一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法。本发明专利技术从药用植物丹参中克隆得到一条SmMYB2转录因子，通过构建植物过表达及抑制表达载体，遗传转化丹参叶片外植体，获得转基因毛状根；利用QRT‑PCR分析转基因株系中丹酚酸、丹参酮及花青素合成途径中关键酶基因的表达；运用高效液相色谱法分析转基因株系中丹酚酸及丹参酮的含量；利用分光光度计测定转基因植株中花青素的含量。与现有技术相比，本发明专利技术解析了SmMYB2调控丹酚酸及花青素生物合成的机制，提供了一种提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，为生产具有重要临床需求的丹酚酸提供了一种新型优质原料，也为提高花青素等其他物质提供了一种新的思路。

A Method of Transforming SmMYB2 Gene to Increase Salvianolic Acid and Anthocyanin Content in Salvia Miltiorrhiza

The invention relates to a method for transfecting SmMYB2 gene and simultaneously improving salvianolic acid and anthocyanin content in Salvia miltiorrhiza. The invention clones a SmMYB2 transcription factor from the medicinal plant Salvia miltiorrhiza, transforms the leaf explant of Salvia miltiorrhiza by constructing plant over-expression and inhibition expression vector, and obtains the transgenic hairy root; uses QRT-PCR to analyze the expression of key enzymes genes in salvianolic acid, tanshinone and anthocyanin synthesis pathway of the transgenic strain; and uses high performance liquid chromatography to analyze the expression of key enzymes in the transgenic strain. The contents of salvianolic acid and Tanshinone in transgenic plants were determined by spectrophotometer. Compared with the existing technology, the invention has analyzed the mechanism of SmMYB2 regulating salvianolic acid and anthocyanin biosynthesis, provided a method for improving salvianolic acid and anthocyanin content in Salvia miltiorrhiza, provided a new high-quality raw material for the production of salvianolic acid with important clinical needs, and provided a new idea for improving anthocyanin and other substances.

【技术实现步骤摘要】
一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法
本专利技术属于基因工程
，涉及一种转SmMYB2基因提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法。
技术介绍
MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一，在其N端都含有保守的MYB结构域。MYB结构域是由1-4个大约52个氨基酸(aminoacid，X)的不完全重复序列(MYBrepeats，R)构成，每个重复序列包含3个α-螺旋(helix，H)，其中第2个和第3个螺旋形成1个螺旋-转角-螺旋(helix-turn-helix，HTH)的结构，含有3个保守的色氨酸(tryptophan，W)残基。根据MYB结构域R个数的不同，MYB可以分为四类：(1)只含有一个R(R1/2)蛋白；(2)含有2个重复R的R2R3-MYB蛋白；(3)含有3个R的R1R2R3-MYB蛋白；(4)含有4个R的MYB蛋白。植物中最多的MYB转录因子为R2R3-MYB转录因子，可调控初级和次级代谢、参与环境胁迫反应、调控植物的生长和发育。在拟南芥中，bHLH转录因子GLABRA3(GL3)，WD40蛋白TRANSPARENTTESTA8(TT8)和R本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，在丹参中过表达SmMYB2。

【技术特征摘要】
1.一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，在丹参中过表达SmMYB2。2.根据权利要求1所述一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用基因克隆的方法从丹参中克隆获得SmMYB2基因；构建SmMYB2的亚细胞定位载体；构建植物过表达载体pCAMBIA2300+-SmMYB2及抑制表达载体pCAMBIA2300+-SmMYB2-SRDX；将所得的植物表达载体pCAMBIA2300+-SmMYB2及pCAMBIA2300+-SmMYB2-SRDX转化发根农杆菌，获得用于转化丹参的发根农杆菌菌株；利用所构建的发根农杆菌菌株遗传转化丹参外植体，获得经PCR检测为阳性的转基因毛状根克隆；经PCR检测为阳性的转基因毛状根克隆中，转SmMYB2基因提高丹参中丹酚酸及花青素含量。3.根据权利要求1或2所述一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，所述SmMYB2基因序列为SEQIDNO.1所示的DNA序列。4.根据权利要求2所述一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，构建SmMYB2的亚细胞定位载体所用载体为pMON530。5.根据权利要求2所述一种转SmMYB2基因同时提高丹参中丹酚酸及花青素含量的方法，其特征在于，构...

【专利技术属性】
技术研发人员：开国银，周伟，黄芬芬，陆孙杰，时敏，邓昌平，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，上海师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33