一种抑制小鼠关节炎症的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制小鼠关节炎症的多肽及其应用。来自于日本血吸虫虫卵及成虫抗原中的小分子多肽SJMHE1由24个氨基酸组成，是人和小鼠HSP60分子共同的T细胞表位，能预防和治疗小鼠胶原诱导的关节炎。本发明专利技术的有益效益是可用于治疗类风湿性关节炎，具有潜在的新药开发价值。

A Polypeptide Inhibiting Arthritis in Mice and Its Application

The invention discloses a polypeptide for inhibiting arthritis in mice and its application. SJMHE1, a small molecular polypeptide derived from the egg and adult antigens of Schistosoma japonicum, consists of 24 amino acids. It is a T cell epitope shared by human and mouse HSP60 molecules. It can prevent and treat collagen-induced arthritis in mice. The beneficial benefit of the present invention is that it can be used to treat rheumatoid arthritis and has potential value for new drug development.

【技术实现步骤摘要】
一种抑制小鼠关节炎症的多肽及其应用
本专利技术属于药物领域，具体涉及一种抑制小鼠关节炎症的多肽及其应用。
技术介绍
类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)影响全球约1％的人口，我国发病率约为0.3-0.5％，RA的致残率很高，未经治疗的RA患者2-3年致残率高达70％，由此造成丧失劳动能力的人群高达千余万，已经成为一种严重威胁人类健康的疾病[1]。当前，RA的临床治疗仍以非甾体抗炎药物和慢作用抗风湿药物为主，糖皮质激素和细胞毒免疫抑制剂也较为常用，这些药物均有一定疗效，但由于毒副反应较大，病人难以长期服用。因此，急需寻求新的特异性作用靶点或新的干预手段对RA患者进行治疗，开发毒性小且能够有效治疗的药物及其作用机制的研究不仅具有重要的社会效益，而且必将产生重大的经济效益。探索RA致病机理，并且依此研发相关新药是医学界研究的热点。目前认为在RA疾病发展过程中，存在外周免疫耐受异常、淋巴细胞异常增殖和T细胞内环境稳态的失衡。而调节性T细胞(Tregs)是维持机体自身耐受及免疫平衡所必需，大量的研究表明，靶向于Tregs的治疗，重建自身免疫病患者的免疫自稳，将是一种相对安全且长期有效的治疗策略与方法。在自发性关节炎患者的关节中，Th17细胞的数量显著增高的同时，Tregs的数量显著降低，Tregs与Th17细胞的数量在患者炎症关节中呈相反的关系，提示Tregs/Th17细胞失衡参与自身免疫性关节炎的发病，因此，活化Tregs，重建RA等自身免疫性疾病患者的免疫平衡，是目前研究的热点问题之一。目前，利用Tregs重建RA患者的免疫稳态越来越受到国内外学者的关注，用于治疗RA的细胞因子拮抗剂和共刺激分子如anti-TNF-α、anti-IL-6、CTLA4-Ig等，其治疗效应的发挥与Tregs的诱导密切相关，但这些药物在抑制自身免疫病理反应的同时，也杀伤正常免疫细胞，长期用药会导致严重感染等致命的不良反应。近年来，利用识别自身免疫反应中致病性T细胞的表位肽，通过诱导Tregs，分泌抑制性细胞因子IL-10、TGF-β等抑制自身免疫或过敏性疾病的发生，避免了细胞因子拮抗剂对正常免疫细胞的杀伤，副作用少，成为现在免疫治疗的一个全新的研究领域。例如，识别人HSP60分子的一段多肽P277，已进行了人类1型糖尿病的III期临床，可显著保护胰岛β细胞的功能，且无副反应；格拉默(glatiramer)，一个由谷氨酸(Glu)、赖氨酸(Lys)、酪氨酸(Tyr)和丙氨酸(Ala)组成的随机多肽(GLAT)，是磷酸鞘氨醇的小分子模拟物，已用于治疗多发性硬化症患者，取得了很好的治疗效果。这些最新的研究结果提示：开发这些小分子多肽，通过直接或间接的方法抑制自身免疫反应中致病性T细胞，将比细胞因子拮抗剂治疗更经济，副作用小，且治疗范围更广泛。目前用于关节炎治疗的多肽主要是血管活性肠肽、以及来自于人HSP60、分支杆菌HSP65、人II型胶原的表位肽。2009年，Koffeman等的研究发现大肠杆菌HSP蛋白与致病性T细胞同源的表位肽dnaJP1具有很强的抗炎效应，并进行了dnaJP1治疗类风湿性关节炎的II期临床试验，获得了较好的治疗效果。同年，Root-Bernstein发现，与人髓磷脂碱基蛋白同源的、来自于麻疹病毒的多肽也具有很强的抗炎效应，其单次免疫就可显著保护大鼠佐剂性关节炎的发生。但是，国内目前还没有关于抑制小鼠胶原诱导关节炎的血吸虫多肽的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抑制小鼠关节炎症的多肽。本专利技术的另一目的是提供该多肽的应用。一种来自于日本血吸虫的小分子多肽SJMHE1，其序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术小分子多肽在治疗或预防类风湿性关节炎药物中的应用。一种治疗和/或预防类风湿性关节炎的药物，包含所述的小分子多肽和辅料。有益效果：本专利技术发现来自日本血吸虫的小分子多肽SJMHE1免疫可显著减少CIA小鼠关节炎的发病率、减轻症状、降低临床评分。说明书附图图1SJMHE1处理减少CIA小鼠关节炎的发生图2SJMHE1处理减少CIA小鼠关节肿胀图3SJMHE1处理减少CIA小鼠关节的病理改变图4SJMHE1处理可减少CIA小鼠抗牛II型胶原IgG抗体的产生具体实施方式：实施例1：构建胶原诱导的关节炎(collageninducedarthritis,CIA)小鼠模型：1)200μg牛II型胶原(CII，购自BDBioscience)与完全弗氏佐剂(CFA)等量混合，制成乳化剂，在0，21天尾根部皮下免疫DBA/1小鼠，共免疫2次。CFA由不完全弗氏佐剂(IFA，购自Sigma)中加4mg/ml的MycobacteriumTuberculosisH37RA(Difco)配制。并经关节炎症的临床评分及组织学鉴定，验证CIA小鼠的构建成功。2)在第21天CII免疫后，每隔一天，两人双盲观察小鼠每个脚爪情况：0＝无改变；1＝轻微肿胀和/或红斑；2＝中度肿胀和红斑；3＝显著的肿胀和红斑；每只小鼠4个脚爪最大的临床评分为12。在第42天处死小鼠，取小鼠前爪及后肢，经10％中性福尔马林固定，进行组织学签定。实施例2：SJMHE1治疗CIA小鼠；1)小鼠被分为7组：CIA、PBS、10μgSJMHE1、10μgOVA323-339(对照肽组)、及组(正常对照组)；将PBS、SJMHE1、OVA323-339与IFA等量混合，制成乳化剂，尾脊部皮下注射小鼠，注射剂量100μl/只；在牛II型胶原(CII)免疫的第7天(d7)进行治疗，每隔14d皮下注射治疗，共注射3次；各治疗组小鼠经关节炎症的临床评分、组织学鉴定，血清中anti-CII的IgG、IgG1、IgG2a抗体检测，验证SJMHE1的治疗作用。2)收集小鼠血清，ELISA检测小鼠血清中CII特异的IgG、IgG1、IgG2a。即：ELISA板中包被5μg/mlCII，4℃冰箱过夜。每个反应板经PBS-T洗3次后用0.3％的BSA在37℃封闭1h；封闭后加1：100的稀释血清4℃冰箱过夜，PBS-T洗5次后加HRP结合的大鼠抗小鼠IgG、IgG1、IgG2a37℃孵育1h；PBS-T洗5次后，TMB显色，H2SO4终止后，在450nm处测吸光度的值(OD值)。结果如图1所示，DBA/1小鼠经牛CII胶原免疫后，其脚爪大概24-28d左右出现红肿症状，100％出现症状在50d左右。随着时间延长，小鼠脚爪出现红肿症状的频率和严重程度越严重，呈时间依赖。但是SJMHE1免疫可显著减少CIA小鼠关节炎的发病率、降低临床评分(图1)。如图2所示，OVA323-339、PBS和CIA小鼠的脚爪出理严重的红肿炎症症状，但SJMHE1处理小鼠关节的红肿症状明显减轻。如图3所示，OVA323-339、PBS和CIA小鼠的脚爪病理出理大量炎性细胞的浸润及软骨破坏，但SJMHE1处理小鼠关节，其炎性细胞的浸润及软骨破坏最轻。各组小鼠脚爪关节病理评分见表1，SJMHE1处理小鼠显著减少脚爪关节的炎症、血管翳、软骨和骨损伤评分。表1胶原诱导关节炎小鼠组织病理评分如图4所示，除了小鼠，SJMHE1、OVA323-339、PBS处理的小鼠均检测出了抗CII的IgG、IgG1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种来自于日本血吸虫的小分子多肽，其特征在于序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种来自于日本血吸虫的小分子多肽，其特征在于序列如SEQIDNO.1所示。2.日本血吸虫来源的小分子多肽在治疗或预防...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪雪峰，毛朝明，陈德玉，舒扬，冯玎琦，
申请(专利权)人：江苏大学附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32