一种玉米赤霉烯酮脱毒方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种玉米赤霉烯酮脱毒方法，将Lt ‑ OMT的基因与pRS425载体连接构建重组人工质粒92 ‑ Lt‑OMT ‑ YEp ‑ Leu，将人工质粒92 ‑ Lt‑OMT ‑ YEp ‑ Leu转入感受态酵母细胞中，将酵母细胞置于Leu营养缺陷型培养基中培养，在Leu营养缺陷型培养基中加入玉米赤霉烯酮ZEN，酵母细胞合成的Lt ‑ OMT将玉米赤霉烯酮ZEN转化为3 ‑ OCH3 ‑ ZEN。本发明专利技术的ZEN被Lt ‑ OMT转化为3 ‑ OCH3 ‑ ZEN，实验证明3 ‑ OCH3 ‑ ZEN对小鼠无明显毒副作用。在酵母发酵系统中Lt ‑ OMT对ZEN的转化效率达98%以上，HPLC分析几乎无底物残留。

A detoxification method of zearalenone

The invention belongs to the field of biotechnology, and relates to a detoxification method of zearalenone. The recombinant artificial plasmid 92 Lt OMT YEp Leu is constructed by connecting the gene of Lt OMT YEp Leu with the vector of pRS425. The artificial plasmid 92 Lt OMT YEp Leu is transferred into the competent yeast cells, and the yeast cells are cultured in the Leu nutrition deficient medium. Zearalenone ZEN was added to defective medium, and Lt OMT synthesized by yeast cells transformed zearalenone ZEN into 3 OCH3 ZEN. The ZEN of the invention is transformed into 3 OCH3 ZEN by Lt OMT. The experiment proves that 3 OCH3 ZEN has no obvious toxic and side effects on mice. In yeast fermentation system, the conversion efficiency of ZEN by Lt OMT is over 98%, and there is almost no substrate residue in the analysis by HPLC.

【技术实现步骤摘要】
一种玉米赤霉烯酮脱毒方法
本专利技术属于生物
，涉及一种玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)脱毒方法，该方法利用一种可可毛色二孢菌(Lasiodiplodiatheobromae)的氧甲基转移酶(LasiodiplodiatheobromaeOxymethyltransferase,Lt-OMT)将玉米赤霉烯酮ZEN的3位羟基(-OH)转化为氧甲基(-OCH3)。
技术介绍
玉米赤霉烯酮(ZEN)主要是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、三线镰刀菌(F.tricinctum)、黄色镰孢(F.culmorum)、木贼镰孢(F.equiseti)、半裸镰孢(F.sernitectum)、茄病镰孢(F.solani)等真菌产生的次级代谢产物，广泛存在于谷物及其制品中。玉米赤霉烯酮ZEN具有类雌激素作用，可与动物机体雌激素受体结合，诱发生殖毒性和致畸、致癌作用，严重影响动物繁殖性能，另外，玉米赤霉烯酮ZEN可导致机体免疫抑制、肝肾损伤、消化吸收障碍等危害。目前我国粮食作物种植、收购、加工规模化程度不高，个人或小型企业在作物或其制品加工、运输或储存过程中霉菌防本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玉米赤霉烯酮脱毒方法，其特征在于：利用可可毛色二孢菌的氧甲基修饰酶Lt‑OMT将玉米赤霉烯酮的3位羟基(‑OH)替换为氧甲基基团(‑OCH3)。

【技术特征摘要】
1.一种玉米赤霉烯酮脱毒方法，其特征在于：利用可可毛色二孢菌的氧甲基修饰酶Lt-OMT将玉米赤霉烯酮的3位羟基(-OH)替换为氧甲基基团(-OCH3)。2.根据权利要求1所述的一种玉米赤霉烯酮脱毒方法，其特征在于：将Lt-OMT的基因与pRS425载体连接构建人工重组质粒92-Lt-OMT-YEp-Leu，将人工重组质粒92-Lt-OMT-YEp-Leu转入感受态酵母细胞中，将酵母细胞置于Leu营养缺陷型培养基中培养，在Leu营养缺陷型培养基中加入玉米赤霉烯酮实现共培养，酵母细胞合成的Lt-OMT将玉米赤霉烯酮转化为3-OCH3-ZEN，反应式为：3.根据权利要求2所述的一种玉米赤霉烯酮脱毒方法，其特征在于：具体步骤为：(1)基因克隆：根据Lt-OMT的核苷酸序列设计正链和反链引物，通过PCR的方法，获得目的基因Lt-OMT；(2)重组质粒的构建：①利用限制性内切酶NdeI、PmeI酶切Lt-OMTPCR产物和pRS425载体，通过T4DNA连接酶将酶切后Lt-OMT基因片段与酶切后pRS425载体连接构建重组质粒92-Lt-OMT-Yep-Leu；②将重组质粒92-Lt-OMT-Yep-Leu导入感受态大肠杆菌DH5α细胞中表达，碱裂解法提取质粒，利用NdeI和PmeI酶切质粒后进行琼脂糖电泳验证目的基因是否完整；(3)酵母转化：将构建的92-Lt-OMT-Yep-Leu重组质粒导入感受态酵母细胞BJ5464-NpgA中；(4)玉米赤霉烯酮和酵母转化子共培养：将10mg玉米赤霉烯酮置于含有酵母转化子的营养缺陷型-Leu培养液中培养48h；所述酵母转化子为含有1μg92-Lt-OMT-Yep-Leu重组质粒的酵母细胞；(5)发酵产物提取：(6)纯化转化产物：通过硅胶柱层析法，用不同比例的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李金贵，刘明江，时从来，韩一晴，徐玉泉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32