基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法。所述方法包括以下步骤：S1、葛根芩连汤化学成分色谱数据库的构建；S2、药效学评价数据库的构建；S3、基于SVR方法建立谱‑效模型。该方法操作简单，可以快速、准确地知晓葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础，为后续葛根芩连汤的二次开发奠定了坚实的基础。

【技术实现步骤摘要】
基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法
本专利技术属于医药
，具体涉及一种基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法。
技术介绍
葛根芩连汤由葛根、黄芩、黄连和甘草配伍组成，是经典古方之一，出自于东汉末年张仲景所著《伤寒论》。葛根甘、辛而凉，其性清轻升发，入脾胃经，既能解表退热，又能升发脾胃清阳之气而治下利，为君药；黄芩和黄连，清热燥湿、直清里热，犹且厚胃肠，坚阴止利，为臣药；甘草甘缓和中，协调诸药，为使药。四药合用，外疏内清，表里同治。其中，葛根为豆科植物野葛的干燥根，主要生物活性成分为黄酮类和皂苷类化合物；黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根，主要生物活性成分为黄酮类化合物；黄连为毛茛科植物黄连、三角叶黄连或云连的干燥根茎，主要生物活性成分为生物碱类化合物；甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根及根茎，主要生物活性成分为皂苷类和黄酮类化合物。胰岛素抵抗(InsulinResistance,IR)是2型糖尿病的主要发病机制，也是肥胖症、高血压、动脉粥样硬化等代谢性疾病的发病基础，近年研究资料显示，这些与胰岛素抵抗相关的疾病发病率呈逐年递增的趋势。临床研究表明，葛根芩连汤(GegenQinlianDecoction,GQD)能够改善胰岛素抵抗，对糖尿病具有良好的治疗作用。挖掘和阐释葛根芩连汤活性成分是研发安全有效、质量可控的现代中药的基础，是揭示中药科学内涵、指导临床合理用药的前提。但是，由于中药复方体系的多组分、多途径、多靶点、多效应整体调节的作用特点，使得研究中药复方物质基础、生物效应及其相互关系相当复杂，极大的限制了中药药效物质基础的确认及评价。现有技术鲜有对葛根芩连汤治疗胰岛素抵抗的物质基础方面的研究，因此迫切需要一种能够简单、快速、准确地获得葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种基于SVR的，能够简单、快速、准确地知晓葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法，包括以下步骤：S1、葛根芩连汤化学成分色谱数据库的构建：制备葛根芩连汤，上大孔树脂柱，用不同浓度的乙醇进行洗脱，得5个洗脱部位，采用均匀设计试验法制得化学组成和含量具有一定差异的11个葛根芩连汤供试品；采用高效液相色谱法，以0.15％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，获得上述供试品的指纹图谱，共筛选出169个特征峰并根据对照品积分计算相对峰面积；S2、药效学评价数据库的构建：建立胰岛素抵抗模型、设置空白对照组、阳性对照组、模型组和葛根芩连汤供试品群组，给予每组相应的试剂，试验结束后采集血清的NMR-1H谱图，对血清的NMR-1H谱图进行相位和基线校正，用AMIX软件对所有的血清NMR-1H谱图进行积分，并根据积分进行归一化处理，用于模式识别分析，筛选与药效关联性好、灵敏度高及个体差异小的内源性代谢物作为药效评价指标，构建药效评价指标数据库；S3、基于SVR方法建立谱-效模型：采用SVR方法，以步骤S1得到的169个特征峰的相对峰面积作为自变量，以步骤S2得到的药效评价指标作为因变量，选用径向基函数RBF，留一法检验优化相关参数，采用网格参数寻优函数SVMcgForRegress对c、g进行自动寻优，得到谱-效模型。进一步地，所述葛根芩连汤包括以下原料及其重量份数：葛根160～240份、黄芩68～82份、黄连68～82份和甘草35～60份；所述步骤S1中5个洗脱部位的制备方法包括以下步骤：取质量比为8：3：3：2的葛根、黄连、黄芩和甘草，先将葛根煎煮20min，过滤，将滤渣和剩余三味药用药材重量10倍量的水煎煮2次，第一次1h，第二次30min，合并2次滤液，过滤，浓缩至浓度为1～1.2g/ml，得葛根芩连汤，上大孔树脂柱，依次用10％、30％、50％、70％和95％乙醇洗脱，收集洗脱液，得5个洗脱部位。更进一步地，所述步骤S1中梯度洗脱具体条件为：0～5min，流动相A为92～87％；5～40min，流动相A为87～78％；40～41min，流动相A为78～78％；41～43min，流动相A为78～75％；43～57min，流动相A为75～70％；57～65min，流动相A为70～65％；65～70min，流动相A为65～63％；70～79min，流动相A为63～58％；79～86min，流动相A为58～55％；86～101min，流动相A为55～50％。进一步地，所述步骤S1中对照品包括葛根素、大豆苷、槲皮素、黄芩苷、阿魏酸、小檗碱和药根碱。更进一步地，所述步骤S2的NMR-1H谱图检测条件为：探头温度为298K，选用Carr-Purcell-Meiboom-Gill脉冲序列，采样点数为32k，采集累加次数128次，总回波时间为100ms，延迟时间设为3s，谱宽10KHz。进一步地，所述步骤S2中校正的对照峰为乳酸峰。更进一步地，所述步骤S2用AMIX软件对所有的血清NMR-1H谱图进行积分，积分区间为δ0.50～9.00，积分间隔为0.004ppm，将区间δ4.70～5.20的积分值设为零。进一步地，所述步骤S2中标志性血清代谢物包括脂质、丙氨酸、乙酸、氧化三甲胺/甜菜碱、牛磺酸、甘氨酸、乳酸、丙酮酸和甘油。更进一步地，所述步骤S3中c＝0.9973，g＝1.0027。另外的，本专利技术还提供了所述方法在研究葛根芩连汤、葛根芩连片、葛根芩连丸改善胰岛素抵抗的物质基础中的应用。本专利技术采用高效液相色谱得到葛根芩连汤的活性物质数据，进行动物试验，设置空白、阳性对照组和模型组与葛根芩连汤有效部位群组进行比较，得到葛根芩连汤的药效数据，将活性物质数据和药效数据通过SVR建立谱-效关系模型，可明确的反应出葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础。由图3和图4可以看出，37号峰葛根素、50号峰大豆苷、107号峰药根碱、139号峰槲皮素、125号峰小檗碱、70号峰阿魏酸和119号峰黄芩苷与葛根芩连汤改善胰岛素抵抗呈正相关关系，其含量越高，葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的效果越显著，在后续的研究中可以开发增加上述生物活性物质的组方配比、提取方法，或以上述活性物质作为葛根芩连汤的质量标准指标。本专利技术具有以下优点：(1)本专利技术基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法，操作简单，可以快速、准确地知晓葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础，为后续葛根芩连汤的二次开发奠定了坚实的基础。(2)本专利技术基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法，采用高效液相色谱得到葛根芩连汤的活性物质数据，进行动物试验，设置空白、阳性对照组和模型组与葛根芩连汤有效部位群组进行比较，得到葛根芩连汤的药效数据，将活性物质数据和药效数据通过SVR建立谱-效关系模型，可明确的反应出葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础。附图说明图1为11个葛根芩连汤有效部位群组的指纹图谱。图2为空白对照组、模型组、阳性对照组和葛根芩连汤有效部位第11组的血清PCA图。图3为指纹图谱169个特征峰与药效SVR结果图。图4为葛根芩连汤的指纹图谱，其中，A为葛根芩连汤有效部位第4组，B为葛根芩连汤有效部位第5组，C为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、葛根芩连汤化学成分色谱数据库的构建：制备葛根芩连汤，上大孔树脂柱，用不同浓度的乙醇进行洗脱，得5个洗脱部位，采用均匀设计试验法制得化学组成和含量具有一定差异的11个葛根芩连汤供试品；采用高效液相色谱法，以0.15％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，获得上述供试品的指纹图谱，共筛选出169个特征峰并根据对照品积分计算相对峰面积；S2、药效学评价数据库的构建：建立胰岛素抵抗模型、设置空白对照组、阳性对照组、模型组和葛根芩连汤供试品群组，给予每组相应的试剂，试验结束后采集血清的NMR‑1H谱图，对血清的NMR‑1H谱图进行相位和基线校正，用AMIX软件对所有的血清NMR‑1H谱图进行积分，并根据积分进行归一化处理，用于模式识别分析，筛选与药效关联性好、灵敏度高及个体差异小的内源性代谢物作为药效评价指标，构建药效评价指标数据库；S3、基于SVR方法建立谱‑效模型：采用SVR方法，以步骤S1得到的169个特征峰的相对峰面积作为自变量，以步骤S2得到的药效评价指标作为因变量，选用径向基函数RBF，留一法检验优化相关参数，采用网格参数寻优函数SVMcgForRegress对c、g进行自动寻优，得到谱‑效模型。...

【技术特征摘要】
1.基于SVR研究葛根芩连汤改善胰岛素抵抗的物质基础的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、葛根芩连汤化学成分色谱数据库的构建：制备葛根芩连汤，上大孔树脂柱，用不同浓度的乙醇进行洗脱，得5个洗脱部位，采用均匀设计试验法制得化学组成和含量具有一定差异的11个葛根芩连汤供试品；采用高效液相色谱法，以0.15％甲酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，获得上述供试品的指纹图谱，共筛选出169个特征峰并根据对照品积分计算相对峰面积；S2、药效学评价数据库的构建：建立胰岛素抵抗模型、设置空白对照组、阳性对照组、模型组和葛根芩连汤供试品群组，给予每组相应的试剂，试验结束后采集血清的NMR-1H谱图，对血清的NMR-1H谱图进行相位和基线校正，用AMIX软件对所有的血清NMR-1H谱图进行积分，并根据积分进行归一化处理，用于模式识别分析，筛选与药效关联性好、灵敏度高及个体差异小的内源性代谢物作为药效评价指标，构建药效评价指标数据库；S3、基于SVR方法建立谱-效模型：采用SVR方法，以步骤S1得到的169个特征峰的相对峰面积作为自变量，以步骤S2得到的药效评价指标作为因变量，选用径向基函数RBF，留一法检验优化相关参数，采用网格参数寻优函数SVMcgForRegress对c、g进行自动寻优，得到谱-效模型。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述葛根芩连汤包括以下原料及其重量份数：葛根160～240份、黄芩68～82份、黄连68～82份和甘草35～60份；所述步骤S1中的5个洗脱部位的制备方法包括以下步骤：取质量比为8：3：3：2的葛根、黄连、黄芩和甘草，先将葛根煎煮20min，过滤，将滤渣和剩余三味药用药材重量10倍量的水煎煮2次，第一次1h，第二次30min，合并2次滤液，过滤，浓缩至浓度为1～1.2g/ml，得葛根芩连汤，上大孔树脂柱，依次用10...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨永霞，汪双红，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44