人参病程相关基因及其检测引物、试剂盒及应用与检测方法技术

本发明专利技术提供了人参病程相关基因及其检测引物、试剂盒及应用与检测方法，属于中草药病虫害防治领域。本发明专利技术提供的人参病程相关基因的检测引物，方便对人参病程相关基因进行检测，对人参病虫害防治具有积极的效果，帮助人参病虫害防治提较好的指导和帮助，将检测引物应用于制备试剂盒，方便对相关基因的检测，具有较高的应用价值。

Ginseng disease-related genes and their detection primers, kits and application and detection methods

The invention provides ginseng disease course related genes, detection primers, kits and application and detection methods, belonging to the field of pest control of Chinese herbal medicine. The detection primers of ginseng disease course-related genes provided by the invention are convenient to detect ginseng disease course-related genes, have positive effects on ginseng disease and pest control, and help ginseng disease and pest control to improve guidance and help. The detection primers are applied to the preparation of kits to facilitate the detection of related genes, and have high application value.

【技术实现步骤摘要】
人参病程相关基因及其检测引物、试剂盒及应用与检测方法
本专利技术涉及中草药病虫害防治领域，具体而言，涉及人参病程相关基因及其检测引物、试剂盒及应用与检测方法。
技术介绍
人参黑斑病(英文名Alternariapanaxwhetz)属半知菌亚门，链格孢属真菌，分布在东北地区，病菌以菌丝体和分生孢子在地上部病残体上、土壤中及种子表面越冬，成为翌年发病的初侵染源。主要为害叶片，也可为害茎、花梗、果实等部位。致叶片上病斑近圆形或不规则形，黄褐色至黑褐色，稍有轮纹，病斑时常导致早期枯落。茎上病斑椭圆形，黄褐色，向上、下扩展，中间凹陷变黑，上生黑色霉层，使茎秆倒伏。果实受害时，表面产生褐色斑点，逐渐干瘪成“吊干籽“。潮湿时病斑上生出的黑色霉层，为病原菌的分生孢子梗和分季孢子。该病发生普遍，是人参最严重的病害之一。目前对人参病程相关的基因的研究还较少，而且外源施用硅能有效缓解黑斑病的发生，因此外源硅通过什么基因起作用目前还不知道。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供人参病程相关基因，通过该基因可以获得人参抗病和胁迫相关的结果。本专利技术的第二目的在于提供检测上述的人参病程相关基因的检测引物，该引物能检测到与人参病程相关的基因。本专利技术的第三目的在于提供上述的人参病程相关基因的检测引物在人参病程相关基因检测中的应用。本专利技术的第四目的在于提供上述的人参病程相关基因的检测引物在制备人参病程相关基因的检测试剂盒中的应用。本专利技术的第五目的在于提供人参病程相关基因的检测试剂盒，检测试剂盒方便对人参病程相关基因进行检测。本专利技术的第六目的在于提供人参病程相关基因的检测方法。为了实现本专利技术的上述目的，采用以下技术方案：人参病程相关基因，人参病程相关基因的碱基序列如SEQIDNo.1所示。人参病程相关基因的检测引物，检测引物的碱基序列分别如SEQIDNo.1-2所示。上述的人参病程相关基因的检测引物在人参病程相关基因检测中的应用。上述的人参病程相关基因的检测引物在制备人参病程相关基因的检测试剂盒中的应用。人参病程相关基因的检测试剂盒，检测试剂盒包括上述的人参病程相关基因的检测引物。人参病程相关基因的检测方法，检测方法包括以下步骤：用RNA提取试剂提取人参叶片样本的总RNA；然后以总RNA和反转录试剂进行反转录合成cDNA；以cDNA、荧光定量PCR反应试剂和人参病程相关基因的检测引物进行荧光定量PCR反应，以人参actin作为内参基因，分析人参病程相关基因的表达量。与现有技术相比较，本专利技术的有益效果包括：本专利技术提供的人参病程相关基因的检测引物，方便对人参病程相关基因进行检测，对人参病虫害防治具有积极的效果，帮助人参病虫害防治提较好的指导和帮助，将检测引物应用于制备试剂盒，方便对相关基因的检测，具有较高的应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实验例提供的不同样本的人参病程相关基因的表达量qPCR检测图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员应当理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的人参病程相关基因及其检测引物、试剂盒及应用与检测方法进行具体说明。通过土培实验发现外源施硅能有效缓解人参黑斑病的发病进程，对植物进行转录组试验，得到六个病程相关蛋白，在接种黑斑病时显著升高(P<0.05)；将得到的转录组数据进行过滤得到CleanData，与指定的参考基因组进行序列比对，得到的MappedData，进行插入片段长度检验、随机性检验等文库质量评估；进行可变剪接分析、新基因发掘和基因结构优化等结构水平分析；根据基因在不同样品或不同样品组中的表达量进行差异表达分析、差异表达基因功能注释和功能富集等表达水平分析；筛选得到与人参黑斑病相关的基因数据。人参病程相关基因，人参病程相关基因的碱基序列如SEQIDNo.1所示。人参病程相关基因的检测引物，检测引物的碱基序列分别如SEQIDNo.2-3所示。本专利技术中针对人参病程相关基因设计特异性较强的引物对，通过该检测引物能特异性的检测样本中的人参病程相关基因。检测引物的上游引物如：SEQIDNO.2为112777:5’-GACCAATAGTTGCGCTGCCG-3’；下游引物如：SEQIDNO.3为112777R:5’-CAAGTCATGAACACGTCGCC-3’。产物长度120bp。上述的人参病程相关基因的检测引物在人参病程相关基因检测中的应用。上述的人参病程相关基因的检测引物在制备人参病程相关基因的检测试剂盒中的应用。人参病程相关基因的检测试剂盒，检测试剂盒包括上述的人参病程相关基因的检测引物。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，至少还包括RNA提取试剂、反转录试剂和荧光定量PCR反应试剂中的一种。通过试剂盒提供的RNA提取试剂提取人参样本中的总RNA，利用反转录试剂进行反转录，并用荧光定量PCR反应试剂进行PCR反应，就通过相关基因的表达情况就能检测人参的发病情况。在试剂盒中，包括集成检测引物及相关配套的化学试剂，方便对基因进行检测；同时，通过试剂盒提供相应的检测试剂，能提高检测的稳定性、可靠性和精确度。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，RNA提取试剂为Trizol、氯仿、异丙醇和75％的乙醇中的至少一种。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，反转录试剂为Oligo(dT)18primer、反转录缓冲液、RNaseInhibitor、dNTP以及反转录酶中的至少一种。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，荧光定量PCR反应试剂包括TransStartTopGreenqPCRSuperMix。人参病程相关基因的检测方法，检测方法包括以下步骤：用RNA提取试剂提取人参叶片样本的总RNA；然后以总RNA和反转录试剂进行反转录合成cDNA；以cDNA、荧光定量PCR反应试剂和人参病程相关基因的检测引物进行荧光定量PCR反应，以人参actin作为内参基因，分析人参病程相关基因的表达量，荧光定量PCR反应的条件为：93-95℃预变性2min；93-95℃变性5s；58-61℃退火15s；72℃延伸10s；45个循环。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供人参病程相关基因，人参病程相关基因的碱基序列如SEQIDNo.1所示。人参病程相关基因的碱基序列如下所示：GACCAATAGTTGCGCTGCCGGGCAGCAGTGCGGGCATTATACGCAGATTGTGTGGAGAACAACGCGACGAGTTGGGTGTGCTCGGGTTGTTTGTGACAGTGGCGACGTGTTCATGACTTG本实施例还提供人参病程相关基因的检测引物，检测引物的碱基序列分别如SEQIDNo.2-3所示。检测引物的上游引物如：SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人参病程相关基因，其特征在于，所述人参病程相关基因的碱基序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.人参病程相关基因，其特征在于，所述人参病程相关基因的碱基序列如SEQIDNo.1所示。2.检测如权利要求1所述的人参病程相关基因的检测引物，其特征在于，所述检测引物的碱基序列分别如SEQIDNo.2-3所示。3.如权利要求2所述的人参病程相关基因的检测引物在人参病程相关基因检测中的应用。4.如权利要求2所述的人参病程相关基因的检测引物在制备人参病程相关基因的检测试剂盒中的应用。5.人参病程相关基因的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括权利要求2所述的人参病程相关基因的检测引物。6.根据权利要求5所述的人参病程相关基因的检测试剂盒，其特征在于，至少还包括RNA提取试剂、反转录试剂和荧光定量PCR反应试剂中的一种。7.根据权利要求6所述的人参病程相关基因的检测试剂盒，其特征在于，所述RNA提取试剂为Trizol、氯仿、异丙醇和75％的乙醇中的至少一种。8.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李美佳，张亚玉，陈建波，王秋霞，刘政波，邵财，
申请(专利权)人：中国农业科学院特产研究所，
类型：发明
国别省市：吉林,22