血管内皮细胞SIRT6基因的应用及药物制造技术

本发明专利技术公开了血管内皮细胞SIRT6基因的应用及药物，属于基因功能与应用领域。本发明专利技术以内皮细胞特异性SIRT6基因敲除小鼠为实验对象，通过与对照组SIRT6

Application and Drugs of SIRT6 Gene in Vascular Endothelial Cells

The invention discloses the application and medicine of SIRT6 gene of vascular endothelial cells, belonging to the field of gene function and application. The present invention takes endothelial cell specific SIRT6 gene knockout mice as experimental objects and passes through the control group SIRT6.

【技术实现步骤摘要】
血管内皮细胞SIRT6基因的应用及药物
本专利技术属于基因功能与应用领域，涉及SIRT6内皮特异性敲除小鼠的构建方法及SIRT6基因在内皮功能障碍相关疾病中的功能与应用。
技术介绍
血管内皮是许多心血管疾病及其危险因素作用的重要靶器官。血管内皮具有屏障作用；同时，血管内皮作为体内最大的内分泌系统可分泌多种物质维持血管正常结构和功能，其中一氧化氮(Nitricoxide，NO)是临床评定内皮功能的重要指标。NO由一氧化氮合酶(Nitricoxidesynthase，NOS)催化其底物左旋精氨酸生成，具有扩张血管、抑制血小板的聚集与激活、抑制中性粒细胞与单核细胞对血管壁的浸润与吸附、抑制血管平滑肌细胞增殖和抗血栓形成，调节血管张力、维持血管稳态及血管内皮正常功能的心血管保护作用。当在各种内外因素的作用下，血管内皮细胞合成和释放多种血管活性物质和细胞因子之间的平衡被打乱，导致内皮功能障碍(Endothelialdysfunction，ED)。其最主要的特征是血管内皮NO生物利用度下降和内皮依赖性血管舒张功能受损。内皮功能障碍是造成动脉粥样硬化的始动环节，也是其发生和发展的基础,同时也是糖尿病血管病变、高血压、急性冠脉综合征等心血管病变的重要病理生理基础。在动脉粥样硬化早期，即内皮功能障碍阶段通过干预措施保护内皮功能无疑可减少动脉粥样硬化的发病率并降低其致残致死率，具有重要的临床意义。目前认为内皮功能障碍可以部分逆转，因此，阐明其机制并找到安全有效的干预措施是防治心血管疾病的关键环节。SIRT1-SIRT7为第III类组蛋白去乙酰化酶(Sirtuins)家族的7个同源蛋白，在细胞中的定位和功能各不相同。大量证据表明，组蛋白去乙酰化酶Sirtuins(SIRT1-SIRT7)家族通过去乙酰化修饰参与心血管、肿瘤和代谢性等疾病的调控。随着研究深入，人们发现定位在细胞核中的SIRT6通过去乙酰化修饰组蛋白参与调控血管内皮细胞的炎症和自噬等过程，影响内皮功能障碍，进而参与心血管疾病的发生发展过程。最新报道表明，SIRT6可通过修复DNA损伤保护血管内皮功能，并参与调控内皮细胞的炎症反应。然而SIRT6在内皮功能障碍中发挥保护作用的机制尚未有任何相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供血管内皮细胞SIRT6基因的应用及基于其的抗心血管疾病的药物。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术公开了血管内皮细胞SIRT6基因在制备治疗内皮功能障碍所致的心血管疾病的药物中的应用。优选地，所述的药物为调节血管内皮NO释放水平及NOS酶活性的药物。优选地，所述的药物为调节血管内皮依赖性舒张功能的药物。优选地，所述的药物为调节主动脉血管中eNOS蛋白表达的药物。优选地，所述的药物为保证血管渗透性的药物。本专利技术还公开了一种小分子激动剂，所述小分子激动剂为特异性激活SIRT6基因的激动剂。本专利技术还公开了上述小分子激动剂在制备治疗内皮功能障碍所致的心血管疾病的药物中的应用。本专利技术还公开了一种用于治疗心血管疾病的药物，该药物以SIRT6基因为靶点，增强SIRT6基因表达水平。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术以内皮细胞特异性SIRT6基因敲除小鼠为实验对象，通过与对照组SIRT6flox/flox小鼠相比较，发现内皮细胞特异性SIRT6基因敲除小鼠的血管内皮NO释放水平及NOS酶活性显著下降，血管舒张功能、屏障功能受损，提示内皮细胞中SIRT6的缺失会导致严重的内皮功能障碍，进而可能引发其他心血管病变。通过本专利技术说明SIRT6基因具有保护内皮功能的作用，为SIRT6在研究防治心血管疾病的新靶点和新策略中所发挥的作用提供了理论依据和临床基础。因此，本专利技术奖SIRT6基因作为药物靶点，构建SIRT6基因过表达的体外细胞模型或动物模型，用于筛选预防、缓解和/或治疗内皮功能障碍的药物；SIRT6基因也可作为基因治疗中的靶基因，设计并制备预防、缓解和/或治疗内皮功能障碍的药物和/或生物学试剂，通过基因工程技术达到预防、缓解和/或治疗内皮功能障碍的目的。以SIRT6为靶点设计小分子化合物激动剂，利用体外细胞模型或动物模型，通过筛选发现其中能特异性激活SIRT6的分子，从而为心血管疾病中内皮功能障碍的治疗提供新的治疗性分子。附图说明图1为内皮细胞SIRT6特异性敲除小鼠的构建及鉴定结果图；其中，(a)为SIRT6内皮特异性敲除小鼠构建的原理图；(b)为小鼠PCR鉴定的结果图；(c)为western验证小鼠主动脉中SIRT6蛋白表达的表达情况；图2为内皮细胞SIRT6特异性敲除小鼠的表型及组织形态学分析；图3为内皮细胞中SIRT6的缺失对小鼠血清中NO含量及NOS酶活性的影响结果图；其中，(a)为NO含量；(b)为NOS酶活性；图4为内皮细胞中SIRT6的缺失对小鼠主动脉血管中eNOS蛋白表达影响；图5为内皮细胞中SIRT6的缺失对小鼠血管内皮依赖的舒张功能的影响结果图；其中，(a)为不同浓度ACh(内皮依赖性血管舒张剂)对小鼠胸主动脉张力的影响；(b)不同浓度SNP(非内皮依赖性血管舒张剂)对小鼠胸主动脉张力的影响；图6为内皮细胞中SIRT6的缺失对小鼠血管屏障功能的影响结果图。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。下面结合附图对本专利技术做进一步详细描述：注：本专利技术的实验动物及饲养条件如下：内皮细胞特异性Cre转基因小鼠(Tie2-Cre)购买于南京大学模式动物研究所(货号：008863)；SIRT6flox/flox小鼠购买于美国JacksonLaboratory(货号：017334)。小鼠词养于西安交通大学医学实验动物中心SPF(SpecialPathogenFree,SPF)级屏障环境中(许可证号：SCXK(陕)2012-003)，维持温度22℃左右，相对湿度70％左右，明暗环境自动转换时间为12h。动物自由进食和饮水，实验严格按照西安交通大学动物中心实验动物管理规定进行动物饲养和取材，所有实验动物均得到本院校伦理学委员会审核、批准。本专利技术所述的SIRT6基因，已报到的，人类的SIRT6基因位于染色体19p13.3区域，包括8个外显子，全长355个氨基酸，分子量为39.1kD，等电点为9.12(Mahlknecht等.2006)。实施例1SIRT6内皮特异性敲除小鼠的构建及鉴定为了进一步研究内皮细胞中SIRT6的缺失对血管内皮的功能，本专利技术构建了SIRT6内皮特异性敲除小鼠。首先，将雌性的SIRT6flox/flox小鼠与雄性的C57BL/6JTie2-Cre小鼠杂交，获得Tie2-Cre/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.血管内皮细胞SIRT6基因在制备治疗内皮功能障碍所致的心血管疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.血管内皮细胞SIRT6基因在制备治疗内皮功能障碍所致的心血管疾病的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为调节血管内皮NO释放水平及NOS酶活性的药物。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为调节血管内皮依赖性舒张功能的药物。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为调节主动脉血管中eNOS蛋白表达的...

【专利技术属性】
技术研发人员：林蓉，肖云芳，王维蓉，杨广德，王博，何延浩，靳真，陈力方，王冠，陷雨珊，吕霄晗，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61