本发明专利技术涉及食品药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非化学品的定性筛选和确证方法。该方法的原理为：将供试品去除蛋白质或者脂肪后用乙腈提取和稀释，C18色谱柱分离，根据高效液相色谱DAD检测器定性检测，质谱一级及二级质谱图确认。该方法的实验结果均满足要求，表明本法可专属、灵敏、快速地初筛和确证补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非。
【技术实现步骤摘要】
检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法
本专利技术涉及食品（含保健食品）、药品检测方法，具体是用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非化学品的筛查方法和确证方法。
技术介绍
去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非为三种卡波地那非类似物，其化学结构为：1、去甲基卡波地那非（结构式见下），英文名为：Desmethylcarbodenafil，分子式为C23H30N6O3，分子量为438.2。2、二硫去甲基卡波地那非（结构式见下），英文名为：Dithio-desmethylcarbodenafil，分子式为C23H30N6OS2，分子量为470。3、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非（结构式见下），英文名为：3,5-dimethylpiperazinyldithio-desmethylcarbodenafil，分子式为C25H34ON6S2，分子量为498。目前，在国内市场销售产品中发现有非法添加上述物质，但还没有此物质的筛查、定量和确证方法，且此化合物国内外未批准药用，未见其毒理学研究数据，毒性危害未知。为了保障人民群众的饮食用药安全，经过多次试验，并考虑一测多评，一种条件下尽可能筛选多个类似物，在前期方法学验证的基础上，建立去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非3种物质的快速检验方法，供监督应用。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种针对补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非补充检验方法，该方法的原理为：简单基质样品乙腈超声处理，复杂基质样品去除蛋白和脂肪后用乙腈提取和稀释，C18色谱柱分离，根据高效液相色谱DAD检测器定性定量检测，液质联用仪一级及二级质谱图确认。该方法中高效液相色谱法用于定性筛查；经定性筛查结果为阳性的样品，经液-质联用方法确证后可出具检验报告。本专利技术是采用如下技术方案实现的：一种检测非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法，包括如下步骤：（1）、高效液相色谱法1.1、色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱（规格为250mm×4.6mm，内径5μm）；二极管阵列（DAD）检测器，检测波长为230nm，扫描波长：200~400nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；以0.1%甲酸溶液（取甲酸1mL用水稀释至1000mL）为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序梯度洗脱。理论塔板数以去甲基卡波地那非峰计算，应不低于2000。流动相梯度洗脱表1.2、对照品溶液的制备精密称取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品10mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液，临用时，取1mL用甲醇稀释定容至10mL，即得（置于8℃以下冰箱保存）。1.3、供试品溶液的制备简单基质样品（低蛋白低脂肪）：若供试品为固体制剂，研细，精密称取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用；若供试品为液体制剂，摇匀，精密量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振摇3分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。复杂基质样品：蛋白质含量高的样品（蛋白质含量≥3%）：精密称取一次服用量固体样品（吸取2~5mL液体样品），置于100mL三角瓶中，加25mL水，超声处理15分钟，放至室温。边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。（乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL；亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100mL）。脂肪含量高的样品（脂肪含量≥2%）：精密称取一次服用量固体样品，先用20mL乙醚或石油醚淋洗3次，一边淋洗一边振摇，去除醚层，固体部分精密加乙腈50mL，称重，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈补重，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用；液体样品精密吸取5~10mL，加入20mL乙醚或石油醚，振摇，静置分层，水层到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过备用。1.4、测定法分别取以上制备好的供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图及DAD光谱图。1.5、结果判断供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间及DAD光谱一致的色谱峰。若检出相应的色谱峰，则采用液相色谱-质谱联用法确证。（2）、高效液相色谱-质谱联用法2.1、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（规格为150mm×2.1mm，内径3μm），流动相同上；流速：0.2mL/min，柱温35℃。2.2、质谱条件电喷雾离子化源（ESI），ESI+扫描，雾化器流速：3L/min；加热器温度：400℃；干燥气流速：10L/min；加热气流速：10L/min；接口温度：300℃；喷雾电压：4.5kv。扫描方式：一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：50~600m/z。2.3、对照品溶液的制备取上述储备液，临用时，取适量储备液用50%乙腈稀成浓度为10μg/mL的溶液，即得（置于8℃以下冰箱保存）。2.4、供试品溶液的制备取高效液相色谱法检查呈阳性的供试品溶液作为检查用的供试品溶液，用50%乙腈稀释为与对照品浓度相近的溶液。同时制备空白溶液。2.5、测定法分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液质联用仪，记录总离子流图及一、二级质谱图。2.6、结果判断供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间、一级质谱图及二级质谱图均一致的色谱峰。若检出相应的色谱峰，则确定非法添加了相应的化学物质。本专利技术建立了一种补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的检验方法。使用基层基本普及的高效液相色谱仪快速定性筛查和定量，液质联用仪准确确认，既能适用于基层大批量筛选，又能避免假阳性结果。经验证，本方法灵敏度高、选择性好、确证性强、操作简便快捷，可用于补肾壮阳类中成药和抗疲劳类保健食品，或者非法宣称补肾壮阳和抗疲劳类食品中非法添加去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的定性筛查和准确确认。本专利技术设计合理，具体很好的实际应用及推广价值。附图说明图1表示实施例中三种对照品色谱图。图2表示实施例中去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图。图3表示实施例中二硫去甲基卡波地那非对照品色谱峰的光谱扫描图。图4表示实施例中二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）、高效液相色谱法1.1、色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；二极管阵列检测器，检测波长为230nm，扫描波长：200~400nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；以0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序梯度洗脱，其中，理论塔板数以去甲基卡波地那非峰计算，应不低于2000；流动相梯度洗脱：时间段0~5min，流动相A 80%，流动相B 20%；时间段5.1~15min，流动相A 80~60%，流动相B 20~40%；时间段15.1~26min，流动相A 60~25%，流动相B 40~75%；时间段26.1~28min，流动相A 25%，流动相B 75%；时间段28.1~29min，流动相A 25~80%，流动相B 75~20%；时间段29.1~39min，流动相A 80%，流动相B 20%；1.2、对照品溶液的制备称取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品10mg，置25mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液，临用时，取1mL用甲醇稀释定容至10mL，即得；1.3、供试品溶液的制备Ⅰ、低蛋白低脂肪样品：若供试品为固体制剂，研细，称取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；若供试品为液体制剂，摇匀，量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振摇3分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜滤过备用；Ⅱ、蛋白质含量高的样品：固体样品称取一次服用量，如果是液体样品吸取5mL，置于容器中，加25mL水，超声处理15分钟，放至室温，边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；Ⅲ、脂肪含量高的样品：固体样品称取一次服用量，先用20mL乙醚或石油醚淋洗3次，一边淋洗一边振摇，去除醚层，固体部分精密加乙腈50mL，称重，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈补重，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；液体样品吸取10mL，加入20mL乙醚或石油醚，振摇，静置分层，水层收集到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；1.4、测定法分别取供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图及DAD光谱图；1.5、结果判断供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间及DAD光谱一致的色谱峰，若检出相应的色谱峰，则采用高效液相色谱‑质谱联用法确证；（2）、高效液相色谱‑质谱联用法2.1、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相同上；流速：0.2mL/min，柱温35℃；2.2、质谱条件电喷雾离子化源ESI，ESI+扫描，雾化器流速：3L/min；加热器温度：400℃；干燥气流速：10L/min；加热气流速：10L/min；接口温度：300℃；喷雾电压：4.5kv；扫描方式：一级质谱全扫描、二级质谱全扫描，扫描范围：50~600m/z；2.3、对照品溶液的制备取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品，置量瓶中，加乙腈稀释定容至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液；临用时，取适量储备液用50%乙腈稀成浓度为10μg/mL的溶液，即得；2.4、供试品溶液的制备取高效液相色谱法检查呈阳性的供试品溶液作为检查用的供试品溶液，用50%乙腈稀释为与对照品浓度相近的溶液；同时制备空白溶液；2.5、测定法分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液，注入液质联用仪，记录液相色谱图及一、二级质谱图；2.6、结果判断供试品色谱图中，应不得检出与对照品色谱保留时间、一级质谱图及二级质谱图一致的色谱峰；若检出相应的色谱峰，则确定非法添加了去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非或二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非。...
【技术特征摘要】
1.一种检测去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）、高效液相色谱法1.1、色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱；二极管阵列检测器，检测波长为230nm，扫描波长：200~400nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；以0.1%甲酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表程序梯度洗脱，其中，理论塔板数以去甲基卡波地那非峰计算，应不低于2000；流动相梯度洗脱：时间段0~5min，流动相A80%，流动相B20%；时间段5.1~15min，流动相A80~60%，流动相B20~40%；时间段15.1~26min，流动相A60~25%，流动相B40~75%；时间段26.1~28min，流动相A25%，流动相B75%；时间段28.1~29min，流动相A25~80%，流动相B75~20%；时间段29.1~39min，流动相A80%，流动相B20%；1.2、对照品溶液的制备称取去甲基卡波地那非、二硫去甲基卡波地那非、二甲基哌嗪二硫去甲基卡波地那非对照品10mg，置25mL量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.4~0.5mg的储备液，临用时，取1mL用甲醇稀释定容至10mL，即得；1.3、供试品溶液的制备Ⅰ、低蛋白低脂肪样品：若供试品为固体制剂，研细，称取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈40mL，超声处理15分钟，放至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过备用；若供试品为液体制剂，摇匀，量取一次服用量，置50mL容量瓶中，加乙腈至40mL，振摇3分钟，加乙腈稀释至刻度，摇匀后用微孔滤膜滤过备用；Ⅱ、蛋白质含量高的样品：固体样品称取一次服用量，如果是液体样品吸取5mL，置于容器中，加25mL水，超声处理15分钟，放至室温，边摇边慢慢加入5mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，静置30min，用干燥滤纸过滤到50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，用微孔滤...
【专利技术属性】
技术研发人员：董培智，申国华，梁卜文，郭景文，王珂，李琛，
申请(专利权)人：山西省食品药品检验所山西省药品包装材料监测中心，
类型：发明
国别省市：山西,14
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