用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、检测方法及试剂盒。本发明专利技术提供的检测引物能与EGFR基因保守序列结合，扩增突变序列。本发明专利技术提供的检测方法采用检测荧光信号基团能与扩增片段结合发出荧光信号，利用阻断剂与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明专利技术采用竞争性等位基因特异性PCR扩增技术，建立基于实时荧光PCR的试剂盒，可准确检测EGFR基因T790M突变。本发明专利技术方法操作简单，结果易读，灵敏度高，能检出含0.001％EGFR基因T790M突变的样本，实现对EGFR基因T790M突变的超灵敏检测。

Primers, Detection Methods and Kits for Detecting T790M Mutation of Human EGFR Gene

The invention provides a primer, a detection method and a kit for detecting the mutation of human EGFR gene T790M. The detection primer provided by the invention can combine with the conservative sequence of EGFR gene to amplify the mutation sequence. The detection method of the invention adopts the detection of fluorescent signal groups to combine with amplified fragments to emit fluorescent signals, and uses blockers to specifically bind with wild type sequences corresponding to mutation sites to inhibit wild type non-specific amplification. The invention adopts competitive allele specific PCR amplification technology and establishes a reagent kit based on real-time fluorescent PCR, which can accurately detect the T790M mutation of EGFR gene. The method has the advantages of simple operation, readable results and high sensitivity, and can detect samples containing 0.001% EGFR gene T790M mutation, thus realizing the hypersensitive detection of EGFR gene T790M mutation.

【技术实现步骤摘要】
用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、检测方法及试剂盒本申请要求了2017年10月13日提交中国专利局的，申请号为201710955204.4，专利技术名称为“用于超灵敏检测人类EGFR基因突变的引物、检测方法及试剂盒”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、检测方法及试剂盒。
技术介绍
人类表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)是一种蛋白酪氨酸激酶受体，广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞、角质细胞等细胞表面，具有酪氨酸激酶活性。它是HER/ErbB家族成员之一，因此又名HER1或ErbB1。EGFR与其配体结合后在细胞表面形成二聚体，通过酪氨酸激酶的活性，激活受体自磷酸化，在细胞内发出信号，经过细胞质中衔接蛋白和酶的级联反应，调节转录因子激活基因的转录，指导细胞迁移、黏附、增殖、分化和凋亡。当EGFR发生突变时，EGFR自身或其配体过表达，从而通过自分泌或旁分泌方式刺激细胞形成失控性增殖。此外，EGFR过度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测人类EGFR基因T790M突变的检测方法，包括以下步骤：将用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、阻断剂、检测荧光信号基团、待测基因样品混合，进行实时荧光定量PCR，获得检测结果；其中，所述用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物，包括突变上游引物和突变下游引物，突变上游引物包括1‑10条针对不同突变位点的引物，其长度为15‑40个碱基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的碱基为突变位点，与待测EGFR突变型基因的一条链互补；突变下游引物为一条共用的下游引物，其长度为15‑40个碱基，与待测EGFR突变型基因的另一条链互补；所述阻断剂能与EGFR基因T790M突变位点野...

【技术特征摘要】
2017.10.13 CN 20171095520441.用于检测人类EGFR基因T790M突变的检测方法，包括以下步骤：将用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物、阻断剂、检测荧光信号基团、待测基因样品混合，进行实时荧光定量PCR，获得检测结果；其中，所述用于检测人类EGFR基因T790M突变的引物，包括突变上游引物和突变下游引物，突变上游引物包括1-10条针对不同突变位点的引物，其长度为15-40个碱基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的碱基为突变位点，与待测EGFR突变型基因的一条链互补；突变下游引物为一条共用的下游引物，其长度为15-40个碱基，与待测EGFR突变型基因的另一条链互补；所述阻断剂能与EGFR基因T790M突变位点野生型序列特异结合，抑制野生型非特异扩增；所述检测荧光信号基团能与PCR扩增片段结合并发出荧光信号。2.如权利要求1所述的用于检测人类EGFR基因T790M突变的检测方法，其特征在于，包括1条针对突变位点的引物，其长度为33个碱基，其中3’末端的第3位碱基为突变位点，与待测EGFR突变型基因的一条链互补。3.如权利要求1所述的用于检测人类EGFR基因T790M突变的检测方法，所述突变下游引物，其长度为24个碱基，与待测EGFR突变型基因的另一条链互补。4.如权利要求1所述的用于检测人类EGFR基因T790M突变的检测方法，其特征在于，所述引物序列包括：突变位点EGFR(c.2369C>T)突变上游引物：TCTGCCTCACCTCCACCGTGCAGCTCATCATGC(SEQIDNO.1)突变下游引物：AATATTGTCTTTGTGTTCCCGGAC(SEQIDNO.2)。5.如权利要求1所述的用于检测人类EGFR基因T790M突变的检测方法，其特征在于，所述阻断...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈渊能，何浪平，陈韵姿，
申请(专利权)人：广州健天基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44