活减毒甲病毒构建体及其方法和用途技术

本文的实施方案涉及不能在蚊子细胞中复制且不能通过蚊媒传播的活减毒甲病毒。其他实施方案涉及产生活减毒甲病毒、其构建体的方法以及这些活减毒甲病毒在免疫原性组合物中的用途。其他实施方案涉及包括活减毒甲病毒的药物组合物和制造这些活减毒甲病毒的方法。其他实施方案涉及这些组合物在用于便携式应用的试剂盒中的用途及其方法，例如抗甲病毒感染的疫苗。

Construction of live attenuated alphavirus and its methods and uses

The implementation scheme of this paper involves live attenuated virus A that cannot be replicated in mosquito cells and transmitted through mosquito vectors. Other implementations relate to the generation of live attenuated alpha viruses, the method of their constructs, and the use of these live attenuated alpha viruses in immunogenic compositions. Other implementations involve pharmaceutical compositions including live attenuated alpha viruses and methods for manufacturing these live attenuated alpha viruses. Other implementations relate to the use of these compositions in kits for portable applications and their methods, such as vaccines against alpha virus infection.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】活减毒甲病毒构建体及其方法和用途优先权根据35USC§119(e)，本PCT申请要求于2016年3月31日提交的临时美国专利申请序列号62/316,264的权益，其全部内容通过引用并入本文。
本文的实施方案涉及不能在蚊子细胞中复制并且不能通过蚊媒(mosquitovector)传播的活减毒甲病毒。其他实施方案涉及产生活减毒甲病毒及其构建体的方法。在其他实施方案中，本文公开的活减毒甲病毒可用于产生抗甲病毒感染的免疫原性组合物。其他实施方案涉及包含活减毒甲病毒的药物组合物和制造这些活减毒病毒的方法。一些实施方案涉及这些组合物在便携式应用的试剂盒中的用途及其方法，例如抗甲病毒感染的免疫原性组合物。本文公开的某些实施方案涉及重组甲病毒构建体。
技术介绍
预防病原性病毒感染的疫苗已有效地用于降低人类疾病的发病率。用于病毒疫苗的最成功的技术之一是用弱化或减毒的病毒毒株(“活减毒病毒”)使动物或人免疫。由于免疫后的复制有限，减毒毒株不会在宿主或其他受试者中引起疾病，因为它已被修饰。然而，这种有限的病毒复制足以表达完整的病毒抗原库，并且可以在接受这种疫苗的受试者中产生对病毒的有效和持久的免疫应答。因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.活减毒重组甲病毒，包含甲病毒核酸，所述甲病毒核酸具有(i)失活的亚基因组启动子，和(ii)内部核糖体进入位点(IRES)插入物，所述内部核糖体进入位点插入物在所述甲病毒非结构蛋白4(nsP4)编码序列的一端和亚基因组RNA编码序列的起始AUG之间；其中至少一种病毒IRES包括I型小核糖核酸病毒IRES或II型小核糖核酸病毒IRES或能够产生有生活力的活减毒甲病毒的其他IRES序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.03.31 US 62/316,2641.活减毒重组甲病毒，包含甲病毒核酸，所述甲病毒核酸具有(i)失活的亚基因组启动子，和(ii)内部核糖体进入位点(IRES)插入物，所述内部核糖体进入位点插入物在所述甲病毒非结构蛋白4(nsP4)编码序列的一端和亚基因组RNA编码序列的起始AUG之间；其中至少一种病毒IRES包括I型小核糖核酸病毒IRES或II型小核糖核酸病毒IRES或能够产生有生活力的活减毒甲病毒的其他IRES序列。2.根据权利要求1所述的减毒甲病毒，其中所述IRES序列选自由以下组成的组：肠道病毒IRES、肠道病毒71IRES(EV71IRES)、鼻病毒IRES、人鼻病毒IRES(HRVIRES)、口疮病毒IRES、口疮病毒：亚型：口蹄疫病毒(FMDVIRES)、泰勒病毒IRES(TMEVIRES)和黄病毒IRES、黄病毒亚型：肝炎病毒(HCVIRES)；并且其中所述甲病毒是减毒的。3.根据权利要求1或2所述的减毒甲病毒，其中所述亚基因组启动子通过使非结构蛋白4(nsP4)编码序列的所述末端和亚基因组RNA编码序列的起始AUG之间的所述亚基因组RNA的5'UTR缺失而失活。4.根据权利要求1或2所述的减毒甲病毒，其中所述亚基因组启动子通过位于所述甲病毒非结构蛋白4羧基末端的聚簇点突变而失活。5.根据权利要求1-4中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述活甲病毒包括以下中的一种或多种：基孔肯雅病毒(CHIK)、阿尼昂尼昂病毒、罗斯河病毒、东部马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、西部马脑炎病毒或冠状病毒科和披膜病毒科中的其他甲病毒、塞姆利基森林病毒复合物，包括：贝巴鲁病毒、马雅罗病毒、亚型：乌纳病毒、阿尼昂尼昂病毒：亚型：伊博-奥拉病毒、罗斯河病毒：亚型：贝巴鲁病毒；亚型：盖塔病毒；亚型：鹭山病毒、塞姆利基森林病毒：亚型：MeTri病毒及其组合。6.根据权利要求4所述的减毒甲病毒，其中所述聚簇点突变是同义点突变，所述同义点突变包括选自由SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5组成的组中的至少一种多核苷酸序列的在7474、7477、7480、7481、7483、7486、7489、7492、7495、7498、7501、7502和7503位上的两个或多个点突变。7.根据权利要求3、4或6中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述亚基因组启动子的突变不改变非结构蛋白4所述羧基末端的氨基酸序列。8.根据权利要求1-7中任一项所述的减毒甲病毒，其还包含所述甲病毒的任一非结构蛋白中的适应性突变，其中可选择所述适应性突变用于增加病毒复制、释放和病毒滴度。9.根据权利要求1-8中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述IRES包括肠道病毒71IRES(EV71IRES)。10.根据权利要求1-8中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述IRES包括人鼻病毒IRES(HRVIRES)。11.根据权利要求1-8中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述IRES包括口蹄疫病毒IRES(FMDVIRES)。12.根据权利要求1-8中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述IRES包括泰勒病毒IRES(TMEVIRES)。13.根据权利要求1-8中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述IRES包括肝炎病毒IRES(HCVIRES)。14.根据权利要求1-13中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述甲病毒是基孔肯雅病毒。15.根据权利要求1-13中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述甲病毒是东部马脑炎病毒。16.根据权利要求1-13中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述甲病毒是委内瑞拉马脑炎病毒。17.根据权利要求1-13中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述甲病毒是西部马脑炎病毒。18.根据权利要求1-17中任一项所述的减毒甲病毒，其中所述甲病毒不能在蚊子和蚊子细胞中复制。19.载体，包含编码权利要求1-18中任一项所述的活减毒甲病毒的核苷酸序列。20.宿主细胞，包含并表达权利要求19所述的载体。21.药物组合物，包含权利要求1-18中任一项所述的减毒重组甲病毒和药学上可接受的载体。22.权利要求21所述的药物组合物用于在受试者中诱导免疫应答，以降低由于暴露于甲病毒而导致的甲病毒感染发作的用途。23.根据权利要求22所述的用途，其中所述受试者是人、牲畜或其他家养动物或宠物。24.制造权利要求1-18中任一项所述的活减毒重组甲病毒的方法，所述活减毒重组甲病毒不能感染蚊子，所述方法包括：在甲病毒非结构蛋白4(n...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉尔·A·利文格德，T·D·鲍威尔，
申请(专利权)人：武田疫苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US