猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备制造技术

一种用于医学领域的猴‑鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，以促红细胞生成素为诱导剂，培养Rh阳性“O”型恒河猴骨髓细胞，以增加定向发育的红系细胞，继之将培养后的恒河猴骨髓细胞与鼠骨髓瘤细胞融合为杂交细胞，再以促红细胞生成素诱导杂交细胞定向分化，以HAT筛选杂交细胞克隆，以Rh抗体筛选能在体外无限扩增的Rh阳性细胞杂交株，经产业化扩增后作为吸附剂，制成吸附器，然后与血液分离器共同构成体外吸附装置，通过吸附母胎血型不合孕妇外周血浆中的致病性Rh抗体，创建不清除血浆及其有益成份的无需血浆置换液的廉价安全的母胎血型不合溶血病的治疗新方法。

Preparation of Monkey-mouse Cell Fusion Maternal-fetal Blood Group Incompatibility Therapeutic Hybrid Strain

The preparation of a hybrid strain for the treatment of incompatible maternal-fetal blood group of monkey-mouse cell fusion in medical field is characterized in that rhesus monkey bone marrow cells of Rh-positive \O\ type are cultured with erythropoietin as inducer to increase the directional development of erythrocyte, and then the cultured rhesus monkey bone marrow cells and mouse myeloma cells are fused into hybrid cells, and then erythropoiesis is promoted. Hybrid cells were induced to differentiate directionally. Hybrid cell clones were screened by HAT. Rh antibody was used to screen Rh-positive cell hybrids which could infinitely expand in vitro. After industrialized amplification, they were used as adsorbents to make adsorbents. Then, together with blood separators, an in vitro adsorbent device was constructed. By adsorbing pathogenic Rh antibodies in maternal and fetal blood group incompatible pregnant women's peripheral plasma, the plasma could not be A new cheap and safe method for the treatment of maternal-fetal blood group incompatible hemolytic disease without plasma exchange solution is proposed.

【技术实现步骤摘要】
猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备
本专利技术涉及医学领域母胎血型不合治疗杂交株的制备，主要用于母胎Rh血型不合孕妇血浆中抗胎儿红细胞抗体的吸附清除。
技术介绍
人类有ABO、Rh、MN、Lew和Kell等26种血型，其中最重要的是ABO血型和Rh血型，ABO血型根据红细胞携带的A抗原、B抗原、AB抗原或无A和B抗原分为A型、B型、AB型和O型；Rh血型根据红细胞是否携带D抗原分为Rh阳性和Rh阴性，Rh阳性的红细胞上含有D抗原，能与抗-D血清发生免疫凝集。在我国汉族人群中Rh阴性的频率约为0.4％，而西北地区少数民族以及某些国家Rh阴性的频率高达10％以上，所以这些地区和国家Rh血型不合溶血病的发生率较我国汉族人群高。血型抗原遗传自父母双亲，胎儿红细胞可以携带来自于父亲的血型抗原，表现为不同于母体的血型，此时当胎儿的红细胞进入母体的血液循环时，可诱发母体产生抗体，进而通过胎盘进入胎儿体内，结合并破坏胎儿红细胞，导致胎儿和/或新生儿的溶血病。其中母胎ABO血型不合的发生率较高，但胎儿溶血病的发生率较低，即使发生亦较轻，极少引起核黄疸和水肿，妊娠期无需特殊处理。而Rh血型不合由本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猴‑鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，在骨髓细胞融合前的细胞增量培养及在增量培养后的骨髓细胞与鼠骨髓瘤细胞的融合、杂交细胞筛选、克隆化培养和传代扩增中，以促红细胞生成素刺激红系的定向分裂、Rh抗原的分化成熟，制成能在体外无限扩增的Rh阳性“O”型恒河猴红细胞杂交株，用于制备吸附器，进而与血浆分离器构成母胎血型不合致病抗体吸附治疗装置。

【技术特征摘要】
1.一种猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，在骨髓细胞融合前的细胞增量培养及在增量培养后的骨髓细胞与鼠骨髓瘤细胞的融合、杂交细胞筛选、克隆化培养和传代扩增中，以促红细胞生成素刺激红系的定向分裂、Rh抗原的分化成熟，制成能在体外无限扩增的Rh阳性“O”型恒河猴红细胞杂交株，用于制备吸附器，进而与血浆分离器构成母胎血型不合致病抗体吸附治疗装置。2.根据权利要求1所述的猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，在骨髓细胞融合前的细胞增量培养中，将促红细胞生成素按2.5～3.5IU/mL的用量配入常规骨髓细胞培养基。3.根据权利要求1所述的猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，在细胞融合、杂交细胞筛选、克隆化培养和传代扩增中，将促红细胞生成素按1.5～2.5IU/mL的用量配入15％胎牛血清的DMEM培养基。4.根据权利要求1所述的猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，所述Rh阳性“O”型人红系杂交株以0.04mol/LNa2HPO4和0.04mol/LNaH2PO4配制的渗透浓度分别为25mmol/L和35mmol/L的PB裂解液交替洗涤其含有的血红蛋白。5.根据权利要求1所述的猴-鼠细胞融合母胎血型不合治疗杂交株的制备，其特征在于，所述吸附器内部灌注以含3.5％甘露醇的细胞保存液配成的80％Rh阳性“O”型恒河猴红细胞杂交株浓度的细...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁炳焕，李兰娟，苏岚，张龙，黄欢佳，
申请(专利权)人：翁炳焕，
类型：发明
国别省市：浙江,33