一种重楼的组织培养方法技术

本发明专利技术属于医药生物或药物种植技术领域，具体涉及一种重楼的组织培养方法；该方法以不同培养基为基础，将芽接种到培养基Ⅰ后，获得新芽，将新芽接种到培养基Ⅱ中，得到幼苗，将幼苗接种到壮苗生根培养基中，得到可栽培重楼苗；本发明专利技术的组织培养方法采用新鲜的三七汁、茯苓汁以及研磨过的苔藓，用于培养基中，研究表明，本发明专利技术的重楼组织培养方法获得重楼幼苗生长周期短，进一步重楼幼苗中不仅含有有效成分薯蓣皂苷，还含有其他有效成分。

A Tissue Culture Method of Paris polyphylla

The invention belongs to the technical field of medical biology or drug planting, and specifically relates to a tissue culture method of Paris polyphylla. The method is based on different culture media, after inoculating buds into culture medium I, new buds are obtained, new buds are inoculated into culture medium II, seedlings are obtained, seedlings are inoculated into strong seedling rooting culture medium, and plantable Paris polyphylla seedlings are obtained by the tissue culture method of the invention. The fresh Panax notoginseng juice, Poria cocos juice and Ground Moss are used in the culture medium. The research shows that the method for tissue culture of Paris polyphylla has short growth period, and further Paris polyphylla seedlings contain not only the active ingredient diosgenin, but also other active ingredients.

【技术实现步骤摘要】
一种重楼的组织培养方法
本专利技术属于医药生物或药物种植
，具体涉及一种重楼的组织培养方法。
技术介绍
中药重楼为百合科植物云南重楼(滇重楼)ParispolyphyllaSmithvar.yunnanensis(Franch)Hand.-Mazz.或七叶一枝花(华重楼)ParispolyphyllaSmithvar.chinensis(Franch)Hara的干燥根茎。甾体皂苷是重楼的主要活性物质，具有抗肿瘤、消炎、止血、抗氧化、促进子宫收缩和保护血管内皮细胞等药理作用，临床上内服用于止血、止痛、抗肿瘤，外用抗感染、抗炎镇痛等。由于重楼具有多种药理作用且药效好，制药工业对重楼的需求量逐年递增，以致供不应求。所以人工栽培重楼已势在必行。然而重楼植物种子自然繁殖率低，种胚发育不完全，胚乳坚硬和胚轴后熟等具有明显“双重休眠”的特性，播种后通常需要经历两个冬天才能萌发，其成苗生长时间长，是典型的“二年生种子”。重楼植物的个体发育过程十分缓慢，由种子萌发到开花结实，至少需4-5年，其中苗期(幼年期)可以持续4年以上。因此，采用种子繁殖历时周期长并且繁殖率低，并不能大规模生产来满足人们对重楼药材的需求。植物组织培养技术是一个可以使重楼快速繁育的有效途径之一。因此，研究新的重楼组织培养技术，具有重要意义。
技术实现思路
基于上述原因，申请人经过多次创造性研究，得到一种的重楼组织培养技术，该技术以不同培养基为基础，将芽接种到培养基Ⅰ后，获得新芽，将新芽接种到培养基Ⅱ中，得到幼苗，将幼苗接种到壮苗生根培养基中，得到可栽培重楼苗；本专利技术的组织培养方法采用新鲜的三七汁、茯苓汁以及研磨过的苔藓，用于培养基中，研究表明，本专利技术的重楼组织培养方法获得重楼幼苗生长周期短，进一步重楼幼苗中不仅含有有效成分薯蓣皂苷，还含有其他有效成分。本专利技术通过下述技术方案实现的。一种重楼组织培养方法，该培养方法为：(1)取重楼植株顶芽，去离子水冲洗，灭菌，注射用水冲洗；(2)将芽接种到培养基Ⅰ中，在25-30℃，光照强度为2000-2500Lx，光照12h/d，培养70-90天，得到抽生新枝呈丛芽状的新芽；(3)将新芽接种到培养基Ⅱ中，培养50-60天，培养温度20-30℃，光强度2500-4000Lx，光照10-14小时/天，得到幼苗；(4)将幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照加强至2500-4000Lx，光照10-14小时/天，培养70-90天，得到可栽培重楼苗。其中培养基Ⅰ为：1/2MS，6-BA5-10mg/L，NAA5-10mg/L，研磨过的苔藓100-200g/L，茯苓汁1-3g/L，蔗糖10-20g/L的琼脂培养基上；pH为4-6。其中培养基Ⅱ为：1/2MS，6-BA5-10mg/L，NAA5-10mg/L，三七汁1-2g/L，研磨过的苔藓100-200g/L，活性炭5-10g/L，蔗糖40-50g/L，琼脂20-30g/L，pH4-6。其中壮苗生根培养基为：1/2MS，NAA5-10mg/L，研磨过的泥炭藓150-200g/L，茯苓汁4-6g/L，蔗糖40-50g/L，活性炭5-10g/L，琼脂20-30g/L。本专利技术所述的“三七汁”为：新鲜三七经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的三七汁。本专利技术所述的“茯苓汁”为：新鲜茯苓经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的茯苓汁。本专利技术所述的“研磨过的苔藓”为：取新鲜苔藓，用去离子水洗净，采用研磨机研磨得到。本专利技术所述的组织培养方法具有在较短的时间内获得可供栽种的重楼苗，整个培养方法在240天内完成，有效的缩短啦生产周期。具体实施例以下以具体实施例来说明本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不限于此。本说明书实施例所述的内容仅仅是对专利技术构思的实现形式的列举，本专利技术的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本专利技术的保护范围也及于本领域技术人员根据本专利技术构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本专利技术的实施方案进行了描述，但本专利技术并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本专利技术权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本专利技术保护之列。本专利技术下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本专利技术所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。制备实施例实施例1一种重楼组织培养方法，该培养方法为：(1)取重楼植株顶芽，去离子水冲洗，灭菌，注射用水冲洗；(2)将芽接种到培养基Ⅰ中，在25℃，光照强度为2000Lx，光照12h/d，培养90天，得到抽生新枝呈丛芽状的新芽；(3)将新芽接种到培养基Ⅱ中，培养60天，培养温度20℃，光强度2500Lx，光照14小时/天，得到幼苗；(4)将幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照加强至2500Lx，光照14小时/天，培养90天，得到可栽培重楼苗。其中培养基Ⅰ为：1/2MS，6-BA5mg/L，NAA5mg/L，研磨过的苔藓100g/L，茯苓汁1g/L，蔗糖10g/L的琼脂培养基上；pH为4。其中培养基Ⅱ为：1/2MS，6-BA5mg/L，NAA5mg/L，三七汁1g/L，研磨过的苔藓100g/L，活性炭5g/L，蔗糖40g/L，琼脂20g/L，pH4。其中壮苗生根培养基为：1/2MS，NAA5mg/L，研磨过的泥炭藓150g/L，茯苓汁4g/L，蔗糖40g/L，活性炭5g/L，琼脂20g/L。实施例2一种重楼组织培养方法，该培养方法为：(1)取重楼植株顶芽，去离子水冲洗，灭菌，注射用水冲洗；(2)将芽接种到培养基Ⅰ中，在30℃，光照强度为2500Lx，光照12h/d，培养70天，得到抽生新枝呈丛芽状的新芽；(3)将新芽接种到培养基Ⅱ中，培养50天，培养温度30℃，光强度4000Lx，光照14小时/天，得到幼苗；(4)将幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照加强至4000Lx，光照14小时/天，培养70天，得到可栽培重楼苗。其中培养基Ⅰ为：1/2MS，6-BA10mg/L，NAA10mg/L，研磨过的苔藓200g/L，茯苓汁3g/L，蔗糖20g/L的琼脂培养基上；pH为6。其中培养基Ⅱ为：1/2MS，6-BA10mg/L，NAA10mg/L，三七汁2g/L，研磨过的苔藓200g/L，活性炭10g/L，蔗糖50g/L，琼脂230g/L，pH6。其中壮苗生根培养基为：1/2MS，NAA10mg/L，研磨过的泥炭藓200g/L，茯苓汁6g/L，蔗糖50g/L，活性炭10g/L，琼脂30g/L。实施例3一种重楼组织培养方法，该培养方法为：(1)取重楼植株顶芽，去离子水冲洗，灭菌，注射用水冲洗；(2)将芽接种到培养基Ⅰ中，在27℃，光照强度为2200Lx，光照12h/d，培养80天，得到抽生新枝呈丛芽状的新芽；(3)将新芽接种到培养基Ⅱ中，培养55天，培养温度25℃，光强度3500Lx，光照12小时/天，得到幼苗；(4)将幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照加强至3500Lx，光照12小时/天，培养80天，得到可栽培重楼苗。其中培养基Ⅰ为：1/2MS，6-BA8mg/L，NAA8mg/L，研磨过的苔藓150g/L，茯苓汁2g/L，蔗糖15g/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重楼组织培养方法，其特征在于：该培养方法为：(1)取重楼植株顶芽，去离子水冲洗，灭菌，注射用水冲洗；(2)将芽接种到培养基Ⅰ中，在25‑30℃，光照强度为2000‑2500Lx，光照12h/d，培养70‑90天，得到抽生新枝呈丛芽状的新芽；(3)将新芽接种到培养基Ⅱ中，培养50‑60天，培养温度20‑30℃，光强度2500‑4000Lx，光照10‑14小时/天，得到幼苗；(4)将幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照加强至2500‑4000Lx，光照10‑14小时/天，培养70‑90天，得到可栽培重楼苗。

【技术特征摘要】
1.一种重楼组织培养方法，其特征在于：该培养方法为：(1)取重楼植株顶芽，去离子水冲洗，灭菌，注射用水冲洗；(2)将芽接种到培养基Ⅰ中，在25-30℃，光照强度为2000-2500Lx，光照12h/d，培养70-90天，得到抽生新枝呈丛芽状的新芽；(3)将新芽接种到培养基Ⅱ中，培养50-60天，培养温度20-30℃，光强度2500-4000Lx，光照10-14小时/天，得到幼苗；(4)将幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照加强至2500-4000Lx，光照10-14小时/天，培养70-90天，得到可栽培重楼苗。2.根据权利要求1所述的一种重楼组织培养方法，其中培养基Ⅰ为：1/2MS，6-BA5-10mg/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡才忠，曹德华，常群，何国忠，洪嘉洋，
申请(专利权)人：江西兼济堂农业开发有限公司，上海兼济堂生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36