一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基及方法技术

本发明专利技术公开了一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基及方法。培养基中含有茶叶浸出液、土豆浸出液、蒸馏水、海藻糖、CaCl2和NaCl；所述茶叶浸出液、土豆浸出液和蒸馏水的体积比为（1.5—2.5）：（2.5—3.5）：（2.5—3.5）组成；每1000mL培养基中海藻糖的含量为0.4—0.6g；每1000mL培养基中CaCl2的含量为0.5—1.5g；每1000mL培养基中NaCl的含量为25—35g；所述茶叶浸出液的制备方法为：将150—250g绿茶叶用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得茶叶浸出液；所述土豆浸出液的制备方法为：将150—250g土豆用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得土豆浸出液。

A Culture Medium and Method Suitable for Isolation and Culture of Mycocystis crown

The invention discloses a culture medium and a method suitable for isolating and culturing Mycobacterium coronarium. The medium contains tea extract, potato extract, distilled water, trehalose, CaCl 2 and NaCl; the volume ratio of tea extract, potato extract and distilled water is (1.5-2.5): (2.5-3.5): (2.5-3.5) composition; trehalose content is 0.4-0.6 g per 1000mL medium; CaCl 2 content is 0.5-1.5 g per 1000mL medium; NaCl 2 content is 0.5-1.5 g per 1000mL medium. The preparation method of the tea extract is as follows: boiling 150-250g green tea with 1000 mL distilled water for 10-20 minutes, filtering and removing residue to obtain tea extract; the preparation method of the potato extract is: boiling 150-250g potatoes with 1000 mL distilled water for 10-20 minutes, filtering and removing residue to obtain potato extract.

【技术实现步骤摘要】
一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基及方法
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基及方法。
技术介绍
黑茶是六大基本茶类之一，属于后发酵茶，能够随时间的推移慢慢地陈化、香醇，有助消化减肥和补充各类维生素、微量元素。以前黑茶作为边销茶多数销往西北、西南市场，其饮用人群主要是食用牛肉、羊肉、奶酪等高脂肪食物和缺少蔬菜、水果的边疆少数民族。如茯茶、藏茶、普洱等一直主销边疆地区。边销特征最明显的要数茯砖茶。近年来随着对黑茶的降脂、降血压及减肥功效的了解和研究，黑茶在中国台湾、日本及我国广大地区受到消费者重视和喜爱。黑茶在众多茶种类中，以其独具特色的冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)及突出的降脂减肥功效而闻名，冠突散囊菌的大小，多少，分布广泛与否是最直接的判断获砖茶质量的标准。由于冠突散囊菌的存在，使得获砖茶的色、香、味得以不同于其他茶类，并且具有抗氧化促消化降脂减肥、抑菌、抗癌保健功效，使人们日益重视冠突散囊菌的功能研究。黑茶中的冠突散囊菌----俗称“金花”，属于散囊菌目发菌科散囊菌属的一种真菌，可生长在土壤、茶叶、冬虫夏草、中药片等基物上，也是茯砖茶在特定温湿度条件下，通过“发花”工艺长成的自然益生菌体。在国家标准中，茯砖茶是唯一要求“冠突散囊菌”这项指标的黑茶类品种。冠突散囊菌是小冠曲霉（Aspergiluscristatellus）的有性型，在茶叶中形成的“金花”有一种黄花的淡淡的清香味道；而泡饮时，那种花香便融入茶汤之中，化作茶的滋味而使茶汤更加醇厚微涩，清纯不粗、口感强劲。大量的研究和文献证明，茶中“金花”，能溶解脂肪，减肥健美。具有促进调节新陈代谢、保健和病理预防作用。因其药效如土茯苓，加上茯茶的口感特别，以“茯”字命名，因此有人误以为茯茶中有茯苓的成分，其实是“金花”的菌花香和其独特的药理作用。“金花”对后发酵茶品质不但没有影响，反而“金花”能分泌茶叶中的淀粉酶和氧化酶，可催化茶叶中的淀粉转化为单糖，催化多酚类化合物质氧化，使茶叶汤色变棕红，消除粗青味。在口味上更加醇和爽口，甜滑回甘。近年来对于冠突散囊菌促消化、降血脂、溶解脂肪、调节糖类代谢等多方面的功效研究成为热点。有关冠突散囊菌的分离、培养、菌的生理特性、功性和有关成分代谢产物的研究较多，对于黑茶产业，优质和多功效的冠突散囊菌的选育及产业化培养也是重要的研究内容。刘石泉等采用改良PDA培养基平板梯度稀释法对“金湘益’，牌获砖茶中的真菌进行了分离纯化和计数。实验共分离得到了5种真菌，其中优势菌为蜡叶散囊菌(Eurotiumherbariorum)。黄浩等将从2008年的金湘益牌获砖茶中分离纯化得到的“金花”菌在PDA培养基上培养，并选取长势较好的“金花”菌进行继代培养。之后将其转接于20%蔗糖察氏培养基和察氏培养基上，恒温28℃培养并观察、记录，最后鉴定为散子囊菌属(EurotiumlinkexFires)冠突散囊菌。刘作易等用PDA,CZqM3Y,M40Y和40%蔗糖蛋白脉培养基对冠突散囊菌进行培养，通过观察菌落特征，证明了冠突散囊菌在繁殖过程中分泌了褐色水溶性色素，这些色素可以改善茶汤颜色，同时在生长良好时产生浓郁香气，增加茶香的同时减少了茶叶中的青草气味，改善茶叶品质。杨抚林等对冠突散囊菌的生长条件进行了研究和阐述，对“金花”菌液体发酵工艺进行了优化研究，为今后的冠突散囊菌相关研究提供了理论支持。曹聪等研究了冠突散囊菌固体培养的培养条件，发现PDA及CZG培养基均适合冠突散囊菌的培养。近年来对黑茶中的冠突散囊菌研究较多，包括对黑茶中的冠突散囊菌的分离，筛选、培养甚至产业化都有较多的研究。但对冠突散囊菌的分离培养，大多采用传统的方法和手段，有的尽管对培养基进行了一些改进，但效果不是很理想。归纳起来冠突散囊菌的分离培养存在以下几个方面的困难以和问题。1．从黑茶中或相关环境中分离筛选冠突散囊菌是一项重要的工作。由于有的茶叶存放多年，受环境条件的影响，茶叶中的冠突散囊菌处于一种相对休眠或受损伤状态，对菌的复活培养和修复显得相当重要，有的需要长时间的培养或多次培养。目前大多数分离培养，采用的传统的琼脂培养方法，效果不好，效率较低，而且对于大量培养和筛选都要太多繁杂。需要一种适合的大规模的培养方式。2．冠突散囊菌是在自然界存在的一种资源性的菌，我国多地及茶叶产区甚至湖南、广西、云南、湖北、四川、陕西等地类型的黑茶都有分布。类型较多，地理分布特性明显，甚至在同一地区，冠突散囊菌不同种类特性的情况。对于茶叶中不同的菌的种类或生理株型、地理株型号的研究或鉴别都急需研究一种简便宜，快速高通量的培养方式。3．黑茶的品质与金花发花的数量有关，另一方面，分离筛选优质的冠突散囊菌，直接接种到黑茶或相关的生产环境中，对于提高茶叶品质有重要作用。研究一种可进行大量菌种的筛选、培养、生长测试的方法很有必要。4，目前常用的凹玻片保湿培养，占用的体积大，长时间培养和控制污染，难以控制液体体积，而采用培养瓶进行培养，占用的空间和设施较大，难以同时进行几十个甚至上百个样本的分离培养。5．存放多年的黑茶，其含珍贵优质的冠突散囊菌，其生理活性较差，分离培养较为困难。6．大量种群的筛选工作量大，生产过程中，作为种质性的选育、保持和评价，需要进行大批量的多批次的培养筛选。需要研究一种适合的简易培养方法。7．对黑茶中的冠突散囊菌评价和确证，将是评价伏砖茶品质的重要指标，从茶叶中分离一定数量的冠突散囊菌并进行特性确证，是一项工作。8．还缺乏一种能实时对培养过程进行观察和培养方法，能真实地反映菌的生状况（避免取样带来的误差）。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基及方法。为了达到上述目的，本专利技术提供的技术方案为：所述适合于分离培养冠突散囊菌的培养基中含有茶叶浸出液、土豆浸出液、蒸馏水、海藻糖、CaCl2和NaCl；所述茶叶浸出液、土豆浸出液和蒸馏水的体积比为（1.5—2.5）：（2.5—3.5）：（2.5—3.5）组成；每1000mL培养基中海藻糖的含量为0.4—0.6g；每1000mL培养基中CaCl2的含量为0.5—1.5g；每1000mL培养基中NaCl的含量为25—35g；所述茶叶浸出液的制备方法为：将150—250g绿茶叶用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得茶叶浸出液；所述土豆浸出液的制备方法为：将150—250g土豆用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得土豆浸出液。优选地，所述茶叶浸出液、土豆浸出液和蒸馏水的体积比为2：3：3组成。优选地，每1000mL所述培养基中海藻糖的含量为0.5g；每1000mL所述培养基中CaCl2的含量为1g；每1000mL所述培养基中NaCl的含量为30g。优选地，所述茶叶浸出液的制备方法为：将200g绿茶叶用1000mL蒸馏水煮沸15min，过滤去渣即得茶叶浸出液；所述土豆浸出液的制备方法为：将200g土豆用1000mL蒸馏水煮沸15min，过滤去渣即得土豆浸出液。所述适合于分离培养冠突散囊菌的培养方法包括如下步骤：（1）准备用于培养冠突散囊菌的培养杯组件、透明封杯膜和磁珠；所述培养组件包括底座，所述底座上设本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基，其特征在于，所述培养基中含有茶叶浸出液、土豆浸出液、蒸馏水、海藻糖、CaCl2和NaCl；所述茶叶浸出液、土豆浸出液和蒸馏水的体积比为（1.5—2.5）：（2.5—3.5）：（2.5—3.5）组成；每1000mL培养基中海藻糖的含量为0.4—0.6g；每1000mL培养基中CaCl2的含量为0.5—1.5g；每1000mL培养基中NaCl的含量为25—35g；所述茶叶浸出液的制备方法为：将150—250g绿茶叶用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得茶叶浸出液；所述土豆浸出液的制备方法为：将150—250g土豆用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得土豆浸出液。

【技术特征摘要】
1.一种适合于分离培养冠突散囊菌的培养基，其特征在于，所述培养基中含有茶叶浸出液、土豆浸出液、蒸馏水、海藻糖、CaCl2和NaCl；所述茶叶浸出液、土豆浸出液和蒸馏水的体积比为（1.5—2.5）：（2.5—3.5）：（2.5—3.5）组成；每1000mL培养基中海藻糖的含量为0.4—0.6g；每1000mL培养基中CaCl2的含量为0.5—1.5g；每1000mL培养基中NaCl的含量为25—35g；所述茶叶浸出液的制备方法为：将150—250g绿茶叶用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得茶叶浸出液；所述土豆浸出液的制备方法为：将150—250g土豆用1000mL蒸馏水煮沸10—20min，过滤去渣即得土豆浸出液。2.如权利要求1所述的适合于分离培养冠突散囊菌的培养基，其特征在于，所述茶叶浸出液、土豆浸出液和蒸馏水的体积比为2：3：3组成。3.如权利要求1所述的适合于分离培养冠突散囊菌的培养基，其特征在于，每1000mL所述培养基中海藻糖的含量为0.5g；每1000mL所述培养基中CaCl2的含量为1g；每1000mL所述培养基中NaCl的含量为30g。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：石海滨，朱金国，莫瑾，左静，袁小雅，
申请(专利权)人：石海滨，湖南出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：湖南,43