以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用技术

本发明专利技术涉及以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用，具体步骤包括：采用对脐带组织进行清洗之后剪成组织段、剥离间质华通氏胶组织；利用含有DMSO的α‑MEM保护剂预处理，置于4‑10℃进行浓度平衡10‑20分钟，后低温离心，去除上清液；加入右旋糖酐或胎牛血清与含有DMSO的α‑MEM保护剂共同构成冻存液，采用程控降温或分级降温的方式对组织进行冻存。本发明专利技术的冻存方法可有效保护冻存脐带组织，而且方便进行后续的复苏操作，且复苏后的组织培养出的细胞活性与新鲜组织中的细胞无差别。

Methods, resuscitation methods and applications of cryopreservation of umbilical cord tissues for preservation of various stem cells

The present invention relates to the method, resuscitation method and application of cryopreservation of umbilical cord tissue for preservation of various stem cells. Specific steps include: cutting umbilical cord tissue into tissue segments after cleaning, stripping interstitial Walton's gum tissue; pretreatment with a MEM protectant containing DMSO, concentration balance at 4 10 C for 10 20 minutes, centrifugation at low temperature, and removal of supernatant fluid; adding dextral; Glucose anhydride or fetal bovine serum and alpha-MEM protectant containing DMSO constitute a cryopreservation solution. The tissue was frozen by programmed or graded cooling. The cryopreservation method of the present invention can effectively protect the cryopreserved umbilical cord tissue and facilitate subsequent recovery operation, and the cell viability of the resuscitated tissue cultured has no difference from that of the fresh tissue.

【技术实现步骤摘要】
以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用
本专利技术涉及生命科学
，具体涉及以冻存脐带间质组织保存多种干细胞的方法、复苏方法及应用。
技术介绍
脐带是哺乳类动物连接胎儿和胎盘的管状结构，由两条动脉和一条静脉组成，在其间隙中可以看到疏松、胶状的间充质。人脐带中的华通氏胶(Wharton’sJelly)组织可分离得到间充质干细胞(MesenchymolStemCells，MSC)、上皮干细胞(epithelialstemcell，ESC)以及内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)等多种干细胞，脐带来源的MSC具有来源广泛、取材方便、相对纯净、含量丰富及免疫原性低等优点，每15～20g脐带华通氏胶组织可以分离得到约107原代MSC。MSC目前发现的可阳性表达CD13、CD29、CD44、CD73、CD90(Thy-1)、CD105(endoglin)和CD166，但不表达CD14、CD34、CD38和CD45。2006年国际细胞治疗协会已制定并发布了MSC应具有形态学、免疫表型和诱导分化3个生物学特征指标[3]。已证实，MSC是一类可分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法，其特征在于，以冻存脐带间质组织的形式保存脐带中相关的多种干细胞，冻存方法包括以下步骤：A.华通氏胶分离：使用生理盐水洗涤脐带2‑3次，用组织剪剪去脐带两头再涮洗2次，后用尖头直剪将脐带剪成2cm的小段，之后沿其静脉血管平行方向前开小口，再用组织镊纵向撕开、展平，将3根血管以及羊膜从脐带中剥离干净，剩余华通氏胶部分用生理盐水充分洗涤3次，转移至离心管中，剪至1‑2cm3的小块；B.进行预处理：离心管中加入含有DMSO的α‑MEM保护剂浸没全部组织块，置于4～10℃进行浓度平衡10～20分钟，后离心，去除上清液，放入冻存管中；C.组织冻存：向冻存管中加入右旋...

【技术特征摘要】
1.以冻存脐带组织保存多种干细胞的方法，其特征在于，以冻存脐带间质组织的形式保存脐带中相关的多种干细胞，冻存方法包括以下步骤：A.华通氏胶分离：使用生理盐水洗涤脐带2-3次，用组织剪剪去脐带两头再涮洗2次，后用尖头直剪将脐带剪成2cm的小段，之后沿其静脉血管平行方向前开小口，再用组织镊纵向撕开、展平，将3根血管以及羊膜从脐带中剥离干净，剩余华通氏胶部分用生理盐水充分洗涤3次，转移至离心管中，剪至1-2cm3的小块；B.进行预处理：离心管中加入含有DMSO的α-MEM保护剂浸没全部组织块，置于4～10℃进行浓度平衡10～20分钟，后离心，去除上清液，放入冻存管中；C.组织冻存：向冻存管中加入右旋糖酐或胎牛血清，重悬华通氏胶小块，再加入含有DMSO的α-MEM保护剂构成冻存保护剂，后进行组织降温冻存。2.根据权利要求1所述的冻存方法，其特征在于，其中所述冻存保护剂中的DMSO的体积比为5％-15％，加入的右旋糖酐或胎牛血清占冻存保护剂总体积的体积比为50％-65％。3.根据权利要求2所述的冻存方法，其特征在于，其中所述组织降温冻存是按照程控降温方法进行，所述程控降温方法步骤为：3～6℃保持4～10min；以2～5℃/min降至-10℃，保持12～20min；以0.5～3℃/min降至-50℃，保持5～10min；以35～55℃/min降至-90℃，保持5～15min，最后将组织装入液氮保存。4.根据权利要求3所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐峰波，崔光晶，金华，生德伟，王圣川，宋现收，王肇光，
申请(专利权)人：银丰生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37