嵌合蜘蛛丝及其用途制造技术

本申请涉及嵌合蜘蛛丝及其用途。披露了被工程化为拥有并表达嵌合蜘蛛丝蛋白基因的转基因蚕，该基因编码具有对于蜘蛛丝弹性和/或强度基序序列是特定的蜘蛛丝结构域的嵌合蜘蛛丝蛋白。还提供了具有相对于天然蚕丝纤维改进的强度(张力)和弹性特征的改进的蚕丝纤维。还提供了采用在此披露的转基因蚕制备嵌合丝纤维的改进的方法，该方法采用基于piggyBac的载体系统和辅助质粒。提供了基因表达盒，且其用于创造多种合成的蜘蛛丝编码序列(蜘蛛2、蜘蛛4、蜘蛛6、蜘蛛8)。在辅助质粒的存在下，使用piggyBac载体系统转化突变的蚕，以将嵌合蜘蛛丝基因合并入蚕中以提供稳定的转化体。因而这些转基因蚕提供了适于丝纤维的商业生产的有效的蜘蛛丝生产有机体。

Chimeric Spider Silk and Its Use

This application relates to chimeric spider silk and its use. Transgenic silkworms engineered to possess and express a chimeric spider silk protein gene encoding a chimeric spider silk protein whose elastic and/or strength motif sequence is a specific spider silk domain are disclosed. The improved silk fibers with improved strength (tension) and elasticity characteristics relative to natural silk fibers are also provided. An improved method for preparing chimeric silk fibers by using the transgenic silkworm disclosed herein is also provided. The method uses a vector system based on piggyBac and an auxiliary plasmid. Gene expression boxes are provided and used to create a variety of synthetic spider silk coding sequences (spider 2, spider 4, spider 6, spider 8). In the presence of auxiliary plasmids, the mutant silkworm was transformed by piggyBac vector system to incorporate chimeric spider silk genes into silkworm to provide stable transformants. Therefore, these transgenic silkworms provide effective spider silk production organisms suitable for commercial production of silk fibers.

【技术实现步骤摘要】
嵌合蜘蛛丝及其用途本申请是申请日为2011年9月28日，申请号为201180057127.1，专利技术名称为“嵌合蜘蛛丝及其用途”的申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请是在2011年9月28日提交的国际申请号PCT/US2011/053760的延续案，该申请要求对2010年9月28日提交的美国临时专利申请号61/387,332在35U.S.C.§119(e)下的优先权，其披露通过引用结合在此。关于联邦赞助的研究或发展的声明由于工作受来自国家生物医学成像和生物工程研究所，美国国立卫生研究院(DLJ)的批准号R21EB007247的支持，美国政府可以拥有对本申请中的技术的权利。共同研究协议是在圣母大学研究部(MJF)内签订，以及与KraigBioCraft实验室公司(MJF)签订了一个研究协议。序列表通过引用的结合创建于2013年3月21日、修改于2013年3月21日的、文件大小为180,265字节的、包含在文件“[127191_0011_US_ST25]”中的序列表通过引用以其全文结合在此。国际申请号PCT/US2011/053760的序列表以及美国临时专利申请号61/387,332本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸，所述核酸包含：(a)5’末端piggyBac转座子的重复区；(b)包含家蚕丝心蛋白重链(fhc)‑基因的主启动子、上游增强子元件(UEE)和基础启动子的序列；(c)编码嵌合蜘蛛丝多肽的序列，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽以从N末端到C末端的方向包含：家蚕丝心蛋白重链(fhc)丝多肽的N‑末端片段；一个或更多个选自由弹性基序序列和强度基序序列组成的组的蜘蛛丝基序序列；以及家蚕fhc丝多肽的C‑末端片段；其中所述一个或更多个蜘蛛丝基序序列包括蜘蛛丝基序序列的14至42个重复片段，每个重复片段以从N末端到C末端的方向包括8至16个拷贝的弹性基序序列(E)和一个拷贝的强度基序序列(S)；其中所述...

【技术特征摘要】
2010.09.28 US 61/387,3321.一种核酸，所述核酸包含：(a)5’末端piggyBac转座子的重复区；(b)包含家蚕丝心蛋白重链(fhc)-基因的主启动子、上游增强子元件(UEE)和基础启动子的序列；(c)编码嵌合蜘蛛丝多肽的序列，其中所述嵌合蜘蛛丝多肽以从N末端到C末端的方向包含：家蚕丝心蛋白重链(fhc)丝多肽的N-末端片段；一个或更多个选自由弹性基序序列和强度基序序列组成的组的蜘蛛丝基序序列；以及家蚕fhc丝多肽的C-末端片段；其中所述一个或更多个蜘蛛丝基序序列包括蜘蛛丝基序序列的14至42个重复片段，每个重复片段以从N末端到C末端的方向包括8至16个拷贝的弹性基序序列(E)和一个拷贝的强度基序序列(S)；其中所述弹性基序序列包含鞭状样弹性基序序列；并且其中所述强度基序序列是牵丝强度基序序列；(d)包含家蚕丝心蛋白重链(fhc)-基因的转录终止位点和聚腺苷酸化位点的序列；和(e)3’末端piggyBac转座子的重复区。2.如权利要求1所述的核酸，其中所述弹性基序是鞭状丝弹性基序GPGGA(SEQID号:2)，并且所述牵丝强度基序是牵丝强度基序GGPSGPGSAAAAAAAA(SEQID号:3)。3.如权利要求2所述的核酸，其中蜘蛛丝基序的至少一个所述重复片段选自由以下组成的组：包含一个拷贝的SEQID号:43和一个拷贝的SEQID号:3的序列；和包含一个拷贝的SEQID号:41和一个拷贝的SEQID号:3的序列。4.一种包括如权利要求1-3中任一项所述的核酸的载体。5.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：马尔科姆·詹姆斯·弗雷泽，兰迪·刘易斯，唐·贾维斯，金佰利·汤普森，约瑟夫·赫尔，苗云根，弗洛伦斯·特磊，宋丰熙，金荣洙，
申请(专利权)人：圣母大学，
类型：发明
国别省市：美国,US