一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种L‑天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明专利技术在天然L‑天冬酰胺酶的基础上，通过定点突变生物技术改造L‑天冬酰胺酶分子结构，L‑天冬酰胺酶突变体的纯酶液酶活提高至2037.13U/mg，较原始酶酶活(约1483.81U/mg)相比提高了约37.3％。本发明专利技术表明第22位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响，对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础，并提高了该酶的在食品行业中的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法
本专利技术涉及一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体及其构建方法，属于基因工程技术和酶工程领域。
技术介绍
L-天冬酰胺酶能够通过水解脱氨基反应将L-天冬酰胺催化形成L-天冬氨酸和氨。目前Escherichia.coli，Erwiniachrysanthemi及Erwin-iacarotovora等微生物来源的L-天冬酰胺酶已经被广泛应用于治疗多种疾病，如急性淋巴白血病和淋巴肉瘤等。但是，该酶的半衰期短、酶活性低、具有副催化反应等缺陷导致在临床应用时会出现一些较严重的不适应性。食品行业中，利用L-天冬酰胺酶处理食品，常使用“热烫法”，即将食品置于较高温度(如95℃)的水中，并加入L-天冬酰胺酶通过酶反应来降低食品中L-天冬酰胺的含量。由于L-天冬酰胺是致癌物质丙烯酰胺的主要前体物质，因此通过在食品预加工时加入L-天冬酰胺酶，可以有效降低高温加工食品中的丙烯酰胺含量(LWT-FoodScienceandTechnology,2011,44(6):1473-1476；MolecularNutrition&FoodResearch,200本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶活提高的L‑天冬酰胺酶突变体，其特征在于，所述酶突变体是通过将出发氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的L‑天冬酰胺酶的第22位氨基酸进行突变得到的。

【技术特征摘要】
1.一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体，其特征在于，所述酶突变体是通过将出发氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-天冬酰胺酶的第22位氨基酸进行突变得到的。2.根据权利要求1所述的一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体，其特征在于，所述酶突变体是将出发氨基酸序列为SEQIDNO.1的L-天冬酰胺酶的第22位氨基酸由谷氨酸突变成赖氨酸。3.如权利要求1或2所述的一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体，其特征在于，所述L-天冬酰胺酶的来源为嗜热嗜压古菌(PyrococcusyayanosiiCH1)。4.编码权利要求1～3任一所述的一种酶活提高的L-天冬酰胺酶突变体的基因。5.携带权利要求4所述基因的重组表达载体。6.一种表达权利要求1-3任一所述L-天冬酰胺酶突变体的基因工程菌。7.根据权利要求6所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)为宿...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐书琴，张恒维，席毓淋，张显，饶志明，杨套伟，徐美娟，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32