改造丝心蛋白制造技术

一种改造丝心蛋白，其为包含式1：[(A)n基序‑REP]m所表示的结构域序列的改造丝心蛋白，其中，结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于至少REP中的一个或两个以上甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的、甘氨酸残基的含量降低的氨基酸序列。[式1中，(A)n基序表示由4～20个氨基酸残基构成的氨基酸序列，并且(A)n基序中丙氨酸残基数相对于总氨基酸残基数为83％以上。REP表示由10～200个氨基酸残基构成的氨基酸序列。m表示8～300的整数。两个以上存在的(A)n基序等彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列。]。

Modification of silk core protein

A modified filament core protein is a modified filament core protein expressed by the domain sequence of inclusion formula 1: [(A) n In formula 1, (A) n motif represents an amino acid sequence consisting of 4 to 20 amino acid residues, and (A) n motif contains more than 83% alanine residues relative to the total amino acid residues. REP represents an amino acid sequence consisting of 10 to 200 amino acid residues. M represents an integer of 8 to 300. Two or more (A) n motifs can be the same amino acid sequence or different amino acid sequences. ].

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改造丝心蛋白
本专利技术涉及改造丝心蛋白。更具体而言，本专利技术涉及甘氨酸残基的含量降低的改造丝心蛋白。另外，本专利技术还涉及编码改造丝心蛋白的核酸、包含该核酸序列的表达载体、利用该表达载体进行了转化的宿主和由改造丝心蛋白制造的产品。
技术介绍
丝心蛋白为纤维状蛋白质之一，其含有最多达90％的与B片层的形成相关的甘氨酸残基、丙氨酸残基和丝氨酸残基(非专利文献1)。作为丝心蛋白，已知有构成昆虫和蜘蛛类产生的丝的蛋白质(蚕丝蛋白、蜂丝蛋白、蛛丝蛋白)等。蚕丝蛋白具有优良的机械特性、吸湿特性和除臭特性，是广泛作为衣服原料使用的原材料。另外，蚕丝为免疫耐受的天然纤维，生物亲和性高，因此也用于手术用缝合线等用途。蜘蛛存在最多达7种的丝腺，分别产生性质不同的丝心蛋白(蛛丝蛋白)。蛛丝蛋白根据其来源的器官被命名为具有高韧性的大壶状腺丝蛋白(majorampullatespiderprotein、MaSp)、具有高度伸长力的小壶状腺丝蛋白(minorampullatespiderprotein、MiSp)、以及鞭状腺(flagelliform(Flag))、管状腺(tubuliform)、聚合腺(a本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改造丝心蛋白，其为包含式1：[(A)n基序‑REP]m所表示的结构域序列的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于至少REP中的一个或两个以上甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的、甘氨酸残基的含量降低的氨基酸序列，式1中，(A)n基序表示由4～20个氨基酸残基构成的氨基酸序列，并且(A)n基序中丙氨酸残基数相对于总氨基酸残基数为83％以上，REP表示由10～200个氨基酸残基构成的氨基酸序列，m表示8～300的整数，两个以上存在的(A)n基序彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列，两个以上存在的REP彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.28 JP 2016-091201;2016.11.11 JP 2016-220741.一种改造丝心蛋白，其为包含式1：[(A)n基序-REP]m所表示的结构域序列的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于至少REP中的一个或两个以上甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的、甘氨酸残基的含量降低的氨基酸序列，式1中，(A)n基序表示由4～20个氨基酸残基构成的氨基酸序列，并且(A)n基序中丙氨酸残基数相对于总氨基酸残基数为83％以上，REP表示由10～200个氨基酸残基构成的氨基酸序列，m表示8～300的整数，两个以上存在的(A)n基序彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列，两个以上存在的REP彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于在REP中的选自GGX和GPGXX中的至少一种基序序列中至少一个或两个以上该基序序列中的一个甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的氨基酸序列，其中，X表示甘氨酸以外的氨基酸残基。3.如权利要求2所述的改造丝心蛋白，其中，甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的基序序列相对于全部基序序列的比例为10％以上。4.一种改造丝心蛋白，其为包含式1：[(A)n基序-REP]m所表示的结构域序列的改造丝心蛋白，其中，将从所述结构域序列中除去位于最靠C末端侧的(A)n基序至所述结构域序列的C末端为止的序列而得到的序列中的全部REP中含有的由XGX构成的氨基酸序列的总氨基酸残基数设为z、将从所述结构域序列中除去位于最靠C末端侧的(A)n基序至所述结构域序列的C末端为止的序列而得到的序列中的总氨基酸残基数设为w时，z/w为50.9％以上，其中，X表示甘氨酸以外的氨基酸残基，式1中，(A)n基序表示由4～20个氨基酸残基构成的氨基酸序列，并且(A)n基序中丙氨酸残基数相对于总氨基酸残基数为83％以上，REP表示由10～200个氨基酸残基构成的氨基酸序列，m表示8～300的整数，两个以上存在的(A)n基序彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列，两个以上存在的REP彼此可以为相同的氨基酸序列，也可以为不同的氨基酸序列。5.如权利要求1～4中任一项所述的改造丝心蛋白，其中，具有与天然来源的丝心蛋白相比在相当于REP中的一个或两个以上甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的基础上、相当于进一步置换、缺失、插入和/或添加有一个或两个以上氨基酸残基的氨基酸序列。6.如权利要求5所述的改造丝心蛋白，其中，所述天然来源的丝心蛋白为昆虫或蜘蛛类来源的丝心蛋白。7.如权利要求5所述的改造丝心蛋白，其中，所述天然来源的丝心蛋白为蜘蛛类的大壶状腺丝蛋白(MaSp)或小壶状腺丝蛋白(MiSp)。8.如权利要求5～7中任一项所述的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与所述天然来源的丝心蛋白相比相当于在REP中的选自GGX和GPGXX中的至少一种基序序列中至少一个或两个以上该基序序列中的一个甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的氨基酸序列，并且，甘氨酸残基被置换为其他氨基酸残基的基序序列相对于全部基序序列的比例为10％以上，其中，X表示甘氨酸以外的氨基酸残基。9.如权利要求8所述的改造丝心蛋白，其中，所述其他氨基酸残基为选自由谷氨酰胺(Q)残基、缬氨酸(V)残基、亮氨酸(L)残基、异亮氨酸(I)残基、甲硫氨酸(M)残基、脯氨酸(P)残基、苯丙氨酸(F)残基、色氨酸(W)残基、天冬酰胺(N)残基、丝氨酸(S)残基、赖氨酸(K)残基和谷氨酸(E)残基组成的组中的氨基酸残基。10.如权利要求8所述的改造丝心蛋白，其中，所述其他氨基酸残基为谷氨酰胺(Q)残基。11.如权利要求1～10中任一项所述的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于进一步至少一个或两个以上(A)n基序发生了缺失的、(A)n基序的含量降低的氨基酸序列。12.如权利要求11所述的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于从N末端侧向C末端侧至少每1～3个(A)n基序中一个(A)n基序发生了缺失的氨基酸序列。13.如权利要求11所述的改造丝心蛋白，其中，所述结构域序列具有与天然来源的丝心蛋白相比相当于从N末端侧向C末端侧至少依次重复发生了两个连续的(A)n基序的缺失和一个(A)n基序的缺失的氨基酸序列。14.如权利要求11～13中任一项所述的改造丝心蛋白，其中，从N末端侧向C末端侧将相邻的两个[(A)n基序一REP]单元的REP的氨基酸残基数依次进行比较，将在氨基酸残基数少的REP的氨基酸残基数设为1时另一者的REP的氨基酸残基数之比为2～3....

【专利技术属性】
技术研发人员：森田启介，菅原润一，
申请(专利权)人：丝芭博株式会社，小岛冲压工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP