NKIRAS2基因调控区序列，并充分揭示了该调控区序列可被如miR‑BART13的调控序列调节，从而作用于NF‑κB信号通路，最终影响鼻咽癌的增殖和侵袭转移；在此过程中构建了单独包含调控区序列或调控序列的重组载体，以及包含重组载体的鼻咽癌相关细胞。这些可以做为鼻咽癌诊断方法检测靶标和防治药物开发靶点，此外也可以为鼻咽癌增殖和侵袭转移机制研究以及临床诊治方法和药物开发提供理论基础和应用依据。

NKIRAS2 gene regulatory region sequence, regulatory sequence and its application in nasopharyngeal carcinoma

The present invention provides the sequence of NKIRAS2 gene regulatory region and fully reveals that the sequence of NKIRAS2 gene regulatory region can be regulated by the regulatory sequence such as Mir BART13, thereby acting on the NF kappa B signaling pathway, ultimately affecting the proliferation and invasion and metastasis of nasopharyngeal carcinoma; in this process, a recombinant vector containing the sequence of regulatory region or regulatory sequence alone, and nasopharyngeal cancer-related cells containing the recombinant vector are construct \u3002 These can be used as diagnostic targets and drug development targets for nasopharyngeal carcinoma. In addition, they can also provide theoretical basis and application basis for the study of proliferation, invasion and metastasis mechanism of nasopharyngeal carcinoma, clinical diagnosis and treatment methods and drug development.

【技术实现步骤摘要】
NKIRAS2基因调控区序列、调控序列及其在鼻咽癌中的应用
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及NKIRAS2基因调控区序列、调控序列及其在鼻咽癌中的应用。
技术介绍
鼻咽癌（Nasopharyngealcarcinoma,NPC）是东南亚和我国南方地区高发的癌症，放疗为其治疗首选。目前早期NPC的5年生存率可达95%以上，然而由于NPC早期症状不明显，75%以上的初诊患者被确诊时即为晚期，而局部晚期NPC的5年总生存率只有78.4-80%,且有20-30%患者发生局部治疗失败或远处转移。因此研究NPC的发生发展机制，探索其中的关键基因，揭示基因上的重要靶点，从而开发相应的特异的检测方法和治疗药物或手段，这对于NPC的筛查和诊治具有重要意义。研究表明，miRNA（microRNA，简写为miR）在包括NPC的癌症中表达会出现失调，已被初步证明和癌症的生物行为密切相关，因此是癌症机制研究以及诊治方法和药物开发的重要切入点。NPC和EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)感染显著相关，EBV在NPC细胞中仅表达少数病毒蛋白，却大量表达miRNA。申请人团队前期研究发现EBV产生的miR-BART13即EBV-miR-BART13（BamHI-ARightwardTranscript13,BART13）在NPC细胞C666-1中高表达，并可分泌到细胞外；miR-BART13在NPC患者的血浆中特异高表达，其表达水平与其N分期、临床分期显著正相关，且在放疗完成时降至接近0等医学生物学现象和规律。然而miR-BART13在NPC发生发展中的具体分子机制尚未被揭示。经过深入研究，本专利技术首次阐明了miR-BART13通过靶向抑制NKIRAS2基因来活化NF-κB信号通路，从而影响NPC的增殖和侵袭转移。本专利技术揭示的NKIRAS2基因和miR-BART13的具体作用靶点，可以做为NPC诊断方法检测靶标和防治药物开发靶点，此外也可以为NPC增殖和侵袭转移机制研究以及临床诊治方法和药物开发提供理论基础和应用依据。
技术实现思路
本专利技术首次提供了NKIRAS2基因的一种调控区序列及其调控序列，尤其是EBV的miR-BART13这一调控序列，构建含有调控区序列或调控序列的载体和NPC细胞株；在阐明所述调控区序列和调控序列对NPC增殖和侵袭转移的影响和具体通路的基础上，提供了在NPC中的相关应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的目的之（1）在于提供NKIRAS2基因调控区序列、包含特定调控区序列的重组病毒载体、包含所述重组病毒载体的细胞以及这三者在NPC中的应用，具体如下：NKIRAS2基因调控区序列如SEQIDNO:1-4中的任一序列所示，均为7核苷酸序列。其中，SEQIDNO：1和SEQIDNO：3所示的调控区序列的转录序列分别是如SEQIDNO：4和SEQIDNO：2所示的序列。本专利技术中所述的序列是指核苷酸序列及其衍生物；基因调控区序列主要是指特定区域基因序列本身或该区域转录序列，这些序列需要满足可以受调控分子作用从而调节基因整体的表达水平，如果调控分子为核酸及其衍生物的则称之为调控序列。NKIRAS2基因调控区序列除了指明的SEQIDNO:1-4中的任一序列这一调控区功能序列外，还可以有其它核苷酸序列及其衍生物，但不能够影响调控区序列和调控序列的相互结合和调节功能的发挥。以NCBI（NationalCenterforBiotechnologyInformation）上的核酸数据库中的NC_000017.11(登录号)序列为参照，所述调控区序列对应于参照序列的第42025222-42025228且包含两端位点的区域或该区域对应的转录本区域。相应调控序列通过与该调控区序列相互结合从而影响NKIRAS2基因的表达，该调控区序列改变将影响其与调控序列的相互结合。NKIRAS2基因的表达产物是通过作用于NF-κB信号通路来影响NPC的增殖和侵袭转移的。鉴于对NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO:1-4中任一序列的位置、序列本身及基因调节通路和功能的揭示，可遵循分子生物学方法和操作对包含此调控区序列的片段进行扩增，并将所述扩增片段导入到包括病毒在内的载体中获得包含NKIRAS2基因调控区序列的重组载体，并将所述重组载体导入到细胞（尤其是NPC细胞株）中获得包含所述重组载体的细胞。其中采用的载体包含但不限于pLVTHM慢病毒载体，采用的细胞包含但不限于CNE-1，CNE-2，6-10B，5-8F，C666-1、NP69和SUNE-1。所构建的载体和细胞可用于鼻咽癌包括增殖和侵袭转移在内的发生发展机制的研究中。鉴于对NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO:1-4中任一序列的位置、序列本身及其对NPC增值和侵袭转移影响和具体通路的揭示，可以将所述调控区序列、所述包含NKIRAS2基因调控区序列的重组载体和包含所述重组载体的细胞应用于NPC包括增殖和侵袭转移在内的发生发展机制的研究中以及临床筛查、防控、诊断和治疗中；将所述调控区序列做为NPC诊断方法检测靶标和防治药物开发靶点中的应用。本专利技术的目的之（2）在于提供靶向NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO:1-4的调控序列、包含所述调控序列的载体、包含所述载体的细胞以及这三者在NPC中的应用，具体如下：靶向NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO:1-4的调控序列，其序列包含如SEQIDNO：5-6所示的任一序列。本专利技术所述序列是指核苷酸序列及其衍生物；基因调控区序列主要是指特定区域基因序列本身或该区域转录序列，这些序列需要满足可以受调控分子作用从而调节基因整体的表达水平，如果调控分子为核酸及其衍生物的则称之为调控序列。调控序列除了指明的调控功能序列SEQIDNO：5-6中的任一序列外，还可以有其它核苷酸序列及其衍生物，但不能够影响调控序列对于NKIRAS2基因调控区序列的结合和调节功能。其中，包含SEQIDNO：5的调控序列可以靶向如权利要求1中所述的NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO：1和SEQIDNO：2，包含SEQIDNO：6的调控序列可以靶向如权利要求1中所述的NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO：3和SEQIDNO：4，从而调控NKIRAS2基因在鼻咽癌细胞内的表达，进而通过NF-κB信号通路影响到鼻咽癌细胞的增殖和侵袭转移。鉴于对NKIRAS2基因调控区序列对应的调控序列以及调控区序列和调控序列两者之间调控关系的揭示，可遵循分子生物学方法和操作将所述调控序列导入到包括病毒在内的载体中获得包含所述调控序列的重组载体，并将所述重组载体导入到细胞（尤其是NPC细胞株）中获得包含所述重组载体的细胞。其中采用的载体包含但不限于pLVTHM慢病毒载体，采用的细胞包含但不限于CNE-1，CNE-2，6-10B，5-8F，C666-1、NP69和SUNE-1。鉴于对靶向NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO:1-4的调控序列及其对NPC增值和侵袭转移影响和具体通路的揭示，可以将所述调控序列、包含所述调控序列的重组载体和包含所述重组载体的细胞应用于NPC包括增殖和侵袭转移在内的发生发展机制的研究中以及临床筛查、防控、诊断本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NKIRAS2基因调控区序列，其特征在于所述的NKIRAS2基因调控区序列如SEQ ID NO：1‑4中的任一序列所示；以NCBI核酸数据库中的NC_000017.11序列为参照，所述的NKIRAS2基因调控区对应于参照序列的第42025222‑42025228且包含两端位点的区域或该区域对应的转录本区域；所述的NKIRAS2基因调控区序列可被相应的调控序列结合，从而调节NKIRAS2基因的表达，进而通过作用于NF‑κB信号通路来影响到鼻咽癌细胞的增殖和侵袭转移。

【技术特征摘要】
1.一种NKIRAS2基因调控区序列，其特征在于所述的NKIRAS2基因调控区序列如SEQIDNO：1-4中的任一序列所示；以NCBI核酸数据库中的NC_000017.11序列为参照，所述的NKIRAS2基因调控区对应于参照序列的第42025222-42025228且包含两端位点的区域或该区域对应的转录本区域；所述的NKIRAS2基因调控区序列可被相应的调控序列结合，从而调节NKIRAS2基因的表达，进而通过作用于NF-κB信号通路来影响到鼻咽癌细胞的增殖和侵袭转移。2.根据权利要求1中所述的NKIRAS2基因调控区序列的应用，其特征在于所述的NKIRAS2基因调控区序列做为鼻咽癌诊断方法检测靶标和防治药物开发靶点中的应用，以及在鼻咽癌包括增殖和侵袭转移机制在内的研究和临床诊治中的应用。3.一种重组病毒载体，其特征在于该重组病毒载体包含权利要求1中所述的NKIRAS2基因调控区序列SEQIDNO：1-4中的任一条。4.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于该宿主细胞包含如权利要求3中所述的重组病毒载体。5.一种靶向NKIRAS2基因调控区的调控序列，其特征在于所述的靶向NKIRAS2基因调控区的调控序列包含如SEQIDNO：5-6所示的任一序列；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘建基，许元基，叶韵斌，宗井凤，林少俊，
申请(专利权)人：福建省肿瘤医院福建省肿瘤研究所，福建省癌症防治中心，
类型：发明
国别省市：福建,35