一种从凤仙花中提取总黄酮的方法技术

本发明专利技术提供了一种从凤仙花中提取总黄酮的方法，所述的提取方法包括：（1）凤仙花前处理，（2）粗提液的制备，（3）黄酮粗提液纯化，（4）脱色。本发明专利技术使用亚临界水萃取凤仙花中的黄酮，利用亚临界水良好的渗透性与溶解能力，使黄酮与亚临界水充分接触并溶出，提高了黄酮的提取率，聚酰胺树脂对黄酮具有较高的吸附率和解吸率，使用聚酰胺树脂对黄酮进行分离纯化，提高了黄酮的纯化效率，增大了黄酮的纯度，通过中性氧化铝对纯化后的黄酮进行脱色，进一步改善了黄酮的品质。本发明专利技术提取黄酮工艺简单、成本低、效率高、稳定性好，而且得到的产品安全，不存在重金属、有机溶剂毒性残留等问题，适用于大规模的工业化生产。

A Method for Extracting Total Flavonoids from Impatiens

The invention provides a method for extracting total flavonoids from impatiens. The extraction methods include: (1) pretreatment of impatiens, (2) preparation of crude extract, (3) purification of crude extract of flavonoids, (4) decolorization. The invention uses subcritical water to extract flavonoids from impatiens, makes full contact and dissolution of flavonoids with subcritical water by using good permeability and solubility of subcritical water, improves the extraction rate of flavonoids, polyamide resin has high adsorption and desorption rate for flavonoids, uses polyamide resin to separate and purify flavonoids, improves the purification efficiency of flavonoids and enhances the Yellow color. The purity of ketone was further improved by decolorizing the purified flavone with neutral alumina. The method has the advantages of simple process, low cost, high efficiency and good stability, and the obtained product is safe, without toxic residues of heavy metals and organic solvents, and is suitable for large-scale industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种从凤仙花中提取总黄酮的方法
本专利技术属于天然产物提取
，具体涉及一种从凤仙花中提取总黄酮的方法。
技术介绍
凤仙花为凤仙花科凤仙花属，为一年生草本植物，凤仙花属共有植物900余种，分布广泛。该属植物的具有广泛的应用价值，例如：茎、种子能活血化瘀，可治疗风湿性关节炎、溃疡、消炎等症状；花可阵痛、活血化瘀，外用可解毒，同时还具有抗过敏、抗菌、止痒、抗肿瘤及产后疼痛等功效。已经从凤仙花中分离出了多种药用成分，如：黄酮、多酚、花青素、皂苷、醌类等。黄酮作为抗氧化剂具有延缓衰老、增强人体免疫力、降低疾病发生率等功效，然而传统的凤仙花使用方法是用水煮沸直接饮用，因此为了提高凤仙花中活性成分的有效利用率，有必要对其活性成分进行提取，进一步提高凤仙花的使用价值。传统的黄酮提取方法主要是水提法或者乙醇溶液提取，再通过浓缩和干躁即得，然而这种方法的总黄酮提取量低，黄酮提取纯度较差，因此需要进一步开发适用于凤仙花的黄酮提取方法，以提高黄酮的提取率和提取纯度。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有的黄酮提取方法的缺陷，提供一种从凤仙花中提取高含量、高纯度的黄酮的方法。技术方案：本专利技术公开了一种从凤仙花中提取总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）凤仙花前处理取新鲜的凤仙花用蒸馏水清洗干净，置于37℃烘箱中进行烘干，用粉碎机将烘干的凤仙花瓣粉碎得到粉碎体。（2）粗提液的制备称取10g凤仙花粉碎体于萃取釜中，按照物料与蒸馏水的质量比为1:20~1:50的比例向萃取釜中加入蒸馏水，亚临界水萃取条件为：萃取压力为1~10MPa，萃取时间为10~60min，萃取温度为100~150℃，萃取完成后，将萃取提取物进行离心分离，收集上层液体，向下层的离心底物中加入体积浓度为40~80%的乙醇溶液，进行回流萃取2~3次，每次萃取所用的乙醇的量为100~300mL，将滤液进行合并，通过过滤去除沉淀，再将过滤后的滤液和亚临界水萃取物合并，用旋转蒸发仪蒸发去除大部分溶剂，得到黄酮的浓缩粗提液。（3）黄酮粗提液纯化将聚酰胺树脂装入10×200的分离层析柱中，在室温下将步骤（2）得到的黄酮浓缩粗提液以0.5mL/min的速度加入聚酰胺树脂中，吸附20~40min后，对层析柱进行洗脱，洗脱条件为先采用蒸馏水进行水洗，再用体积分数为40~70%的乙醇洗脱，洗脱流速为0.5~2mL/min，收集乙醇洗脱液，得到除杂后的黄酮提取液。（4）脱色在柱底部附有砂芯过滤片的玻璃管中加入50g50~200目的中性氧化铝，鲜香柱中加入蒸馏水平衡层析住，再通过抽滤施压的方式吸出蒸馏水，将步骤（3）纯化后的黄酮提取液以1mL/min的流速泵入氧化铝柱中，用蒸馏水为洗脱剂进行洗脱，直到洗脱液中不含黄酮为止，合并蒸馏水洗脱液，将其进行冷冻干燥，即得到纯化脱色后的凤仙花黄酮。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（2）中物料与蒸馏水以1:30的质量比加入萃取釜中。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（2）中萃取压力为4MPa。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（2）中萃取时间为30min。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（2）中萃取温度为120℃。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（2）中回流萃取所用的乙醇的体积分数为70%。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（3）中聚酯胺树脂的处理过程为：将聚酯胺树脂用95%的乙醇过夜浸泡，再用蒸馏水通过抽滤洗涤除去乙醇溶液，再用5%的NaOH溶液浸泡过夜，再用蒸馏水洗涤除去碱液，再用2%的HCl溶液浸泡过夜，用蒸馏水洗涤至中性后在蒸馏水中浸泡备用。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（3）中纯化洗脱所用的乙醇的体积分数为50%。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（3）中乙醇的洗脱流速为1mL/min。本专利技术所述的从凤仙花中提取总黄酮的方法步骤（4）中脱色所用的是100目的中性氧化铝。有益效果：本专利技术使用亚临界水萃取凤仙花中的黄酮，再通过聚酰胺树脂纯化和中性氧化铝脱色，得到了高提取含量和高纯度的凤仙花黄酮。亚临界水具有良好的渗透性与溶解能力，使黄酮与亚临界水充分接触并溶出，提高了黄酮的提取率，聚酰胺树脂对黄酮具有较高的吸附率和解吸率，使用聚酰胺树脂对黄酮进行分离纯化，提高了黄酮的纯化效率，增大了黄酮的纯度，通过中性氧化铝对纯化后的黄酮进行脱色，进一步改善了黄酮的品质。本专利技术提取黄酮工艺简单、成本低、效率高、稳定性好，而且得到的产品安全，不存在重金属、有机溶剂毒性残留等问题，适用于大规模的工业化生产。具体实施方式以下实施例中总黄酮含量以芦丁计，参照GBT20574-2006方法对总黄酮含量进行检测。配制不同浓度的芦丁标准品，4、8、12、16、20、24μg/mL，分别加三氯甲烷至5mL，加入溴甲酚绿缓冲液和0.2mol/LNaOH溶液各1mL，振摇1min后静置30min，取澄清的三氯甲烷液在415nm波长处进行测定，以浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，制作标准曲线。根据标准曲线计算总黄酮的含量，黄酮得率（%）=黄酮含量/样品总质量参照×100%。实施例1一种从凤仙花中提取总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）凤仙花前处理取新鲜的凤仙花用蒸馏水清洗干净，置于37℃烘箱中进行烘干，用粉碎机将烘干的凤仙花瓣粉碎得到粉碎体。（2）粗提液的制备称取10g凤仙花粉碎体于萃取釜中，按照物料与蒸馏水的质量比为1:30的比例向萃取釜中加入蒸馏水，亚临界水萃取条件为：萃取压力为4MPa，萃取时间为30min，萃取温度为120℃，萃取完成后，将萃取提取物进行离心分离，收集上层液体，向下层的离心底物中加入体积浓度为70%的乙醇溶液，进行回流萃取2~3次，每次萃取所用的乙醇的量为100~300mL，将滤液进行合并，通过过滤去除沉淀，再将过滤后的滤液和亚临界水萃取物合并，用旋转蒸发仪蒸发去除大部分溶剂，得到黄酮的浓缩粗提液。（3）黄酮粗提液纯化将聚酯胺树脂用95%的乙醇过夜浸泡，再用蒸馏水通过抽滤洗涤除去乙醇溶液，再用5%的NaOH溶液浸泡过夜，再用蒸馏水洗涤除去碱液，再用2%的HCl溶液浸泡过夜，用蒸馏水洗涤至中性后在蒸馏水中浸泡备用。将聚酰胺树脂装入10×200的分离层析柱中，在室温下将步骤（2）得到的黄酮浓缩粗提液以0.5mL/min的速度加入聚酰胺树脂中，吸附30min后，对层析柱进行洗脱，洗脱条件为先采用蒸馏水进行水洗，再用体积分数为50%的乙醇洗脱，洗脱流速为1mL/min，收集乙醇洗脱液，得到除杂后的黄酮提取液。（4）脱色在柱底部附有砂芯过滤片的玻璃管中加入50g100目的中性氧化铝，鲜香柱中加入蒸馏水平衡层析住，再通过抽滤施压的方式吸出蒸馏水，将步骤（3）纯化后的黄酮提取液以1mL/min的流速泵入氧化铝柱中，用蒸馏水为洗脱剂进行洗脱，直到洗脱液中不含黄酮为止，合并蒸馏水洗脱液，将其进行冷冻干燥，即得到纯化脱色后的凤仙花黄酮。根据标准曲线计算得出黄酮的得率为12.56%，纯度为88.27%。实施例2一种从凤仙花中提取总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）凤仙花前处理取新鲜的凤仙花用蒸馏水清洗干净，置于37℃烘箱中进行烘干，用粉碎机将烘干的凤仙花瓣粉碎得到粉碎体。（2）粗提液的制备称取10g凤仙花粉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从凤仙花中提取总黄酮的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）凤仙花前处理取新鲜的凤仙花用蒸馏水清洗干净，置于37℃烘箱中进行烘干，用粉碎机将烘干的凤仙花瓣粉碎得到粉碎体；（2）粗提液的制备称取10g凤仙花粉碎体于萃取釜中，按照物料与蒸馏水的质量比为1:20~1:50的比例向萃取釜中加入蒸馏水，亚临界水萃取条件为：萃取压力为1~10MPa，萃取时间为10~60min，萃取温度为100~150℃，萃取完成后，将萃取提取物进行离心分离，收集上层液体，向下层的离心底物中加入体积浓度为40~80%的乙醇溶液，进行回流萃取2~3次，每次萃取所用的乙醇的量为100~300mL，将滤液进行合并，通过过滤去除沉淀，再将过滤后的滤液和亚临界水萃取物合并，用旋转蒸发仪蒸发去除大部分溶剂，得到黄酮的浓缩粗提液；（3）黄酮粗提液纯化将聚酰胺树脂装入10×200的分离层析柱中，在室温下将步骤（2）得到的黄酮浓缩粗提液以0.5mL/min的速度加入聚酰胺树脂中，吸附20~40min后，对层析柱进行洗脱，洗脱条件为先采用蒸馏水进行水洗，再用体积分数为40~70%的乙醇洗脱，洗脱流速为0.5~2mL/min，收集乙醇洗脱液，得到除杂后的黄酮提取液；（4）脱色在柱底部附有砂芯过滤片的玻璃管中加入50g 50~200目的中性氧化铝，鲜香柱中加入蒸馏水平衡层析住，再通过抽滤施压的方式吸出蒸馏水，将步骤（3）纯化后的黄酮提取液以1mL/min的流速泵入氧化铝柱中，用蒸馏水为洗脱剂进行洗脱，直到洗脱液中不含黄酮为止，合并蒸馏水洗脱液，将其进行冷冻干燥，即得到纯化脱色后的凤仙花黄酮。...

【技术特征摘要】
1.一种从凤仙花中提取总黄酮的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）凤仙花前处理取新鲜的凤仙花用蒸馏水清洗干净，置于37℃烘箱中进行烘干，用粉碎机将烘干的凤仙花瓣粉碎得到粉碎体；（2）粗提液的制备称取10g凤仙花粉碎体于萃取釜中，按照物料与蒸馏水的质量比为1:20~1:50的比例向萃取釜中加入蒸馏水，亚临界水萃取条件为：萃取压力为1~10MPa，萃取时间为10~60min，萃取温度为100~150℃，萃取完成后，将萃取提取物进行离心分离，收集上层液体，向下层的离心底物中加入体积浓度为40~80%的乙醇溶液，进行回流萃取2~3次，每次萃取所用的乙醇的量为100~300mL，将滤液进行合并，通过过滤去除沉淀，再将过滤后的滤液和亚临界水萃取物合并，用旋转蒸发仪蒸发去除大部分溶剂，得到黄酮的浓缩粗提液；（3）黄酮粗提液纯化将聚酰胺树脂装入10×200的分离层析柱中，在室温下将步骤（2）得到的黄酮浓缩粗提液以0.5mL/min的速度加入聚酰胺树脂中，吸附20~40min后，对层析柱进行洗脱，洗脱条件为先采用蒸馏水进行水洗，再用体积分数为40~70%的乙醇洗脱，洗脱流速为0.5~2mL/min，收集乙醇洗脱液，得到除杂后的黄酮提取液；（4）脱色在柱底部附有砂芯过滤片的玻璃管中加入50g50~200目的中性氧化铝，鲜香柱中加入蒸馏水平衡层析住，再通过抽滤施压的方式吸出蒸馏水，将步骤（3）纯化后的黄酮提取液以1mL/min的流速泵入氧化铝柱中，用蒸馏水为洗脱剂进行洗脱，直到洗脱液中不含黄酮为止...

【专利技术属性】
技术研发人员：李苏杨，徐勤霞，成清明，
申请(专利权)人：苏州市贝克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32