一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法和应用，所述cam和ompA双基因共表达菌株构建方法，按照cam基因和ompA基因的PCR扩增、cam基因和ompA基因连接质粒以及转化表达菌和目的基因的共表达的步骤依次进行。本发明专利技术所提供的构建方法简单，过程易于控制，PCR扩增过程中所用引物特异性强，双基因与质粒连接的过程简单，共表达菌株中含有cam和ompA双基因，双基因表达的成功率高；双基因共表达的Camp蛋白和OmpA蛋白具有交叉免疫保护能力，在临床上能更好地预防鸭疫里默菌病。

Construction and Application of a Cam and ompA Co-expressing Strain

The invention discloses a construction method and application of a cam and ompA co-expression strain. The construction method of the cam and ompA co-expression strain is carried out in sequence according to the steps of PCR amplification of cam gene and ompA gene, the connecting plasmid of cam gene and ompA gene, and the co-expression of transformed expression strain and target gene. The construction method provided by the invention is simple, the process is easy to control, the primers used in the process of PCR amplification are specific, the process of connecting double genes with plasmids is simple, the co-expression strain contains cam and ompA double genes, and the success rate of double gene expression is high; the co-expression of Camp protein and OmpA protein with double genes has the ability of cross-immune protection, and can better prevent Rimmer in duck plague clinically. Mycosis.

【技术实现步骤摘要】
一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法和应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种双基因表达菌株的构建方法及其应用，具体地说是一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法和应用。
技术介绍
鸭疫里默菌（Riemerellaanatipestifer，RA）能感染鸭、鹅、火鸡及猪和狗等多种动物，主要侵害1-8周龄特别是2-5周龄的雏鸭。一旦感染鸭疫里默菌病，可造成鸭饲料转化率低、生长发育迟缓及高发病率和高死亡率等不良影响，因此鸭疫里默菌病已成为危害养鸭业最严重的疾病之一，给养鸭业带来严重的经济损失。而该病呈全球流行，计有21个血清型。目前国内报道RA流行菌株的血清型有1，2，3，4，5，6，7，8，10，11，13，14，15型，且各血清型之间没有交叉免疫保护作用，因此目前现有技术广泛应用的灭活疫苗、弱毒疫苗的治疗效果低，而亚单位疫苗即通过化学分解或有控制性的蛋白质水解方法，提取细菌、病毒的特殊蛋白质结构，筛选出的具有免疫活性的片段制成的疫苗，因其不含核酸，安全性好，可为多种血清型RA提供交叉免疫保护，并且可与抗生素同用，所以成为预防RA最理想的疫苗，具有广阔的市场前景。ca本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于：它按照如下步骤依次进行：（1）cam基因和ompA基因的PCR扩增提取血清Ⅰ型和Ⅱ型鸭疫里默菌Riemerella anatipestifer，RA基因组DNA，cam基因以血清Ⅱ型RA基因组DNA为模板进行PCR扩增，ompA基因以血清Ⅰ型RA基因组DNA为模板进行PCR扩增；（2）cam基因和ompA基因连接质粒将扩增纯化后的cam基因和ompA基因分别通过限制性内切酶酶切，所得ompA目的基因和cam目的基因依次连接至同样限制性内切酶酶切后的表达载体中，转化，筛选阳性克隆，提取质粒；（3）转化表达菌及目的基因的共表达将步骤（...

【技术特征摘要】
1.一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于：它按照如下步骤依次进行：（1）cam基因和ompA基因的PCR扩增提取血清Ⅰ型和Ⅱ型鸭疫里默菌Riemerellaanatipestifer，RA基因组DNA，cam基因以血清Ⅱ型RA基因组DNA为模板进行PCR扩增，ompA基因以血清Ⅰ型RA基因组DNA为模板进行PCR扩增；（2）cam基因和ompA基因连接质粒将扩增纯化后的cam基因和ompA基因分别通过限制性内切酶酶切，所得ompA目的基因和cam目的基因依次连接至同样限制性内切酶酶切后的表达载体中，转化，筛选阳性克隆，提取质粒；（3）转化表达菌及目的基因的共表达将步骤（2）所提取的质粒通过热激法转入表达菌株中，经PCR检测的阳性菌株进行冻存及目的蛋白诱导表达。2.如权利要求1所述的一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于：步骤（1）中所述cam基因PCR扩增的引物序列为：上游引物：5’-ACGCGTCGACATGAAACAATCTATTATCTTAGG-3’下游引物：5’-ATTTGCGGCCGCTTACTTTACATTTAACTCATATC-3’。3.如权利要求1所述的一种cam和ompA双基因共表达菌株的构建方法，其特征在于：步骤（1）中所述ompA基因PCR扩增的引物序列为：上游引物：5’-ACGCGACGTCATGGGTAAAGAATTTATGTTG-3’下...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨锴，石虎，王振华，马兴树，陈淑芳，杨广平，
申请(专利权)人：河北科星药业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13