一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法技术

本发明专利技术公开了一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法，具体是先取新鲜动物肝脏，并将肝脏内血液冲洗干净，然后将肝脏样本与前处理液混合后匀浆，制得组织匀浆液，在匀浆液中加入内标，混和均匀后离心，取上清液作为待测样品，最后将样品送入液相色谱‑质谱联用检测仪进行检测，采集数据，经标准曲线回归计算，得到动物肝脏内乙酰辅酶A的浓度；其中，所述前处理液是含有二硫苏糖醇和苯甲基磺酰氟的高氯酸水溶液。与现有的酶联免疫标记法，本发明专利技术采用的液质联用方法快速、可靠，操作步骤简化，适合批量测定肝脏内乙酰辅酶A的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法
本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法。
技术介绍
乙酰辅酶A是机体内脂肪酸的β-氧化及糖酵解后产生的丙酮酸氧化脱羧的产物，是糖、脂肪、蛋白质三大营养物质共同的中间代谢产物。乙酰辅酶A的主要去路包括经三羧酸循环和氧化磷酸化彻底氧化生成二氧化碳和水，释放ATP并提供能量；合成脂肪酸、酮体等能量前体、合成胆固醇等生理活性物质。肝脏是乙酰辅酶A合成、代谢、转化的主要场所。肝脏内乙酰辅酶A的动态变化与胰岛素抵抗的发生、发展有着必要的联系。生理条件下，胰岛素调控肝脏内乙酰辅酶A的合成与利用，减弱肝糖异生，降低肝糖输出。在肥胖或高脂饮食下，肝脏内乙酰辅酶A异常堆积，削弱胰岛素调控作用，最终导致或加剧胰岛素抵抗。肝脏内乙酰辅酶A的含量是评价机体肝脏胰岛素抵抗的重要指标。因此，需要建立一个可以检测肝脏内乙酰辅酶A的方法，以合理预测机体产生或加剧肝脏胰岛素抵抗的风险。乙酰辅酶A的测定报道较少，这可能与乙酰辅酶A不稳定的特性有关。肝脏组织获取后，若不经合理的、及时的处理过程，组织内的乙酰辅酶A会迅速降解，不能很准确的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，样本获取，取新鲜动物肝脏，并将肝脏内血液冲洗干净；步骤2，样本前处理，将步骤1的肝脏样本与前处理液混合后匀浆，制得组织匀浆液，在匀浆液中加入内标，混和均匀后离心，取上清液作为待测样品；步骤3，样本测定，将步骤2的样品送入液相色谱‑质谱联用检测仪进行检测，采集数据，经标准曲线回归计算，得到动物肝脏内乙酰辅酶A的浓度；其中，所述前处理液是含有二硫苏糖醇和苯甲基磺酰氟的高氯酸水溶液；步骤3中液相色谱‑质谱联用检测仪的检测条件具体如下：液相色谱条件：C18色谱柱，流动相A为0.1%甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，柱温40℃...

【技术特征摘要】
1.一种动物肝脏内乙酰辅酶A的液质联用测定方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，样本获取，取新鲜动物肝脏，并将肝脏内血液冲洗干净；步骤2，样本前处理，将步骤1的肝脏样本与前处理液混合后匀浆，制得组织匀浆液，在匀浆液中加入内标，混和均匀后离心，取上清液作为待测样品；步骤3，样本测定，将步骤2的样品送入液相色谱-质谱联用检测仪进行检测，采集数据，经标准曲线回归计算，得到动物肝脏内乙酰辅酶A的浓度；其中，所述前处理液是含有二硫苏糖醇和苯甲基磺酰氟的高氯酸水溶液；步骤3中液相色谱-质谱联用检测仪的检测条件具体如下：液相色谱条件：C18色谱柱，流动相A为0.1%甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，柱温40℃，流速0.8mL/min,梯度洗脱，初始流动相为流动相A和流动相B按体积比95%：5%保持0.5min，在0.5min内流动相B升高为70%，并在此条件下保持2.0min，其后在0.5min内流动相B降为5%，保持0.5min，总采集时间为4min；质谱条件：离子源为电喷雾离子源，正离子模式，扫描类型为选择反应监测或多级反应监测，离子源喷雾电压为4500V，离子传输管温度为350℃，雾化气和辅助气分别为40和20Arb，氩气压力设定为1.0mTorr，扫描时间为0.2s，定量方式为内标法，定量分析的离子对分别为：乙酰辅酶A，810→303，内...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱志霞，李宁，黄芳，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32