一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法技术

本发明专利技术涉及食品领域，公开了一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法。样品经提取液提取，沉淀剂去除蛋白后定容，采用高效液相色谱法分析，所述HPLC色谱条件为色谱柱采用C18柱，流动相为醋酸铵缓冲盐、甲醇和乙腈，等度洗脱；柱温：30~35℃；流速：1.0ml/min；进样量10uL。本发明专利技术的检测方法通过对样品进行简单处理即可检测，目标峰之间互不干扰，且乳饮料中的其他成分不会对目标峰造成干扰。该方法方便快捷，回收率高，检出限低，填补了国标无乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺检测方法的空白，且可实现苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的同时检测。

【技术实现步骤摘要】
一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法
本专利技术涉及食品领域，尤其涉及一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法。
技术介绍
苯甲酸、山梨酸钾是允许使用的食品防腐剂，安赛蜜和糖精钠是食品中的主要甜味剂，这四类添加剂被广泛用于食品行业中，在一定限量范围内食用对人体没有危害，但过量添加会对人体健康带来一定危害。GB2760-2014规定苯甲酸在乳饮料中的限量为1.0g/kg，山梨酸为0.5g/kg，安赛蜜为0.3g/kg，糖精钠在乳饮料中不得添加。近几年国家食品药品局抽检食品中添加剂使用情况，经常有发现过量添加和超范围使用的情况。烟酰胺俗名VB3，又名尼克酰胺，化学名为3-吡啶甲酰胺，为白色针状结晶或粉末。烟酰胺属于B族维生素，被命名为抗糙皮病维生素，主要存在于肾、肝、肌肉、乳汁、蛋黄、花生和水果中。烟酰胺常作为营养强化剂添加在乳饮料中，在乳饮料中的添加量有一定要求。含乳饮料是指以乳或乳制品为原料，经发酵或不发酵，加入水以及白砂糖和(或)甜味剂、酸味剂、果汁、茶、咖啡、植物提取物等的一种或几种调制而成的饮料。现行国家标准《GB5009.28-2016食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》、《GB5009.89-2016食品安全国家标准食品中烟酸和烟酰胺的测定》和《GB/T5009.140-2003饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》分别规定了食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、烟酰胺和饮料中安赛蜜的检测方法，但无专门针对乳饮料的检测方法或前处理方法不适用于乳饮料。针对乳饮料这类高蛋白且基质复杂的样品，国标前处理方法并不适用，也鲜有相关方法报道。鉴于国家对饮料中添加剂使用量要求和食品标签强制性标准的施行，为了缩短检测周期，提高工作效率，需要建立一种乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺同时检测的方法。中国专利申请公开号为CN106706800A的专利，公开了一种苯甲酸、山梨酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾的快速检测方法。该方法利用高效液相色谱进行检测，流动相为甲醇+0.02mol/L乙酸铵＝(10～15)+(85～90)，同时测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾的含量。但是，利用该专利提供的方法测定乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量时，色谱图中烟酰胺和苯甲酸的峰存在很大部分的重叠，无法准确的确定烟酰胺和苯甲酸的峰面积。要测定乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量需要多次测试。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法。针对乳饮料这种复杂基质的样品，该方法填补了国标无专门针对乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺前处理检测方法的情况，同时样品处理简单快速，可实现多种添加剂和营养强化剂的同时检测，大幅度缩短检测时间，提高了检测效率。本专利技术的具体技术方案为：一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，包括以下步骤：(1)样品前处理：向乳饮料中加入氢氧化钠溶液，超声；用硫酸溶液调节pH，然后，加入沉淀剂，摇匀，静置；用甲醇定容，离心，过滤，得滤液；(2)检测分析：用液相色谱对滤液进行检测分析，得到滤液的液相色谱图，将检测到的峰面积与标准曲线比较，计算得到滤液中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量，换算得到乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量。现有技术中，利用液相色谱检测食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量时，一般需采用多次前处理和多次液相色谱检测才能获得多种添加剂和营养强化剂的含量。乳饮料中除含高蛋白和脂肪外，还有稳定剂和添加剂，基质干扰较难去除。采用国标的方法处理后，样品仍然呈乳白色浑浊状态，无法上机检测。虽然，目前也有方法能同时获得多种添加剂的含量，然而利用现有技术的方法对乳饮料中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺进行测试时，存在前处理后依然无法满足上机要求、色谱图中存在杂峰及目标峰之间存在干扰等问题，无法同时准确的检测出乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量。中国专利申请公开号为CN106706800A的专利公开的方法虽然能同时测得食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠和安赛蜜的含量，但其不涉及干扰性极强的烟酰胺的含量的测定，对本专利技术的参照性不强。乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的同时测定需要选择合适的前处理方法，以达到以下两个效果：1)样品基质完全去除，处理后样品澄清透明，且上机检测无严重干扰峰。2)选用的前处理试剂能有效提取样品中的被测物，保证回收率、重现性的指标能符合标准要求。专利技术人经过大量的实验发现，利用氢氧化钠溶液使蛋白质变性，由于乳饮料中含有蛋白保护剂，单纯使用氢氧化钠溶液无法完全沉淀蛋白质，使用乙酸锌-亚铁氰化钾沉淀能够有效除去乳饮料中的蛋白质和脂肪。利用甲醇定容，能够去除乳饮料中剩余的蛋白质和脂肪。超声作用能够保证被测物的充分提取。利用本专利技术的前处理方法能够充分沉淀乳饮料中被保护的蛋白质、脂肪等物质，而被测物保留在上清液中，保证被测物质的提取效率符合要求，且得到的上清液澄清，色谱干扰小，从而较大程度提高了检测结果的准确性、精密度及稳定性。利用该前处理方法处理乳饮料，乳饮料中的复杂基质去除干净，5种目标物质提取效率符合要求，目标峰的回收率和重现性较好。另外，国标中测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量需要用3个方法检测，所用的色谱条件均不同，要达到以上5类物质的同时检测，需优化色谱条件，达到以下效果：1)5个目标峰的基线分离，峰形对称，符合要求；2)样品中目标峰无干扰，能做到准确定量。利用现有技术中的流动相进行液相色谱检测，苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的峰之间存在干扰，同时，进样中的其他添加剂也会对目标峰存在一定程度的干扰，使得目标峰存在拖尾或难以分开，进而造成无法同时获得苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的目标峰或测试结果存在较大误差。本专利技术人经过大量的实验发现利用醋酸铵缓冲盐、甲醇和乙腈的混合溶液作为流动相时，能够同时测得乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量。利用本专利技术的流动相，目标峰苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺之间互不干扰，乳饮料中的其他组分也不会对目标峰产生干扰，目标峰无拖尾或峰宽异常的现象出现。作为优选，步骤(1)中，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1～0.3mol/L，乳饮料与氢氧化钠溶液的质量体积比为1g:1～1.25mL。氢氧化钠使乳饮料中的蛋白质变性。所述硫酸溶液浓度为0.3～0.6mol/L，用硫酸调节乳饮料的pH为7.0～9.0。作为优选，步骤(1)中，所述沉淀剂为乙酸锌-亚铁氰化钾，乙酸锌溶液的浓度为200～250g/L，乙酸锌溶液与乳饮品的体积质量比为1～3mL/10g；亚铁氰化钾溶液的浓度为100～150g/L，亚铁氰化钾溶液与乳饮品的体积质量比为1～3mL/10g。乙酸锌和亚铁氰化钾生成的氰亚铁酸锌沉淀能够除去乳饮料中剩余的蛋白质。作为优选，亚铁氰化钾溶液的浓度为100～110g/L。当乙酸锌溶液的浓度为200～250g/L，乙酸锌溶液与乳饮品的体积质量比为1～3mL/10g；亚铁氰化钾溶液的浓度为100～110g/L，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）样品前处理：向乳饮料中加入氢氧化钠溶液，超声；用硫酸溶液调节pH，然后，加入沉淀剂，摇匀，静置；用甲醇定容，离心，过滤，得滤液；（2）检测分析：用液相色谱对滤液进行检测分析，得到滤液的液相色谱图，将检测到的峰面积与标准曲线比较，计算得到滤液中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量，换算得到乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量。

【技术特征摘要】
1.一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）样品前处理：向乳饮料中加入氢氧化钠溶液，超声；用硫酸溶液调节pH，然后，加入沉淀剂，摇匀，静置；用甲醇定容，离心，过滤，得滤液；（2）检测分析：用液相色谱对滤液进行检测分析，得到滤液的液相色谱图，将检测到的峰面积与标准曲线比较，计算得到滤液中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量，换算得到乳饮料中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和烟酰胺的含量。2.根据权利要求1所述的一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1~0.3mol/L，乳饮料与氢氧化钠溶液的质量体积比为1g:1~1.25mL；所述硫酸溶液浓度为0.3~0.6mol/L，用硫酸调节乳饮料的pH为7.0~9.0。3.根据权利要求1所述的一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述沉淀剂为乙酸锌-亚铁氰化钾，乙酸锌溶液的浓度为200~250g/L，乙酸锌溶液与乳饮品的体积质量比为1~3mL/10g；亚铁氰化钾溶液的浓度为100~150g/L，亚铁氰化钾溶液与乳饮品的体积质量比为1~3mL/10g。4.根据权利要求3所述的一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为100~110g/L。5.根据权利要求1所述的一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述超声时间为15~20min；离心转速为8000~10000r/min，离心10~20min；离心后的上清液用0.45μm的滤膜过滤。6.根据权利要求1所述的一种同时测乳饮料中多种食品添加剂和营养强化剂的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述液相色谱为高效液相色谱，液相色谱仪采用Waters2695，DAD检测器，色谱柱采用C18柱，柱温为30~35℃；流动相为浓度15~25mmol/L的醋酸铵缓冲盐、甲醇和乙腈以体积比为92~...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪芳，毛勇，付罗岭，赵允，吴平，戴绚丽，
申请(专利权)人：杭州娃哈哈集团有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33