The invention discloses a detection method for Avian Leukosis Virus A, B and J subgroups in the live vaccine of Newcastle disease and infectious bronchitis. The commercial live vaccine of Newcastle disease and infectious bronchitis is filtered by DMEM after multiple dilution, and then inoculated with single layer DF 1 cells, which is replaced by DMEM containing 1% FBS after 2 hours in a 5% CO2, 37 C incubator for 6 days. The specific antigens of Avian Leukemia Virus p27 group were detected in some supernatants of cell culture, and the DNA was extracted for identification of ALV A, B and J subgroups by PCR, and IFA was detected by subgroup specific monoclonal antibodies in the cell pore of positive samples. The invention has the characteristics of sensitivity, accuracy and reliability, and has important significance for the detection and control of avian leukemia.
【技术实现步骤摘要】
鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法
本专利技术属于禽白血病病毒检测领域,尤其涉及一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法。
技术介绍
禽白血病(avianleukosis,AL)是由禽白血病病毒(avianleukosisvirus,ALV)引起的鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤病以及免疫抑制性疾病。ALV属于反转录病毒科、α反转录病毒属,分为A-K11个不同亚群,其中6个外源性(A、B、C、D、J、K)和1个内源性(E)共7个亚群可自然感染鸡,其中较常见的为A、B、J亚群,K亚群为近年来从东南亚地区固有地方品种鸡中发现的新亚群。被外源性ALV感染的鸡群除诱发死亡外,临床上多以免疫抑制、生长抑制和各器官组织出现肿瘤等为主要特征,对养禽产业造成了严重的损失。ALV的感染既可以通过垂直传播也可以通过水平传播。除此之外,相关文献报道接种了被外源性ALV污染的疫苗,不仅感染的鸡群有可能发生相应的肿瘤或对生产性能有不良影响,更严重的是会造成一些带毒鸡将ALV垂直传播给后代,从而会在下一代雏鸡中诱发更高的感染率和发病率。尽管目前部分大型种禽公司开展了对ALV的净化工作并取得成效,但临床生产中仍时有禽白血病的发生,而且表现各异,因此活疫苗中外源性禽白血病病毒的检测对于禽白血病的净化和防控具有极其重要的意义。市售商品化活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法主要是采用直接PCR的方法,但是直接PCR检测可能出现扩增出的目的片段是基因片段而不是完整的活病毒或者出现假阳性的情况。
技术实现思路
本专利技术 ...
【技术保护点】
1.一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法,其特征在于:采用DMEM对商品化鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗进行倍比稀释后过滤,然后接种单层DF‑1细胞,于5%CO2、37℃温箱中作用2h后更换为含1%FBS的DMEM培养至第6天;收集部分细胞培养上清液进行禽白血病病毒p27群特异性抗原检测并抽取其cDNA进行ALV‑A、B、J亚群的PCR鉴定;对阳性样品细胞孔用亚群特异性单抗进行IFA检测。
【技术特征摘要】
1.一种鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗中A、B、J亚群禽白血病病毒的检测方法,其特征在于:采用DMEM对商品化鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗进行倍比稀释后过滤,然后接种单层DF-1细胞,于5%CO2、37℃温箱中作用2h后更换为含1%FBS的DMEM培养至第6天;收集部分细胞培养上清液进行禽白血病病毒p27群特异性抗原检测并抽取其cDNA进行ALV-A、B、J亚群的PCR鉴定;对阳性样品细胞孔用亚群特异性单抗进行IFA检测。2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于按以下步骤操作进行:(1)无菌条件下将2mLDMEM加入商品化鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗中,对其进行溶解;(2)将溶解的疫苗使用商品化DMEM进行倍比稀释,稀释比例分别为1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64,将疫苗的各稀释液用直径为0.22μm的一次性过滤器(JETBIOFIL公司)过滤,取100μL接种于长成80%左右的单层DF-1细胞,2h后更换成含1%FBS的D...
【专利技术属性】
技术研发人员:韦平,李海娟,林璐璐,王培坤,石梦雅,谷战明,黄腾,磨美兰,韦天超,
申请(专利权)人:广西大学,
类型:发明
国别省市:广西,45
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