The present disclosure provides a triple qPCR kit and method for detecting DNA methylation. The kit consists of three combinations of primers and probes. The combination of two sets of primers and probes is a combination of primers and probes selected from two regions within the range of human SEPT9 gene sequence. The combination of another set of primers and probes is a combination of primers and probes designed with internal reference genes as targets. The kit can more sensitively and accurately determine the level or state of DNA methylation in a specific region.
【技术实现步骤摘要】
三重qPCR检测DNA甲基化的试剂盒和方法
本公开属于医药生物领域，具体而言，主要涉及DNA甲基化检测试剂盒和方法，特别是人的液体活组织检查中与大肠癌相关的目标基因Septin9(SEPT9)的DNA甲基化检测方法以及用于检测目标基因SEPT9的DNA甲基化的试剂盒。
技术介绍
大肠癌(CRC)是全世界第三大常见癌症，每年有600,000人死亡。对于CRC，早期识别和早期干预是降低死亡率的最佳方法。目前的筛查方法是结肠镜检查和大便隐血和免疫组织化学检测(gFOBT/FIT)。由于结肠镜检查的不适以及对肠道制品的厌恶，这些筛查方法并未充分使用。因此，使用可靠的非侵入性血液基础检测来评估CRC风险对于早期发现CRC可能是有价值的。DNA甲基化改变是癌症中最早的分子变化之一。肿瘤抑制基因的高甲基化已被确定为抑制基因表达并促进癌细胞生长和扩张的机制。在CRC中，SEPT9，SFRP2，TFPI2，NDRG4，BMP3和其它基因中的CpG(胞嘧啶(C)后接续鸟苷(G))的超甲基化已被认为是癌症的生物标记之一。因此，一个或多个这些基因的甲基化状态分析，可用于辅助诊断大肠癌的状...
【技术保护点】
1.一种试剂盒，其包含三组引物和探针的组合，其中两组引物和探针的组合是以选自下列人类基因序列范围内的两个区域为靶点设计的引物和探针的组合，另一组引物和探针的组合是以内部参照基因为靶点设计的引物和探针的组合：
【技术特征摘要】
2018.07.30 US 62/712,1811.一种试剂盒，其包含三组引物和探针的组合，其中两组引物和探针的组合是以选自下列人类基因序列范围内的两个区域为靶点设计的引物和探针的组合，另一组引物和探针的组合是以内部参照基因为靶点设计的引物和探针的组合：2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述两组引物和探针的组合是以SEQIDNO:1中的两个区域为靶点设计的两组引物和探针的组合，优选地，所述两组引物和探针的组合中，一组引物和探针的组合是以SEQIDNO:2为靶点设计的引物和探针的组合，以及另一组引物和探针的组合是以SEQIDNO:3为靶点设计的引物和探针的组合，和/或所述内部参照基因为β肌动蛋白基因。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其包括下列引物和探针的组合：4.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒，其中，所述引物为经修饰的引物，优选地，所述引物在其末端被修饰，更特别地，所述引物的3'末端的两个核苷酸通过硫代核苷酸化进行修饰。5.一种检测生物样本中SEPT9基因特定区域的DNA甲基化的方法，包括以下步骤：(1)对从生物样本得到的DNA进行亚硫酸氢盐处理；(2)用三组引物和探针的组合对经步骤(1)处理过的DNA进行甲基化特异性qPCR，其中两组引物和探针的组合以选自下列人类基因序列范围内的两...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩艳，霍华德·霍约恩·章，余涛，万季，宋麒，
申请(专利权)人：深圳市新合生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。